Методы ферментативные

Для установления типа гликозидной связи (а- или Р-) применяют методы ферментативного гидролиза различными гидролизующими ферментами (гидролазами), мягкий кислотный гидролиз и лр. ИК-спектроскопию используют для установления конфигурации гликозидной связи, наличия в макромолекуле полисахарида тех или иных функциональных групп, а также для изучения водородных связей. В последние годы для изучения химического строения полисахаридов все большее значение приобретает метод С-ЯМР-спектроскопии. [c.283]

Метод ферментативного гидролиза растительных белков позволяет в широком диапазоне регулировать технологические параметры этого процесса и варьировать питательную ценность гидролизатов. Хотя промышленное применение ферментативного гидролиза находится еще в начальной стадии, можно констатировать, что гидролизаты растительных белков постепенно внедряются в производство различных продуктов питания. Разработка мембранных реакторов обеспечивает впечатляющее развитие технологии в этой области. Видимо, прогресс в биотехнологии и генной инженерии внесет очень существенный вклад в широкое распространение белковых гидролизатов. [c.619]

Ферменты функционируют либо в растворах, либо в надмолекулярных структурах. Сорбция реагентов, именуемых субстратами, и реакция протекают на некоторой поверхности большой молекулы белка. В этом смысле ферментативный катализ сходен с гетерогенным. Однако белок-фермент и малые молекулы субстратов находятся в одной фазе в растворе. Имеется строгая стехиометрия взаимодействия — как правило, одна белковая глобула взаимодействует с одной молекулой субстрата или другого лиганда. При взаимодействии образуется фермент-субстратный комплекс (ФСК), строение и свойства которого изучаются физическими и химическими методами. Ферментативный катализ в растворе — гомогенный катализ. [c.177]

Определение нуклеотидной последовательности ДНК методом ферментативного копирования с остановкой удлинения цепи, осуществляемого ДНК-полимеразой, [c.89]

При изучении механизмов реакций в химии широко применяется кинетический метод. Попытки использования этого метода для исследования процессов, катализируемых ферментами, предпринимались еще в начале нашего века. Однако лишь в последние десятилетия кинетика ферментативного катализа развилась в самостоятельное научное направление со своими задачами и методами. Разумеется, здесь пока еще больше нерешенных проблем, чем законченных теорий. Однако уже теперь вырисовываются интересные перспективы применения методов ферментативной кинетики как в области теории механизма действия ферментов, так и при изучении взаимодействия с ферментами биологически активных веществ,-имеющих практическое значение (лекарственные препараты, гербициды, инсектициды и т. п.). В соответствии с этим настоящая книга имеет две задачи — осветить в сравнительно сжатой форме теоретические основы кинетики ферментативного катализа и проанализировать возможности и пути практического использования кинетического метода в изучении механизма действия ферментов. [c.3]

Производство бутиловых спиртов основывается в настоящее время на методе ферментативного сбраживания веЩеств, содержащих углеводы (ацетон-бутиловое брожение), а также на методе гидрирования кротонового альдегида, получаемого, в свою очередь, конденсацией ацетальдегида небольшое количество бутилового спирта выделяется из побочных продуктов производства дивинила через этиловый спирт. [c.41]

Увеличение промышленного применения таннинов, а также изучение возможностей использования лигнинов — такова обширная программа исследований в области этих соединений. В последнее время интерес к биосинтезу растительных продуктов стимулируется значительным совершенствованием методов ферментативного исследования и возросшим применением радиоактивных изотопов, что заставляет химиков, занимающихся лигнинами и таннинами, и биохимиков, до сих пор связанных с другими исследованиями, обратить свое внимание на проблемы биосинтеза этих фенольных полимеров. В этой главе в основном рассмотрены эти проблемы. [c.285]

Процесс получения молочной кислоты методом ферментативного брожения протекает по схеме [c.490]

Черненко Т. В. Исследование строения триглицеридов методом ферментативного гидролиза. Автореферат канд. дисс. Ташкент, 1969. [c.392]

В табл. 17 приведены наименьшие количества пестицидов, которые могут быть определены методом ферментативного ингибирования в тонких слоях. Интересно, что чувствительность метода в значительной мере зависит от типа применяемого адсорбента. [c.91]

Таким образом, сочетая метод ферментативной кинетики с другими методами, можно достичь максимальных результатов в изучении механизмов реакций. [c.8]

Как уже указывалось, любая ферментативная реакция представляет собой цепь последовательных процессов, каждое звено которой характеризуется собственной константой скорости, значениями энергии активации и пространственного фактора. Поэтому, определяя экспериментально стационарную скорость ферментативной реакции при разных температурах и вычисляя по этим данным энергии активации, исследователь часто получает фиктивную величину — значение кажущейся энергии активации, которое трудно отнести к какой-то определенной стадии реакции. По этим причинам при изучении температурной зависимости результирующей скорости ферментативного процесса оказывается невозможным вычисление предэкспоненциального множителя и пространственного фактора. Все это приводит к настоятельной необходимости разработки специальных методов ферментативной кинетики, позволяющих вычислять константы скорости отдельных стадий процесса и на основе изучения их зависимости от температуры рассчитывать другие кинетические константы. [c.24]

Следует отметить, что, по-видимому, значительная часть экспериментальных работ выполнена с использованием методов ферментативной кинетики, что позволило сделать определенные заключения [c.139]

Полный ферментативный гидролиз белков осуществить трудно, так как большинство протеиназ атакует с достаточно большой скоростью только определенные тины связей (см. гл. УП). Метод ферментативного гидролиза применяется с большим успехом в тех случаях, когда необходимо провести частичный гидролиз, например при определении аминокислотной последовательности белка (см. гл. IV). [c.57]

Аминокислоты получают тремя методами ферментативным, гидролитическим и синтетическим. [c.261]

Метод ферментативного гидролиза. Навеску исследуемого вещества от 2 до 10 г поместите в колбу, добавьте в нее 10—15 мл воды [c.495]

Метод ферментативного синтеза оксинитрилов привлекает особое внимание потому, что получение оптических изомеров оксинитрилов разделением рацемата обычно представляет большие трудности - . [c.98]

МЕТОД ФЕРМЕНТАТИВНОГО ГИДРОЛИЗА [c.82]

Наибольший интерес представляют кинетическое описание протяженных кривых ферментативной деградации полимеров и выявление соответствующих кинетических закономерностей. С этим вплотную связана проблема разработки методов оценки биополимеров с точки зрения их атакуемости ферментами, а также в отношении оценки перевариваемости белков протеазами [22—25]. Иэ немногочисленных количественных данных в литературе по ферментативной деградации биополимеров видно, что для них свойственно ингибирование низкомолекулярньши продуктами реакции (см. [22, 26—32]), При этом в большинстве случаев выводы об ингибировании продуктами были сделаны при кинетическом анализе так называемых полных кривых ферментативной деградации биополимера, или протяженных участков кинетических кривых, с помощью известных методов ферментативной кинетики (например, используя интегральную форму уравнения скорости, см. [21]). В ряде случаев не исключена возможность некоторого действия ингибирования продуктами так, в работе [33] выдвинуто и обосновано положение, что формально-кинетический анализ протяженных участков кинетических кривых ферментативной деградации полимеров практически неизбежно приводит к кажущимся эффектам ингибирования продуктами, даже если продукты не связываются с ферментом и ингибирование на самом деле отсутствует. Этот эффект наблюдается для ферментов, реакционная способность которых уменьшается при увеличении степени конверсии полимерного субстрата (за счет уменьшения степени полимеризации субстрата или доли наиболее реакционноспособных (доступных) связей в молекуле полимера). Подобные ферменты составляют подавляющее большинство ферментов-деполимераз (см. табл. 1). [c.30]

По методу ферментативного гидролиза хлебопекарные дрожжи подвергают автолизу при температуре 45° С. В процессе автолиза фермент, содержащийся в дрожжах, разрушает белковые вещества протоплазмы, освобождая витамины, вхс ящие в их состав. [c.424]

В десяти образцах плазмы крови человека определили содержание глюкозы (мг/100 мл) с помощью двух методов ферментативного с фотометрической индикацией и проточно-инжекционного (ПИЛ) с использованием биосенсора на основе иммобилизованной глюкозооксидазы и с амперометрическим детектированием продукта реакции (Н2О2). Результаты анализов (в мг/100 мл) приведены в таблице. [c.445]

Нам удалось приготовить белкоэое вещество из семян люпина методом ферментативной коагуляции, отличавшееся чистым белым цветом и прекрасной плa тичнo JfJЮ. Однако эта пластичность быстро падала при тепловой денатурации протеина и сама пластическая масса не обладала должной прочностью. [c.109]

Из методов неспецифического ферментативного расщепления чаще всего применяется гидролиз пепсином, папаином, бактериальными или грибковыми протеазами. Все три типа ферментов дают гидролизаты, представляющие собой сложную смесь мелких пептидов. В связи с этим их лучше использовать на конечных этапах расщепления крупных пептидов, полученных методами специфического гидролиза. Общий обзор методов ферментативного гидролиза сделал Хилл [34] подробные сводки о действии пепсина, папаина и бактериальных протеаз опубликовали Бовей и Янари [2], Смит и Киммель [781 и Хагихара [28] соответственно. [c.35]

УКСУСНАЯ КИСЛОТА, H. OOH, Мол. вес 60,05, т. кип, 118 Использование У, к. в качестве разбавителя иногда существенно улучшает процесс ацетилирования. Эффективный метод ферментативного разделения, рассмотренный на примере о, ь-аланина (1), включает превращение (1) в о, L-N-ацетильное производное (2) и ферментативный гидролиз природного l-N-ацетил аланина, l-Аланин нерастворим в спирте и поэтому легко отделяется от растворимого в спирте N-ацетилаланина. Стадия ацетилирования связана с затруднениями, так как в очень жестких з-хловиях N-ацетильное производное (2) может частично превращаться через енол (3) в аз-лактон (4). Для точного контроля реакции 111 смесь 2г о, ь-аланпна и 5 мл У. к. нагревают в пробирке до температуры немного выше 100 и добавляют 3 мл уксусного ангидрида. Температура сначала падает до 91—95 (охлаждение при добавлении реагента), потом поднимается до 100—103 (экзотермическое ацетилирование) и затем [c.475]

В связи с распространением резистентных штаммов микроорга-ниэмов пенициллины С и V в 70-х годах утратили свое практическое значение. К этому времени были разработаны методы ферментативного и химического расщепления беизилпенициллина до 6-амино- [c.725]

Для совместного определения небольших количеств формальдегида и муравьиной кислоты применяется метод ферментативного окисления [273]. Под действием иммобилизованного фермента альдегидоксидазы формальдегид превращается в пероксид водорода, содержание которой находят с помощью хемилюминесцент-ного фотометра. Муравьиная кислота в другой пробе восстанавливается до формальдегида и т. д. [c.127]

Третий метод — ферментативный — предусматривает пропускание воды через специальную загрузку, удерживающую в активном состоянии ферменты, которые катализируют соответствующие превращения соединений-загрязнителей. Известны только отдельные случаи ферментного обезвреживания стоков, превращения токсических или биорезистентных примесей воды в нетоксические вещества, которые легко усваиваются водными организмами. Иммобилизованные ферменты имеют большую перспективу при локальном обезвреживании промышленных сточных вод, однако их применение связано со значительными трудностями, которые заключаются как в получении специальных ферментов, так и в их закреплении на поверхности загрузки. Несмотря на это, ферментативный метод, безусловно, займет надлежащее место в системе очистки воды. [c.152]

Еще 10 лет тому назад Н. Д. Иерусалимский — крупный советский микробиолог— писал Некоторые этапы химических синтезов трудны и сопровождаются образованием большого числа изомеров и побочных продуктов. В таких случаях полезную услугу могут оказать ферментные препараты или живые носители ферментов — микроорганизмы. От небиологических катализаторов они выгодно отличаются специфической направленностью своего действия. К тому же вызываемые ими биохимические процессы протекают при обычных температурах и давлении. Их осуществление не требует ни антикоррозийной аппаратуры, ни крупных энергетических затрат . В значительной мере благодаря его инициативе в СССР были начаты интенсивные исследования в области инженерной микробиологии. Однако, как уже говорилось выше, применение микроорганизмов в целях направленной трансформации органических веществ существенно ограничивалось спецификой работы с микроорганизмами или выделенными ферментами, которые требовали специальных условий для получения, сохранения и воспроизводства. В настоящее время известны пути стабилизации (иммобилизации) ферментов путем либо химической фиксации активной конформации с помощью дифункциональных (сшивающих) реагентов, либо химической прививки к полимерным носителям и даже к стеклу, либо включения в гель инертного полимера. Это позволило превратить ферменты из крайне нестойких веществ в довольно стабильные, препараты, которые могут неоднократно вводиться в реакционную массу в качестве катализатора. Более того, стало возможным, не выделяя фермент, проводить такую иммобилизацию прямо на клеточном уровне, используя выращенную культуру соответствующего микроорганизма. Все это позволяет рас-сч1итывать в ближайшие годы на широкое и эффективное В1недрение методов ферментативного превращения не только в лабораторную, но и в промышленную практику. Именно поэтому мы надеемся, что появление даже неполной сводки, составленной американскими специалистами, вызовет интерес у советского читателя. [c.6]

ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ АНАЛИЗ, количественный хим. анализ с использов. ферментов. Достоинства методов Ф. а. обусловлены избирательностью действия ферментов и их высокой активностью, позволяющей проводить анализ в мягких условиях. С помощью Ф. а. определяют в-ва, к-рые влияют яа скорость ферментативных р-ций субстраты (т. е. в-ва, претерпевающие хим. превращение), эффекторы (ингибиторы или активаторы р-ции) и сами ферменты (в первую очередь при анализе биол. жидкостей в клинич. лабораториях). Концентрацию в-ва устанавливают по абс. значению или по изменению скорости ферментативной индикаторной р-ции в присут. определяемого в-ва (кинетич. методы) концентрацию субстрата можно также рассчитать по кол-ву образовавшегося продукта после завершения р-ции или достижения равновесия (Стехиометрич. методы). Ферментативные индикаторные р-ции в зависимости от числа участвующих ферментов подразделяют на индивидуальные и сопряженные в последнем случае использ. последовательные р-ции, как правило, биферментные, когда продукт первой (вспомогательной) служит субстратом для второй (индикаторной), в к-рой образуется легко детектируемый продукт. Контроль за скоростью р-ции осуществляют электрохим., спектрофотометрич., люминесцентными и др. методами. [c.617]

Таким образом, вопрос о конкретном химическом строении участка холинэстераз в районе катионной группировки требует дальнейшего исследования. При этом необходимо иметь в виду, что использование методов ферментативной кинетики для этих целей может быть полезным только в том случае, если для сопоставления выбираются адэкватные константы, что не во всех случаях принимается во внимание. Так, например, вывод о том, что 3,3-диме-тилбутилацетат в качестве субстрата холинэстераз несущественно отличается от ацетилхолина [174—175], был основан на сопоставлении скорости гидролиза при концентрации оптимальной для каждого субстрата. При этом, следовательно, оценивалась максимальная скорость реакции, которая находится в сложной зависимости от констант скорости промежуточных стадий. Без анализа кинетики этих стадий и оценки констант субстрата или констант [c.236]

Реакции гидролиза в структурном анализе полимеров часто комбинируют с другими методами. Так, для установления структуры полисахаридов обычно применяют методы ферментативного и кислотного гидролиза, ацетолиз, меркаптолиз, пиролиз и периодатное расщепление. Окислительную деструкцию озоном широко применяют для анализа макромолекул, содержащих в цепи двойные связи. Эта реакция для ненасыщенных полимеров протекает по схеме [c.67]

Приготовление пробы. Пептиды триптического гидролиза гемоглобина могут быть получены по методу Джонса [100]. Лио-филизованную смесь пептидов растворяют в 0,3 М пиридине и доводят pH раствора до 2,2 с помощью концентрированной соляной кислоты. Другие методы ферментативного гидролиза описаны Смитом [36] и Блакбурном [34]. [c.78]

Разделение синтетических аминокислот. — Гринштейн разработала удобный метод ферментативного разделения рацематов аминокислот. Например, -аланин ацетилируют и образующееся ацетильное производное 1) -аланина обрабатывают раствором фермента, катализирующего деацетилирование. Раствор этого фермента может быть легко приготовлен из свиных почек, кусочки которых гомогенизируют с водой в гомогенизаторе Уоринга и полученный гомогени-зат центрифугируют. Прозрачный раствор, содержащий фермент, декантируют в целлофановый мешок, который опускают в проточную воду на ночь для удаления диализом растворимых небелковых компонентов. Диализованный раствор фермента вновь центрифугируют, после чего он готов для использования. Полное расщепление ацетил-Ь-аланина проходит примерно за четыре часа. Фермент действует главным образом на ацетильное производство природной аминокислоты. В результате указанной ферментативной обработки образуется смесь [c.644]

Применение, наряду с методом метилирования, методов ферментативного расщепления существенно расширило представления о строении амилопектина. Путем исследовалия остаточных декстринов, получаемых при ферментативном расщеплении амилопектина -амилазой, удалось доказать, что боковые цепи амилопектина (от концевых остатков до первых точек ветвления) длиннее, чем участки цепи между точками ветвления в центральных частях молекулы (К. Мейер). [c.614]

Реакции гидролиза фосфомоноэфирных связей, хорошо изученные для разнообразных моноэфиров фосфорной, кислоты, в том числе и природных , в ряду производных нуклеиновых кислот исследованы относительно мало. Это связано прежде всего с тем, что существуют хорошо разработанные методы ферментативного дефосфорилирования мононуклеотидов и концевых нуклеотидных звеньев в олиго- и полинуклеотидах, в то время как химические методы расщепления фосфомоноэфирных связей в рассматриваемых соединениях далеки от совершенства. [c.542]

Третьим преимуществом ионитов как катализаторов по сравнению с растворимыми кислотами и основаниями является их более высокая селективность. Эта особенность ионитовых катализаторов обеспечивает повышение выхода и качества продуктов многих реакций, а в ряде случаев дает возможность осуществить превращения, которые в условиях гомогенного кислотно-основного катализа протекают неоднозначно или с другим результатом. Например, при алкилиро-вании фенолов олефинами нормального строения в присутствии бензолсульфокислоты образуются нежелательные диалкилфенолы, а при проведении этой реакции на катионите КУ-2 в качестве основного продукта получается монозамещенный алкилфенолЧ Аналогично этому пропиленгликоль дает в присутствии той же смолы моностеарат . Производные глицеринового альдегида, содержащие эфирные фосфатные группы, в присутствии обычных катализаторов легко гидролизуются, вследствие чего конденсация триозо-фосфатов во фруктозо-1,6-дифосфат может быть осуществлена только методами ферментативного катализа или же в присутствии модифицированных цис-теином анионитов как конденсирующих агентов . Селективность ионитов ярко иллюстрируют работы советских ученых по моделированию действия протео-литических ферментов - использование карбоксильных смол дало возможность осуществлять гидролитический разрыв строго определённых связей окисленного инсулина. . - [c.14]

ВОГО замечательного достижения были разработаны химические способы последовательного отщепления N-концевых аминокислот пептидов [8]. Благодаря получению высокоочищенных препаратов карбоксипептидазы и амино-пептидазы позднее удалось разработать методы ферментативного гидролиза для определения концевых последовательностей аминокислот полипептидных цепей. Хартли и Грей [13] предложили метить N-концевые аминокислоты пептидных фрагментов 1-диметиламинонафтил- [c.100]

Основное достоинство книги Уэстли — последовательное изложение теории и методов ферментативной кинетики, начиная от простых односубстратных реакций и кончая сложными полиферментными системами. Автор, имеющий немалый опыт собственных кинетических [c.5]

Можно было бы привести много других примеров использования современных методов ферментативной кинетики. Тем, кто особенно интересуется такими исследованиями, мы рекомендуем ознакомиться с прекрасными работами Герша и Дженкса [20] поКоА-транс-феразе и Рея с сотр. [21] по фосфоглюкомутазе. [c.155]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология