РНК-лигаза

ДНК-лигазе, использованной Кораной в синтезе гена, для соединения элементов донора и акцептора требовалось применение матрицы из Е. соИ, инфицированной бактериофагом Т4. Однако была выделена менее требовательная РНК-лигаза. Она катализирует фосфорилирование З -гидроксильной группы рибоолигонук- еотида 5 -фосфатом донора. Фермент, по-видимому, не проявляет специфичности к основаниям и такие малые фрагменты как тримеры могут быть соединены им без участия матрицы. Сшиванием двух гексамеров r(Ap)s и rp(Up)5U был получен с прекрасным выходом додекамер r(Ap)s p (Up)5U [17]. [c.187]

РНК-зависимые РНК-полимеразы 4/498, 528 РНК-лигаза 3/593 [c.702]

Длинные фрагменты РНК полу чают из коротких, соединяя их с помощью РНК-лигазы. [c.301]

В итоге фрагменты Оказаки превращаются в цепи, построенные только из дезоксирибонуклеотидов. Однако на стыке двух фрагментов остаются 5 -концевой фосфомоноэфирный фрагмент первого и 3 -гидроксигруппа второго фрагмента. Их соединение в единую цепь происходит при помощи еще одного фермента, являющегося обязательным участником репликации, — ДНК-лшазы. Этот фермент катализирует соединение двух фрагментов по реакции, аналогичной описанной в 4.6 для РНК-лигазы, используя для образования промежуточного смешанного ангидрида с АМФ, который переносится либо от АТФ, либо ог ЫАВ+. В последнем случае на первой стадии реакции освобождается не пирофосфат, а никотинамидмононуклеотвд. Процесс проходит только в составе двунитевой структуры. Схема процесса может бьггь представлена в виде [c.181]

Лигирование. Катализируемое ферментом соединение (сшивка) двух фрагментов ДНК или РНК в один путем образования фосфодиэфирной связи. Соответствующие ферменты называются ДНК-(или РНК)-лигазами. [c.51]

Акцепторами в реакциях, катализируемых РНК-лигазой, могут быть ДИ-, три- и другие олигомеры, а донором — даже мономеры. Фермент" способен также использовать в качестве субстрата одноцепочечную ДНК и полезен при модификации нуклеиновых кислот и включении радиоактивных меток. [c.62]

РНК-лигаза катализирует ковалентное связывание одноцепочечных ДНК или РНК, при условии, что они содержат концевые З -ОН- и 5 -Р0<,-группы. Молекулы, содержащие З -ОН-группы, принято называть акцепторными, а 5 -Р04—донорными. В роли доноров выступают олигонуклеотиды и двухцепочечные ДНК. Минимальными донорами могут быть нуклеозид 3, 5 -дифос-фаты pNp и pdNp. Полирибонуклеотиды более эффективны в качестве акцепторов, чем полидезоксирибонуклеотиды. Трииуклеозид-дифосфаты NpNpN—ОН являются минимальными акцепторами. Эта реакция лигирования иллюстрируется схемой. [c.353]

Для изучения сплайсинга тРНК можно использовать бесклеточную систему. Реакция in vitro требует присутствия АТР, й ее можно разбить на два этапа, осуществляя сплайсинг в отсутствие АТР. Первый этап включает расщепление фосфодиэфирной связи, протекающее как необычная нуклеазная реакция. На втором этапе происходит образование связи эта реакция называется сшиванием (лигированием), а осуществляющий ее фермент на-зывается РНК-лигазой. До сих пор не известно, присуши ли нуклеазная и лигазная активности одному ферменту или разным ферментам. Две стадии реакции сплайсинга изображены на рис. 26.3. [c.318]

Примером фермента подкласса 6.5. может служить РНК-лигаза, образующаяся в клетках Е. соИ, инфицированных бактериофагом Т4, ДНК которого содержит генетическую программу для синтеза этого фермента. Этот фермент катализирует образование фосфодиэфирной связи между рибоолигонуклеотидом-донором, имеющим на 5 -конце остаток фосфорной кислоты, и рибоолигонук-леотидом-акцептором, имеющим па 3 -конце свободную 3 -гидроксигруппу, В [c.151]

Введение в З -концевое звено РНК 3, 5 -дифосфатов, меченных Р по 5 -фосфатной группе, может быть осуществлено с помощью РНК лигазы, присоединяющей субстрат к З -ОН-группе. З -Конец РНК может быть маркирован также тритием с помощью химических методов окислением перйодатом и восстановлением бортри-тидом натрия. При этом используется РНК, не содержащая З -фос-фатной группы. [c.317]

Рис. 6.12. Структура тРНК " кишечной палочки. Указаны соответствующие олигонуклеотиды. Пунктиром отмечены места сшивания РНК-лигазой.

ДНК- и РНК-лигазы. Существуют ферменты, способные соединять между собой фосфодиэфирной связью целые фрагменты ДНК или РНК. Такие ферменты называются лигазами. Из многочисленного семейства лигаз наибольшее применение получили ДНК- и РНК-лигазы, синтезирующиеся в клетках, инфицированных бактериофагом Т4. Так, Т4 ДНК-лигаза квтализирует образование фосфодиэфирной связи между З -ОН- и б -РО -группами а одноцепочечных разрывах двухцепочечиых ДНК (схема а) или между такими же группами двухцепочечных молекул ДНК, содер жащих на концах комплементарные одноцепочечные последовательности (схема б). [c.352]

РНК-лигазу широко используют для введения метки в З -кон-цевые звенья РНК. В качестве доноров служат 5 - P-мeчeныe 3, 5 -нуклеозиддифосфаты. Фермент находит применение в химикоферментативном синтезе полирнбонуклеотидов. Добавление его к ДНК-лнгазе значительно ускоряет реакцию сшивания двухцепочечных молекул ДНК. [c.353]

Синтез сравнительно коротких олигорибонуклеотидов может быть осуществлен химическим или ферментативным методом. Более длинные последовательности получают путем соединения коротких фрагментов с помощыо РНК-лигазы. [c.367]

Интересны работы Гурвица по применению РНК-лигазы. Этот фермент (аналогичный ДНК-лигазе), получаемый из фага Т4, катализирует образование эфирной связи фосфорной кислотой между 3 -и 5 -группами ОН начальной поли(А). Используя циклические поли(А), можно катализировать связывание рибоолигонуклеотидов, что позволяет перейти к объединению фрагментов РНК. [c.189]

I Освобождение АТР из комплекса с ферментом сопря- жено с самой реакцией лигирования. Если эта реакция протекает по тому же пути, что и ранее описанная реакция РНК-лигазы Т4, она будет включать два этапа. [c.319]

Альтернативный подход состоит в том, что РНК, экстрагированную из немеченых вирионов, метят по З -концу с помощью РНК-лигазы и [22Р]-цитидин-3, 5 -бисфосфата, как описано. Вертц и Дэвисом [27]. РНК можно пометить и по 5 -концу после удаления 5 -концевого фосфата щелочной фосфатазой из кишечника крупного рогатого скота, которую затем инактивируют протеиназой К. После этого РНК экстрагируют фенолом,, осаждают этанолом и метят в присутствии [- - Pj-ATP и поли-нуклеотидкиназы из Е. соИ, зараженной бактериофагом Т4. Меченую РНК затем отделяют от непрореагировавшего АТР хроматографией на колонке с сефадексом G50. Методика, удобная для мечения РНК РСВ, описана Шубертом и др. [28]. [c.152]

Фермент выделяют из клеток Е. oli, зараженных фагом Т4. С его помощью можно присоединять к З -ОН-концу РНК, но только в составе некоего 5, 3 -нуклеозиддифосфата. Присоединение идет, в отличие от ДНК-лигазы, на весу — без участия матрицы. Сфера использования фермента, вообще говоря, значительно шире он может пришить к З -ОН-концу РНК (или ДНК) любой полинуклеотид, имеющий фосфат на своем 5 -кон-це. Для введения метки на З -ОН-конец РНК в качестве донора радиоактивного фосфора чаще всего используют [5 - Ф]-фЦф. Этот нуклеозиддифосфат поставляется с УА до 3000 Ки/ммоль. Удельная ферментативная активность продажных препаратов Т4-РНК-лигазы составляет примерно 1000 ед./мг. 1 ед, фермента включает 1 ммоль устойчивого к действию фосфатазы Ф в поли(А) из [5 - Ф] олигорибоаденилата (в определенных условиях) за 30 мин при 37°. Хранить фермент следует растворенным в 0,02 М Трис-НС1 (pH 7,5) с 5 мМ р-меркаптоэтанола, [c.257]

В эту таблицу необходимо внести еще один фермент-РНК-лигазу. С его помощью осуществляется включение метки в З -концы РНК —ХрУ + рСр —>ХрУрСр (рСр содержит Р-метку).- Прим. пщ>ев. [c.64]

Молекулярная биология. Структура и биосинтез нуклеиновых кислот (1990) -- [ c.20 , c.331 ]

Молекулярная биология (1990) -- [ c.20 , c.331 ]

Общая органическая химия Т.10 (1986) -- [ c.187 ]

Биологическая химия (2002) -- [ c.151 , c.153 ]

Гены (1987) -- [ c.318 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология