Кондиционирование среды

Кондиционированная среда (КС) — среда, в которой выращивались миеломные клетки в логарифмической стадии роста. Клетки удаляют центрифугированием в течение 8 мин при 800 об/мин. [c.311]

Кондиционирование среды — осуществляется путем добавления в нее питательной среды, отфильтрованной от интенсивно делящихся клеток. [c.168]

Кондиционированная среда с трансформированными или опухолевыми клетками Почки, тромбоциты [c.363]

Напротив, если нейроны содержатся в одной культуре с другими типами клеток, например с клетками миокарда (миоцита-ми), у нейронов развиваются холинэргические свойства. Они синтезируют примерно в 1000 раз больше ацетилхолина, чем изолированные нейроны в культуре холинэргические синапсы образуются на других нейронах или на мышечных клетках при этом количество норадреналина и число зернистых пузырьков значительно снижено. Так же действует просто среда, в которой содержались миоциты или другие клетки, не являющиеся нейронами. Такую среду поэтому называют кондиционированной. Полагают, что она содержит вещество или вещества, которые опосредуют этот эффект. Меняя интенсивность воздействия другими клетками или кондиционированной средой, можно влиять на равновесие между адренэргическими и холинэргическими свойствами одной и той же клетки (рис. 10.8). [c.248]

Кондиционированные среды. Использование клеток питающего слоя имеет ряд недостатков 1) их приготовление трудоемко и накладывает определенные ограничения по времени на приготовление гибридом 2) они представляют собой потенциальный источник бактериального загрязнения 3) они метаболизируют питательную среду, что создает необходимость часто менять ее 4) растущие клетки в питающем слое могут перерастать или убивать гибридомы 5) клетки питающего слоя препятствуют визуальной идентификации растущих колоний гибридом. [c.106]

Как отмечалось выше, вместо клеток питающего слоя можно использовать кондиционированную среду. Среду, кондиционированную перитонеальными макрофагами, добавляют к среде культивирования в соотношении 1 1. [c.109]

При этом размещение считают случайным. Между тем в период спаривания многие особи объединяются попарно, и случайность распределения нарушается. Значение дисперсии становится больше значения среднего числа особей в выборке (5 > т) регистрируется неслучайное групповое распределение. Неслучайность распределения свойственна также особям, не выносящим близкого соседства. Стремясь обособиться друг от друга, они рассредоточиваются по избранной территории более или менее равномерно, и в этом случае дисперсия стремится к нулю. При анализе размещения насекомых необходимо учитывать и возможную ограниченность заселяемых ими пространств, и распределение доступных им источников пищи, и наличие других видов — разного рода конкурентов или сотрудников по совместному кондиционированию сред. [c.101]

Таким образом, образование колоний миелоидных клеток и макрофагов наблюдается при культивировании суспензии кроветворной ткани на соответствующих фидерам или при использовании кондиционированной среды. [c.33]

Эпителиальная ткань эмбриональной печени так же, как и костная ткань во взрослом организме, является естественной стромой для кроветворения. Поддержание дифференцировки миелоидных клеток на подложке из почечных или эмбриональных клеток не имеет прямых аналогий с наблюдаемыми в организме взаимоотношениями кроветворной и стромальной тканями. Однако и в данном случае речь, очевидно, идет о секреции клетками подложки веществ, стимулирующих гемопоэз. Действительно, для положительного эффекта не обязателен контакт с кроветворными клетками. Клетки подложки оказывают колониестимулирующее воздействие и при помещении между ними и кроветворными клетками тонкого слоя агара. Таким образом, стимулирующий фактор отделяется от клеток и способен к диффузии через слой агара, не теряя своей активности. Получение кондиционированных сред, способных вызывать образование колоний кроветворных клеток, также говорит в пользу такого предположения. [c.60]

Для восстановления клеток после хранения в жидком азоте лучше использовать кондиционированную среду, которую собирают с культуры клеток на 3—4-е сутки после посева клеток, фильтруют через миллипоровые фильтры с диаметром пор 0.22—0.45 мкм и хранят при температуре —20 °С. При восстановлении клеток можно использовать кондиционированную среду от любой клеточной линии, культивируемой на той же среде, что и восстанавливаемые клетки. [c.68]

Гибридомная среда (ГС). Среду для культивирования гибридных клеток (г ибридом) готовят из равных объемой ростовой и кондиционированной среды. [c.311]

Всех этих недостатков лишены кондиционированные среды, представляющие собой супернатанты культур, в которых росли клетки питательного слоя. Кондиционированные среды в культивировании клеток используются давно в качестве средства замены клеток питающего слоя. Для получения гибридом использовались среды, кондиционированные эпителием человека (G. Astaldi и сотр., 1980), клетками эндотелия (С. Pintus и сотр., [c.106]

Используют неочищенный экстракт, полученный осаждением сульфатом аммония кондиционированной среды из культуры стимулированных ми-тогеном моноядерных клеток периферической крови. [c.184]

В других случаях факторы кондиционированной среды еще не идентифицированы. Так, клоны хрящевых клеток можно получить только в присутствии неидентифицированных веществ, выделенных из эмбрионального экстракта. В их отсутствие клетки нормально растут и образуют клопы, но не синтезируют межклеточные поли- [c.240]

А. Рост в кондиционированной среде, способствующей синтезу полисахаридного матрикса, Б, Рост в некондиционированной (Матрикс окрашивали то.туидиновым синим и. фотографировали, в фазово-контрастиом микроскопе.) [c.242]

Все последующие операции выполняли при комнатной температуре. Из чашек для культивирования диаметром 100 мм с приготовленными для введения спин-меток клетками удаляли 1—2 мл среды. Клетки собирали с поверхности чашек резиновым силиконированным валиком (скрепером) и взвешивали в оставшейся среде. Взвесь клеток из нескольких чашек собирали и центрифугировали (300 g, б мин). Надосадочную жидкость удаляли, а осадок ресуспендировали в кондиционированной среде до концентрации 3—10 X 10 клеток/мл. Один миллиметр полученной взвеси клеток отбирали пипеткой и переносили в стеклянную пробирку размером 12 X 75 мм, цент-рифугировали а надосадочную жидкость осторожно удаляли. [c.305]

Данные по локусу эстераза-6 в дальнейшем получили свое развитие в опытах с кондиционированной средой (Хуанг, Сингх и Койима, 1971). Личинок одного из трех генотипов FF, FS и 55 выращивали на свежей культуральной среде и затем убивали прямо в среде замораживанием. Затем на эту кондиционированную среду помещали определенное число личинок того же или иного генотипа и учитывали долю выживших. Результаты приведены в табл. 50. Жизнеспособности выражены относительно гетерозигот, выращенных на убитых гетерозиготах. Полученный эффект, который Койима (1971) объявил весьма общим, конечно, очевиден. Однако Ямазаки (1971) не смог обнаружить его у D. pseudoobs ura, а Левонтин и Мацуо наблюдали его в своих экспериментах далеко не всякий раз. [c.265]

Нижний слой агара состоит из полной культуральной среды, содержащей 0,3% агара. Для его получения 3%-ный агар разбавляют в 10 раз нагретой до 37 °С средой, перемешивают и разливают по 1 мл в чашки Петри (диаметр 35 мм) или культуральные чашки (Fal on 1008 или 3005). Если условия анализа требуют применения митогенов, кондиционированной среды или других растворимых компонентов, то мы часто добавляем их к нижнему слою агара. Добавки можно включать в состав агарсодержащей среды до гелеобразования это удобно в тех случаях, когда требуется большое число культур с одинаковым нижним слоем агара. Поскольку при внесении добавок концентрация агара уменьшается, следует либо вносить их в малом объеме (т. е. в концентрированном виде), либо уменьшать количество воды при приготовлении среды в соответствии с добавляемым объемом. Обычно мы игнорируем уменьшение концентрации агара, если добавленный объем составляет меньше 5% общего объема. Когда для опыта требу- [c.258]

Чтобы уменьшить вероятность перекрывания клонов, время культивирования и число засеваемых в культуру клеток необходимо сократить до приемлемого минимума. Посевная концентрация взвеси данного типа клеток зависит от способности клеток образовывать клоны в данных условиях культивирования. Клонообразующую способность можно повысить, добавив в культуру клетки, облученные высокой дозой у- или рентгеновских лучей, либо жидкую среду, в которой ранее уже росли клетки ( кондиционированная среда ), или же используя нижний слой агара с питающими клетками. [c.395]

Активность кондиционированной среды не падает при диализе. Фактор, содержащийся в коидидионированной среде, устойчив к нагреванию он выдерживает 50—80° в течение 30 минут (Bradley, Sumner, 1968). [c.34]

Интересно отметить, что продуцировать кондиционированную среду могут клетки мышиного эмбриона, облученные 4000 р (Pluznik, Sa hs, 1966), По данным этих авторов, фактор (факторы), обусловливающий образование колоний, является термостабильным, выдерживает длительное нагре- [c.34]

Методом агаровых культур можно изучать и колониеобразующую активность клеток костного мозга человека. Однако применение подложек и введение кондиционированных сред, стимулирующих образование кроветворных очагов из костного мозга и селезенки грызунов, не создают благоприятных условий для развития колоний из костного мозга человека. При использовании подложки из клеток почки мыши количество элементов в колониях из костного мозга человека не превышало 50. В дальнейшем оказалось, что стимулирующее действие на колониеобразование оказывает кондиционированная среда, полученная из культур клеток селезенки человека. Введение такой среды в коли честве 25% в нижний слой агара приводит к интенсивном образованию колоний миелоидных клеток, включающи> в свой состав элементы миелоидного ряда дифференциров ки от миелобласта до зрелого гранулоцита. Максимальногс размера колонии достигают через 12—14 дней после экс [c.36]

Даже при введении эритропоэтина в агаровых культурах не удается получить эритроидных колонии. Однако такие колонии возникают при культивировании клеток эмбриональной печени в плазменном геле при введении, кроме обычной кондиционированной среды (из-под культур почечных трубочек), еще и эритропоэтина (Stephenson а. oth., 1970). При этом образуются как миелоидные, так и эритроидные колонии. Если обычная кондиционированная среда исключалась, то развивались только эритроидные колонии, но их число при этом не увеличивалось. Наоборот, в случае культивирования с кондиционированной средой, по без эритропоэтина, образовывались только миелоидные колонии и их количество также не возрастало. Это еще раз показывает, что образование колоний в культурах происходит не за счет стволовых клеток, которые могут дифференцироваться и в миелоидном, и в эритроидном направлении, а из коммитированных предшественников. Что касается стволовых клеток, то их количество в агаровых культурах резко падает уже в первые дни культивирования и через 4 дня они практически исчезают (см. главу II). [c.38]

Возникает вопрос сохраняются ли в данной системе стволовые кроветворные клетки и если сохраняются, то в течение какого времени и в каком состоянии Метод эксплантации кроветворных клеток в агаре создает трудности для проведения опытов по обратной трансплантации в организм (Met alf, 1969). Эти трудности удается преодолеть, используя для культивирования модификацию метода агаровых культур, предложенную Worton и др. (1969). Клетки костного мозга, суспендированные в жидкой питательной среде с 10% сыворотки (i. не содержащей агар), помещаются над слоем 0,5 7о агара, в который вводятся клетки фидера либо кондиционированная среда. Клетки костного мозга при этом находятся в одно и то же время как бы и в агаровых и суспензионных культурах. Вместе со слоем жидкой питательной среды их легко извлечь из культурального сосуда, затем отмыть и ввести внутривенно облученному реципиенту. Оказалось, что количество стволовых (колониеобразующих) клеток как при культивировании на фидере, так и в присутствии кондиционированной среды в течение первых суток после эксплантации резко падает. Однако в культурах на фидере на 2-е сутки оно составляет большую величину (25%), чем в. культурах на кондициони- [c.67]

Таким образом, и в первом и во втором случае стволовые кроветворные клетки в культурах сохраняются недолго — в течение нескольких суток. В каком состоянии они находятся Б экспериментах с введением в питательную среду возрастающих доз Н -тнмндина, вызывающих гибель клеток, находящихся в S-периоде, удалось показать, что большая часть стволовых кроветворных клеток 2-дневных культур, растущих на фидере, находится в состоянии активной пролиферации, в то время как стволовые клетки культур с кондиционированной средой вне пролиферативного пула число их под действием Н -тимидина практически не менялось (M ullo h, Till, 1971). Эти четкие наблюдения свидетельствуют о том, что условия культивирования существенным образом влияют на состояние стволовых кроветворных клеток. Не исключено, что в данном случае условия культивирования способствуют сохранению той или иной части популяции стволовых клеток (пролиферирующей и покоящейся). [c.68]

После криоконсервирования и хранения в жидком азоте клетки перевиваемых культур особенно нуждаются в оптимальных условиях культивирования, так как восстановление нелетальных повреждений, возникающих при замораживании—оттаивании, возможно только при благоприятных условиях. Установлено, что процессам восстановления способствует инкубирование клеток в среде, содержащей уабаин, или в среде с пониженным содержанием кислорода а также в кондиционированной среде [25—27]. Стимулирующее действие на пролиферацию клеток перевиваемых культур после криоконсервирования оказывает инсулин [14]. [c.66]

Исследования особенностей восстановительных процессов в клетках перевиваемых культур после криокоисервирования в зависимости от условий культивирования показали, что в кондиционированной среде все процессы протекали значительно быстрее, чем в свежей ростовой среде. Об этом свидетельствовали стимуляция процессов синтеза.ДНК в клетках и увеличение скорости адгезии при инкубировании клеток в кондиционированной среде. Восстановительными свойствами обладала кондиционированная среда от клеток разных линий. [c.66]

На основании литературных данных и проведенных исследований был разработан метод криоконсервирования клеток перевиваемых культур [28]. Для криоконсервирования отбирают клетки в экспоненциальной фазе роста. Культуры, растущие в монослое, снимают с поверхности матраса по общепринятой методике. Клетки ресуспен-зируют в небольшом количестве кондиционированной среды, доводя концентрацию до 1 10 —2 10 клеток в 1 мл. Нужную концентрацию клеток, растущих в суспензиях, получают путем центрифугирования и удаления части ростовой среды. Подготовленная к криоконсервированию суспензия клеток не должна содержать конгломераты. [c.66]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология