Хроматограмма двумерная

Рис. 3. Двумерная бумажная хроматограмма смеси аминокислот (по Крамеру)

Рис. УП.5. Схема получения двумерной хроматограммы

На фотографии представлена хроматограмма двумерного разделения полипептидных цепей, присутствующих в экстракте Е. соИ. На хроматограмме можно обнаружить свыше 1100 раз-личных полипептидов. Вероятно, в экстракте их значительно больше, однако они не все выявляются. В настоящее время делаются попытки разделить и посчитать все полипептиды, присутствующие в различных клетках человека. [c.879]

Для получения двумерной хроматограммы направление электрического поля при повторном хроматографировании перпендикулярно первоначальному. [c.159]

Для двумерной хроматографии применяют квадратные листы бумаги размером 20 х 20, 30 х 30, 40 X 40 см. В начале опыта исследуемый раствор наносят на бумагу в ее левом углу на расстоянии 5 см от краев. После высушивания пятна бумагу помещают в сосуд для хроматографирования, опускают нижний край в один из выбранных растворителей и хроматографируют по восходящему методу. После высушивания бумагу, повернув на 90 против часовой стрелки, помещают в новый сосуд для хроматографирования, содержащий второй растворитель, и хроматографируют по восходящему методу. После проявления получают двумерную хроматограмму. [c.76]

Аппаратура для БХ включает хроматографические камеры или сосуды, стойки с лотками, пипетки для нанесения проб, приспособления для сушки, пульверизаторы, сосуды для элюента, лампы для облучения хроматограмм и др. Хроматографические камеры значительно различаются по форме и размерам, и это в большой степени зависит от характера процесса хроматографирования (восходящее, нисходящее, круговое, двумерное, препаративное), На рис. 9.15 изображена камера для восходящей хроматографии, на рис. 9.16 — аппаратура для нисходящей бумажной хроматографии. [c.239]

По. методу получения различают следующие распределительные хроматограммы на бумаге одномерные н двумерные (восходящие и нисходящие), круговые, электрофоретические. [c.284]

Для одномерных хроматограмм используют бумажные полосы шириной 4,5—5 см и длиной 30—50 см. Для получения двумерной хроматограммы применяют листы бумаги размером примерно 20 X 25— 40 X 45 см. Восходящие хроматограммы получают при перемещении подвижного растворителя через норы бумаги снизу вверх, а нисходящие— сверху вниз. [c.284]

Недостатком — то, что круговую хроматограмму лишь с большим трудом можно использовать для количественных определений. Кольца на хроматограмме имеют фор- Ри . 7.11. Двумерная бумажная му эллипсов, так как скорость всасывания хроматограмма, [c.357]

В тонкослойной хроматографии можно получать также и двумерные или круговые хроматограммы. Для градиентного элюирования применяют специальные камеры, в которых пластины помещаются на сетки. Выше сетки имеется отвод для смеси растворителей, снизу подается второй растворитель. [c.360]

Рис. 44. Одномерная (а) и двумерная (б) хроматограммы /—место нанесения пробы 2 —пятно катионов Мп +, А + 3 — пятно катионов В1 +, Ай+ 4 — пятно катионов Ре +, Со +, С<1 + (стрелками показано направление движения растворителя)

Рис. 45. Приспособление для получения двумерных бумажных хроматограмм

Для получения одномерных и двумерных восходящих хроматограмм можно воспользоваться рамкой (рис. 45) с четырьмя алюминиевыми стержнями, на. которые накалы- вают листы бумаги. Опыт проводится под стеклянным колпаком, где пространство заполняют насыщенные пары подвижного растворителя. [c.162]

Рис. 42. Схема получения двумерной хроматограммы а — хроматограмма, полученная после хроматографирования в первом растворителе б та же хроматограмма перед хроматографированием во втором растворителе в — хроматограмма, полученная после хроматографирования во втором растворителе.

Получение двумерной хроматограммы. Если при помощи одного растворителя разделить сложную смесь не удается, то последовательно применяют два растворителя, в которых [c.118]

Для получения двумерной хроматограммы применяют квадратные листы бумаги размером 20 X 20, 30 X 30 или 40 X 40 см. В начале опыта каплю исследуемого раствора наносят на бумагу в ее левом углу на расстоянии 5 см от краев (рис. 42, а). Высушив образовавшееся пятно, бумагу помещают в сосуд для хроматографирования, опуская нижний край ее в растворитель, и производят хроматографирование по восходящему методу. После того как фронт подвижной фазы достигнет верхнего края бумаги, хроматографирование прекращают, бумагу высушивают и поворачивают на 90° против часовой стрелки. При этом место нанесения капли исследуемого раствора А окажется справа, а линия, по которой происходил подъем зон анализируемых веществ,— внизу (рис. 42, б). В таком положении бумагу помещают в новый сосуд для хроматографирования, опускают ее нижний край в другой растворитель и хроматографируют по восходящему методу. После достижения фронтом новой подвижной фазы верхнего края бумаги хроматографирование прекращают, бумагу высушивают, а образовавшиеся зоны анализируемых веществ проявляют заранее выбранным раствором реагента. Получают двумерную хроматограмму, изображенную на рис. 42, в. [c.119]

Существуют следующие виды и способы получения распределительных хроматограмм одномерные и двумерные (восходящие, нисходящие) [21], круговые [22], электрофоретические [23]. [c.81]

Описанный способ успешно используется для анализа двумерных хроматограмм [99]. [c.100]

Для получения двумерной хроматограммы аминокислот вначале через бумагу с нанесенными аминокислотами пропускают подвижный растворитель — н-бутанол — уксусная кислота — вода. Когда фронт растворителя [c.113]

После удаления фенола из бумаги указанным выше способом хроматограмму проявляют 0,2%-ным раствором нингидрина в ацетоне. Для того чтобы сохранить пятна на одномерных и двумерных хроматограммах, их фиксируют 1 %-ным раствором нитрата меди в ацетоне, погружая хроматограмму в этот раствор или опрыскивая ее из пульверизатора. После фиксации пятна приобретают красно-оранжевую окраску. [c.114]

Рис. 28.и. Двумерная хроматограмма смеси аминокислот [c.616]

Раствор препарата наносят на поверхность слоя сорбента на расстоянии 0,5—1,5 см от того края пластины, с которого будет начинаться миграция элюента (при вертикальной установке — с нижнего). Препарат или препараты можно наносить в виде одного пятна, находящегося близ угла пластинки (для двумерной хроматографии), в виде серии равноотстоящих от края и равноудаленных друг от друга пятен (для сопоставления картин хроматографического фракционирования), для той же цели — в виде полосок длиной 5—I0 мм, поскольку разрешение близко расположенных полос на хроматограмме всегда лучше, чем так же расположенных пятен, [c.467]

ИЗВОДИТЬ двумерное проявление хроматограммы. Утолщением слоя адсорбента на одном конце пластинки можно получать слои, удобные для разделения веществ с малыми значениями Rf. [c.368]

Рис. 421. Схема разделения смесн 6 веществ двумерной хроматографией. а — проявление первым растворителем б — проявление вторым растворителем в перпендикулярном направлении в — готовая хроматограмма после обнаружения.

Осуществление двумерного хроматографирования по нисходящему способу уже было описано в разделе 5.2. Проявление двумерных восходящих хроматограмм можно проводить по схеме, изображенной на рис. 427. Хроматографическую бумагу скрепляют алюминиевой проволокой или нитью так, чтобы получился цилиндр. Раствор смеси разделяемых веществ наносят на бумагу вблизи одного из углов на некотором расстоянии от краев (2—3 см). Затем бумажный цилиндр ставят в чашку с первым растворителем. Когда фронт растворителя достигнет верхнего края, бумагу высушивают, скрепки снимают и бумагу снова сворачивают в цилиндр в направ- [c.468]

После проявления бумагу сушат и обрызгивают веществом для обнаружения. Отдельные пятна идентифицируют по значениям Rf или же параллельным хроматографированием контрольного образца. Если неизвестное вещество и контрольный образец перемещаются на одно и то же расстояние на нескольких хроматограммах в разных системах растворителей, то весьма вероятно, что эти вещества идентичны. При расшифровке двумерных хроматограмм руководствуются не столько отдельными значениями Rjy сколько общим расположением пятен. [c.469]

Рис. 3. Зависимость распределения аминокислот на двумерной хроматограмме от

Рис 4. Карта распределения аминокислот на двумерной хроматограмме [c.481]

Если при помощи подвижной фазы выбранного состава не удается разделить анализируемую смесь, прибегают к способу двумерной хроматограммы. Для получения двумерной хроматограммы применяют квадратные листы бумаги размером 20X20, 30X30 или 40X40 см. В начале опыта каплю исследуемого раствора наносят на бумагу в ее левом углу на расстоянии 5 см от краев (рис. 11.5, а). После высушивания образовавшегося пятна бумагу помещают в сосуд для хроматографирования, опускают нижний край бумаги в один из выбранных растворителей и производят хроматографирование восходящим способом. После того как фронт подвижной фазы достигнет заданного предела в верхней части бумаги, хроматографирование прекращают, бумагу высушивают и поворачивают ее на 90° против часовой стрелки. При этом место нанесения капли исследуемого раствора окажется справа, а линия, по которой происходил подъем зон анализируемых веществ, образует новую стартовую линию (рис. 11.5,6). В таком положении бумагу помещают снова в сосуд для хроматографирования и опускают ее нижний край в подвижную фазу иного состава и хроматографируют по восходяще.му методу. По достижении фронтом новой подвижной фазы заданной высоты хроматографирование прекращают, бумагу высушивают и проявляют. Получают двумерную хроматограмму такого типа, как изображено на рис. 11,5, в. Двумерная хроматография значительно расширяет возможности распределительной ЖЖХ. [c.219]

Получение двумерных хроматограмм. Очень часто при помощи только одного растворителя не удается разделить сложную смесь. В этом случае используют два растворителя. Для получения двумерных хроматограмм рекомендуется использовать листы размером 20Х Х25, 30X35, 40X45 см в зависимости от размера камеры. Капли исследуемого раствора наносят на расстоянии 5 см. от одного и другого края листа бумаги, бумагу подсушивают и помещают в камеру, содержащую растворитель. В простейшем случае камерой может служить цилиндр, имеющий притертую крышку, не позволяющую испаряться растворителю. [c.85]

Нередко применяют двумерную бумажную хроматографию проведя разделение способом, например, нисходяп1ей хроматографии, лист бумаги поворачивают на 90° и повторяют разделение, но с другими растворителями (в этом случае разделяемые вещества будут характеризоваться уже другими значениями / /). В результате после фиксации и окраски специфическими красителями получают хроматограммы (рис. 67), на которых пятна соответствуют каждому из разделяемых веществ. Для идентифицирования пятен обычно рядом со смесью разделяемых веществ наносят отдельно капельки чистых компонентов смеси (так называемые свидетели ) при сравнении их расположения на хроматограмме с расположением пятен разделяемых веществ делают заключение об их тол<-дестве. Хроматограмма, приведенная на рис. 67, показывает, что смесь состоит из веществ А, В, О, какого-то неизвесгного вещества X и не содержит вещества С. [c.171]

На пластинках Фиксион 50x8 при однократном пропускании растворителя могут быть разделены 14—16 аминокислот, входящих в состав белка (рис. 19, 4). В случае недостаточно хорошего разделения смеси аминокислот одномерным способом прибегают к двумерной хроматографии, пропуская тот же или другой растворитель в направлении, перпендикулярном предыдущему. На практике поступают следующим образом. В две точки стартовой линии хроматограммы на рас- [c.135]

Принцип распределительной хроматографии основан на различии в коэффициентах распределения аминокислот между водой и органическим растворителем. Особенность метода распределительной хроматографии на бумаге по сравнению с обычной экстракцией ам.инокислот из водного раствора органическим растворителем заключается в том, что одну из фаз, чаще всего водную, помещают на какой-нибудь инертный твердый носитель, а органический растворитель — подвижная фаза,— проходя через первую, извлекает и распределяет аминокислоты на бумаге в соответствии с их коэффициентами распределения. Положение аминокислот на бумаге определяют по отношению скорости движения аминокислоты скорости движения фронта растворителя и обозначают Rf. Величина за висит в первую очередь от строения аминокислоты, затем от системы растворителей, pH среды и сорта бумаги, Чем полярнее аминокислота, тем меньше она растворяется в органических растворителях и тем меньше ее R . Увеличение длины углеродной цепи повышает . Введение в молекулу полярных групп, например, гидроксильной, аминной или карбоксильной понижает Rf Так, Rf фенилаланина в системе фенол/вода = 0,85, а тирозиит 0,51. Другие примеры изменения в зависимости от строения аминокислоты представлены на рис. 3 и 4. Подбирая соответствующие смеси растворителей, можно провести достаточно тонкое разделение аминокислот. Наиболее часто пользуются для такого разделения системами вода — фенол — аммиа вода — бутапол — уксусная кислота бутанол — аммиак — коллидин и т. д. Разделение можно проводить на одномерной или двумерной хроматограммах. Можно пользоваться также различными типами распределительной хроматографии на бумаге — нисходящей, восходящей и радиальной. Величины Rt для каждой из систем растворителей оказываются постоянными при соблюдении [c.479]

Значение каждого вещества в значительной степени зависит от природы растворителя. Эту зависимость используют в варианте бумажной хроматографии, обычно называемом двумерной хроматографией. Раствор разделяемых веществ наносится на лист фильтровальной бумаги квадратной формы ближе к одному из углов, и затем хроматограмма проявляется в одном направлении (рис. 421, а). После высушивания хром ограмму [c.457]

Рассмотрение двумерной хроматограммы в ультрафиолетовом свете дает возможность по флуоресценции определить положение пятна, отвечающего простетической группе (рис. 433, а). [c.463]

При восходящей хроматографии стартовая линия должна быть на расстоянии 15—20 мм от поверхности жидкости. На двумерную хроматограмму наносят пятно диаметром около 5—8 мм, содержаи1,ее от 0,3 до 1 мг вещества. Схема одномерной хроматограммы приведена на рнс. 435. [c.468]

Первая часть поставленной задачи самая трудная. Нужно подобрать такой метод хроматографии на бумаге, который бы обеспечил оптимальное разделение смеси дипептидов. Наибольшие возможности дает двумерная хроматография с обнаружением нингидрином [401, орцином [117] или хлорированием [126]. Для этого проявляют параллельно две хроматограммы одну используют для обнаружения, другую — для выделения пептидов. Элюаты упаривают на пластинке из органического стекла. [c.480]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология