Перевиваемые культуры

Применяемые программы охлаждения весьма разнообразны. Для них характерны медленные скорости охлаждения, реализуемые либо на всех этапах охлаждения, либо до определенных температур с последующим погружением в азот. Оптимальным для целого ряда клеток оказался 2-ступенчатый режим с температурной остановкой [13—15]. Экспериментальные данные показали, что замораживание клеток перевиваемых культур без криопротектора по 2-этапной программе со скоростью 30—40 °С/мин с температурной остановкой обеспечивало в 2 раза большую сохранность, чем замораживание со скоростью 1—2 °С/мин. Так, при замораживании клеток 5р 2/0 по 2-этапной программе сохранялось 45—50 % клеток, а при медленном замораживании — 20—25 %. [c.64]

Получают живые вакцины путем выращивания аттенуированных штаммов на питательных средах, оптимальных для данного микроорганизма. Бактериальные штаммы культивируют или в ферментерах на жидких питательных средах, или на твердых питательных средах вирусные штаммы культивируют в куриных эмбрионах, первично-трипсинизированных, перевиваемых культурах клеток. Процесс ведут в асептических условиях. Биомассу аттенуированного штамма подвергают концентрированию, высушиванию со стабилизирующей средой, затем ее стандартизируют по числу микроорганизмов и фасуют в ампулы или флаконы. Консервант к живой вакцине не добавляют. Обычно одна прививочная доза вакцины составляет 10 —10 живых микроорганизмов. Срок годности вакцины ограничен 1—2 годами, вакцина должна храниться и транспортироваться при пониженной температуре (от 4 до 8 °С). [c.184]

О. tsutsugamushi в исследуемом материале можно выявить путем заражения перевиваемой культуры клеток L и первично-трипси-низированных фибробластов куриного эмбриона. [c.240]

Исследуемым материалом заражают перевиваемые культуры клеток — L, Hela, НЕр-2 и др. Для выделения возбудителей орнитоза используют также куриные эмбрионы или белых мышей. [c.249]

Первичные культуры клеток почек обезьян, фибробластов эмбриона человека, перевиваемые культуры клеток Vero, Hela, НЕр-2, RDw др. [c.297]

Для выделения вирусов из проб воды используют первичные или перевиваемые культуры ткани (культуры почечной ткани обезьян, фибропластов вибриона человека и др.). [c.397]

В исследованиях испо.пьзованы методы биологического детектирования. В качестве клеток одного вида были выбраны следующие клеточные культуры первично трипсинизированпые фибробласты эмбриона человека (ФЭЧ) и клетки глаза эмбриона человека (ГЭЧ), перевиваемые линии эпителия амниотической оболочки человека FI и АМН), перевиваемая линия клеток эмбриона почки человека RH), перевиваемая культура эпителиальных клеток раковой опухоли шейки матки человека (Hela), перевиваемые клетки карциномы гортани человека (Нер-2). [c.59]

Межвидовые представители культуры ткани первично тряпси-низированные фибробласты эмбриона человека (ФЭЧ), перевиваемые линии клеток паховых желез обезьяны (ПАО), мышиные фибробласты (L), почечный эпителий эмбриона свиньи (СПЭВ), почка эмбриона человека (RH). Злокачественные линии культур тканей перевиваемая культура эпителиальных клеток рака шейки матки человека (Hela), перевиваемые клетки раковой опухоли гортани человека (Нер-2). [c.59]

Для лабораторной диагностики вирусных инфекций используют вирусологические, серологические и биологические методы исследования. Среди них наиболее трудоемкими являются и усологические, заключающиеся в заражении исследуемым материалом клеточных культур или куриных эмбрионов. В связи с различной чувствительностью клеточных культур к вирусам приходится одновременно заражать несколько первичных или перевиваемых культур. Некоторые вирусы могут быть обнаружены при заражении лабораторных животных. [c.230]

Самосборка наблюдается и на органах млекопитающих. Из гонад новорожденных крыс получали с помощью дезагрегации взвесь отдельных клеток, и в соответствующих условиях клетки семенника и яичника вновь организовывались в соответствующие структуры (Zenzes et al., 1978 Ohno et al., 1978). Клетки из перевиваемых культур эндотелия капилляров человека также способны in vitro собираться в сеть трубчатых структур, почти идентичных (под световым и электронным [c.228]

Вирус полиомы и 5У40 размножаются в первичных или перевиваемых культурах клеток. Каждая из этих систем имеет свои преимущества и недостатки. [c.224]

Глицерин и диметилсульфоксид—криозащитные агенты, получившие наиболее широкое применение для криоконсервирования клеток перевиваемых культур. Сравнительные данные по защитному действию этих криопротекторов весьма противоречивы [20]. [c.64]

Процесс криоконсервирования вызывает нарушения процессов догенного дыхания в клетках перевиваемых культур. Степень этих рушений зависит от применяемого криопротектора. При использо-нии в качестве криопротектора 10 % глицерина уровень эндоген-го дыхания снижался в 2—2.5 раза по сравнению с уровнем требления кислорода нативными клетками, а при использовании % ДМСО — в 1.2—1.5 раза. [c.65]

Анологичная зависимость от применяемого криопротектора отмена и при определении интенсивности синтеза белков и ДНК в клет-X перевиваемых культур после криоконсервирования ингибирова-е биосинтеза больше при криоконсервировании с 10 % глицерина. [c.65]

После криоконсервирования и хранения в жидком азоте клетки перевиваемых культур особенно нуждаются в оптимальных условиях культивирования, так как восстановление нелетальных повреждений, возникающих при замораживании—оттаивании, возможно только при благоприятных условиях. Установлено, что процессам восстановления способствует инкубирование клеток в среде, содержащей уабаин, или в среде с пониженным содержанием кислорода а также в кондиционированной среде [25—27]. Стимулирующее действие на пролиферацию клеток перевиваемых культур после криоконсервирования оказывает инсулин [14]. [c.66]

Исследования особенностей восстановительных процессов в клетках перевиваемых культур после криокоисервирования в зависимости от условий культивирования показали, что в кондиционированной среде все процессы протекали значительно быстрее, чем в свежей ростовой среде. Об этом свидетельствовали стимуляция процессов синтеза.ДНК в клетках и увеличение скорости адгезии при инкубировании клеток в кондиционированной среде. Восстановительными свойствами обладала кондиционированная среда от клеток разных линий. [c.66]

На основании литературных данных и проведенных исследований был разработан метод криоконсервирования клеток перевиваемых культур [28]. Для криоконсервирования отбирают клетки в экспоненциальной фазе роста. Культуры, растущие в монослое, снимают с поверхности матраса по общепринятой методике. Клетки ресуспен-зируют в небольшом количестве кондиционированной среды, доводя концентрацию до 1 10 —2 10 клеток в 1 мл. Нужную концентрацию клеток, растущих в суспензиях, получают путем центрифугирования и удаления части ростовой среды. Подготовленная к криоконсервированию суспензия клеток не должна содержать конгломераты. [c.66]

Перевиваемые клеточные культуры можно замораживать и со оростью 1—2 °С/мин до —80 °С с последующим погружением жидкий азот, для этого пригодно большинство программных мораживателей. В случае невозможности реализации этой про-аммы на имеющемся замораживателе либо при его отсутствии [пулы помещают в пенопластовую коробку с толщиной стенок около ) см и ставят в низкотемпературный холодильник с температурой 80 °С на 2 ч после чего ампулы переносят в жидкий азот. При мпературе —196 °С клетки перевиваемых культур можно хранить течение нескольких лет без существенных изменений их морфо-шкциональных свойств. [c.67]

Значительно больший интерес представляет изучение адгезии моноцитов к эндотелиальным клеткам, что отражает их адгезионное поведение внутри кровеносных сосудов. В этом случае используют первичную или перевиваемую культуру эндотелиальных клеток, на поверхность которой наслаивают взвесь моноцитов. После инкубации и отмывания неприлипших клеток количество адгези-рованных моноцитов определяют, выявляя специальной окраской фермент миелопероксидазу и проводя спектрофотометрическую оценку количества этого фермента. [c.215]

Ховес (1959а, б) опубликовал результаты своих дальнейших исследований процессов размножения вируса полиомиелита в клетках. Эти исследования проводились на перевиваемых культурах клеток HeLa, ERK и в первичной культуре клеток почки обезьян. Процесс развития инфекции изучали как в клетках, суспендированных в питательной среде, так и в отдельных, изолированных клетках. Последние исследования представляют особый интерес [c.120]

Характерной особенностью аденовирусов является их широкий клеточный спектр. К этим вирусам чувствительны ие только первичные и перевиваемые культуры многих видов клеток человека и обезьян, но также и ряд клеток, выращенных из тканей животных не приматов. Для титрования аденовирусов ка различных видах клеточных культур характерен описанный выше тип цитопатоген-аого действия. Наблюдаются лишь различия во времени появления дегенеративных изменений клеток в зависимости от дозы инокулированного вируса, однако линейная логарифмическая зависимость между концентрацией вируса и временем появления цитопатогенного действия в общем сохраняется. Эту особенность иногда используют для быстрого и точного определения количественного содержания вируса, но самые параметры указанных взаимоотношений меняются в зависимости от типа вируса и вида тканевой системы. Необходимо, одиако, отметить, что линейная зависимость между дозой вируса и временем появления цитоиато-генных изменений нарушается, если культуры инокулируют нераз-веденной вирусной жидкостью. В этом случае развивается раннее цитопатогенное действие, вызываемое описанным выше фактором белковой природы, но не самой вирусной частицей. [c.141]

Одной из иллюстраций последнего положения могут быть результаты, полученные в лаборатории С. Н. Щелкунова (1980 г.). Авторы определяли эффективность введения плазмиды рВК322 в неповрежденном виде в перевиваемую культуру клеток СУ-1. Культуру после адсорбции ДНК промывали, для деградации внеклеточной ДНК обрабатывали ДНКазой, вьще- [c.335]

Следует отметить, что при использовании как кальций-фосфатного, так и ДЭАЭ-декстра-нового методов эффективность проникновения молекул ДНК в клетки животных существенно зависит от линии клеток. Кроме того, обнаружилось, что, хотя фосфат кальция успешно применяют для генетической трансформации перевиваемых культур клеток, он обычно непригоден для введения молекул ДНК в дифференцированные клетки первичных культур. Так, первичная культура клеток нормального эпителия бронхов лизируется преципитатами фосфата кальция, у других первичных культур наблюдаются ингибирование роста, нарушения клеточного цикла. В лаборатории Т. Хариса (1987 г.) уцалось преодолеть данное затруднение, используя стронций-фосфатное соосаждение экзогенной ДНК на монослой такой высокочувствительной к катионам кальция первичной культуры, какой является культура клеток нормального эпителия бронхов. [c.336]

Выделение вирусов полиомиелита проводят путем заражения исследуемым материалом первичных (клетки почек обезьян) и перевиваемых культур клеток. О репродукции вирусов судят по цитопатическому эффекту. Идентифицируют (типируют) выделенный вирус с помощью типоспецифических сывороток в реакции нейтрализации (PH) на культуре клеток. Внутритиповая дифференциация диких (вирулентных) и вакцинных вариантов вируса полиомиелита проводится с помощью ИФА, PH ци-топатического эффекта вируса в культуре клеток специфическими сыворотками, а также ПЦР. [c.225]

Культивирование. Вирус репродуцируется в первичных и перевиваемых культурах клеток с цитопатическим эффектом (сим-пласты) и образованием внутриядерных включений. [c.263]

Культивирование. Вирус бешенства культивируют в мозговой ткани белых мышей, сирийских хомячков, кроликов, крыс, морских свинок, овец и др. У зараженных животных развиваются параличи конечностей, затем они погибают. Вирус бешенства может быть адаптирован к первичным и перевиваемым культурам клеток и куриным эмбрионам. В цитоплазме пораженных вирусом клеток головного мозга животных или культур ткани образуются специфические включения, впервые описанные В. Ба-бешем (1892) и А. Негри (1903) и поэтому названные тельцами Бабеша—Негри. Включения сфиврической или овальной формы, величиной от 0,5 до 20 мкм, хорошо окрашиваются кислыми красителями, содержат вирусный антиген, имеют диагностическое значение. [c.310]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология