Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Элюция нуклеиновых кислот из гелей

    ЭЛЮЦИЯ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ИЗ гелей [c.153]

    Для электрофоретического разделения различных полинуклеотидов используют эффект молекулярного сита, присущий целому ряду гелей. Детальные исследования показали, что посредством электрофореза в гелях можно получить данные о некоторых характеристиках молекул нуклеиновых кислот. Так, например, методом электрофореза можно определить молекулярную массу того или иного полинуклеотида и установить, является ли он рибо- или дезоксирибонуклеотидом. Кроме того, можно выяснить, состоит ли данная молекула из одной или двух полинуклеотидных цепей, а в случае ДНК определить, какую форму имеет молекула — линейную или кольцевую. Несмотря на существование более точных физических и химических методов определения указанных свойств, электрофорез в некоторых отношениях имеет преимущество перед ними. Оно состоит в том, что электрофоретические методы относительно просты, требуют сравнительно недорогого оборудования и могут быть использованы в тех случаях, когда для анализа доступно лишь небольшое количество неочищенного материала. Некоторые физические параметры разделенных нуклеиновых кислот изучают, не прибегая к их элюции из гелей. Например, Роз-нер и др. [1115] исследовали тепловую денатурацию нуклеиновых кислот, разделенных путем электрофореза в гелях. Фраг- [c.368]


    Остающиеся в растворе нуклеиновые кислоты очищают хроматографией на колонках с гидро исиапатитом. После элюции нуклеиновых кислот частицы геля можно отделить от раствора, отфильтровав их через бумагу ватман № 52 с помощью шприца [297]. Нуклеиновые кислоты, элюированные из геля, МОЖНО осаждать бромистым це-тилтриметиламмонием [1474]. [c.387]

    Кроме того, созданы приборы, специально предназначенные для разделения нуклеиновых кислот. Малачинский [803] описал особый комплект приспособлений для элюции нуклеиновых кислот из гелей, содержащих 3% акриламида. Джэкобсон и Ло-диш [617] предложили очень простой способ выделения небольших количеств 45- и 55-РНК путем электрофореза в 10%-ном полиакриламидном геле. Вблизи нижнего конца плексигласовой трубки высверливают два расположенных напротив друг друга отверстия, и в них вставляют шланги, через которые элюирующий буфер поступает в трубку и вытекает из нее, Простран- [c.387]

    Этот выбор диктуется характером задачи, которая решается гель-фпльтрацией, и свойствами разделяемых молекул, в первую очередь их массами. Для обессоливаиия раствора макромолекул естественно использовать жесткие, достаточно мелконористые матрицы с крупными гранулами (последнее — для увеличения скорости течения), например сефадекс С-25 или биогель Р-б. Для обессоливания более мелких молекул можно воспользоваться сефадексами С-10 и С-15 или биогелями Р-2 и Р-4. Названные матрицы удобны и для смены буфера, в котором первоначально находится препарат, на тот, которым уравновешена колонка и производится элюция, или для освобождения биополимеров от радиоактивных низкомолекулярных предшественников. Близка к описанным н задача рассортировки смеси на две группы веществ — высокомолекулярных и низкомолекулярных (например, отделение белков от пептидов или нуклеиновых кислот от белков). Здесь, очевидно, следует вы- [c.133]

    Адсорбция — это процесс, обусловленный вандерва-альсовыми силами, электростатическим и гидрофобным взаимодействиями, а также стерическими факторами. Адсорбция индивидуального вещества описывается типичной изотермой адсорбции Ленгмюра, которая представляет собой гиперболу на графике зависимости концентрации растворенного вещества от количества адсорбированного вещества. Такой же кривой описывается и насыщение фермента субстратом, а также закон убывающего плодородия . Поверхностную сорбцию и элюцию неполярных веществ успешно осуществляют с помощью силикагеля, кизельгура, окиси алюминия, фло-рисила и активированного угля. Полярные макромолекулы, такие, как белки и нуклеиновые кислоты, очищают либо методом статической сорбции, либо в условиях колоночной хроматографии с использованием гидрокси-апатита, кальций-фосфатного геля или Су -модификации окиси алюминия. [c.202]


    РНК можно элюировать из соответствующих участков геля путем встряхивания кусочков геля с подходящим буфером или с помощью электроэлюции подобно тому, что делают для извлечения белков. Методы электроэлюции довольно трудоемки, особенно в тех случаях, когда такой операции приходится подвергать большое число участков геля. Элюцию буфером проводить значительно проще, однако при этом может происходить запрязнение нуклеиновых кислот некоторыми растворимыми компонентами геля. [c.386]

    В элюирующий раствор из указанных соображений иногда вводят до 1 М Na l. В других случаях, когда нет оснований опасаться агрегации молекул, элюцию ведут при физиологических концентрациях соли или даже в разбавленных буферах. Если сохранение высокой молекулярной массы элюируемой нуклеиновой кислоты не существенно, то имеет смысл измельчить ее молекулы еще в геле, обработав его суспензию ультразвуком. Это заметно ускоряет диффузию и выход нуклеиновой кислоты из геля [S huer h et al., 1975]. [c.153]

    В горизонтальном приборе для электрофореза можно вести электрофоретическую элюцию одновременно из нескольких полосок, вырезанных из препаративного геля [Wienand et al., 1979]. На рабочий столик прибора устанавливают пластину 10/о-ного геля агарозы, примерно на 2 мм более толстую, чем исходный гель, в котором проводили фракционирование нуклеиновых кислот. В этой пластине параллельно электродным резервуарам вырезают ряд прямоугольных окон. Ширина окон должна быть примерно вдвое больше, чем ширина полосок элюируемого геля. Диализные мешочки завязывают с двух концов и прорезают вдоль. В окна заливают немного рабочего буфера и укладывают диализные мешочки так, что пленка каждого из них выстилает дно и боковые стороны одного из окон, а разрез в пленке раС полагается сверху. Через эти разрезы в мешочки, заполненные тем же буфером, вносят полоски геля и укладывают их на дно [c.159]

    Назначение диализного мешочка или мембраны состоит в том, чтобы помешать вышедшей из геля нуклеиновой кислоте мигрировать дальше к аноду. Этого можно добиться и другим путем поместить на пути миграции сорбент, прочно связываюший нуклеиновую кислоту, причем сделать это так, чтобы по окончании элюции и сорбции нуклеиновой кислоты можно было бы легко извлечь сорбент из геля и уже из него простыми средствами элюировать нужный препарат. Этот вариант имеет еще и то преимущество, что сорбент может избирательно сорбировать только нуклеиновую кислоту и тем самым осуществлять ее очистку от следов агарозы и других примесей, выходящих из геля. [c.160]

    Для препаративного электрофореза ДНК и РНК в гелях агарозы Хаген использовал трубки диаметром 5,9 или 7,7 см, просто обрезав для этой цели мерные цилиндры на 1 или 2 л. Расплавленную в соответствующем буфере агарозу он заливал на высоту 12—15 см. Камера элюции на нижнем конце цилиндра была образована двумя сетками и диализной мембраной. Элюцию вели непрерывно со скоростью 0,8 мл/мин. В качестве элюента использовали нижний электродный буфер, в который для охлаждения цилиндр погружали на всю высоту геля. Буфер поступал в камеру элюции по ее периферии и отсасывался через трубку, выведенную из центра нижней сетки камеры [Hagen, 1979]. Агароза не прилипает к стеклу цилиндра, поэтому во избежание миграции нуклеиновых кислот по зазору вдоль стенок препарат вносили в углубление меньшего диаметра, чем цилиндр, сформированное на верхнем торце геля агарозы при ее застывании. Заметного перетекания буфера по зазору не происходило, так как гель находился под гидростатическим давлением столба жидкости высотой 10 см (верхний электродный буфер). Проблему нагревания геля решали путем снижения плотности тока в 3— [c.166]

    По-видимому, для препаративного электрофореза нуклеиновых кислот следует предпочесть другую систему [Polsky et al., 1978]. В этом случае разделение 35 мг рестриктазных фрагментов ДНК проводили в горизонтальной пластине агарозы сечением 45 см1 Для внесения препарата в гель и его элюции служили прямоугольные камеры, прилегающие к торцам пластины (рис. 43), Камера элюции объемом 12 мл была отделена от сле- [c.166]


Смотреть страницы где упоминается термин Элюция нуклеиновых кислот из гелей: [c.153]    [c.161]    [c.158]    [c.388]    [c.7]    [c.158]   
Смотреть главы в:

Методы исследования белков и нуклеиновых кислот Электрофорез и ультра-центрифугирование -> Элюция нуклеиновых кислот из гелей




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Нуклеиновые кислоты

Элюция белков и нуклеиновых кислот из геля



© 2024 chem21.info Реклама на сайте