Тизелиуса метод определения электрофоретической подвижности

Оценка чистоты. — Шведские химики Сведберг и Тизелиус внесли большой вклад в развитие химии белка разработкой аналитических методов, чрезвычайно удобных для характеристики этих, высокомолекулярных соединений. Метод ультрацентрифугирования Сведберга служит для определения молекулярного веса. При вращении с очень большой скоростью ячейки, содержащей раствор белка, молекулы белка под действием центробежных сил движутся от центра со-скоростью, зависящей от величины молекулярного веса. Специальная оптическая система дает возможность наблюдать и фотографировать ячейку во время центрифугирования. Молекулярный вес может быть, найден либо из определения седиментационного равновесия, либо по-скорости седиментации- Хотя теоретически первый метод точнее, для достижения равновесия требуется длительное время, и поэтому более точные значения получают, исходя из определения скорости седиментации. При применении ультрацентрифуги можно установить также гомогенность молекул (по величине и форме). Тизелиус предложил (1937) электрофоретический метод разделения молекул белка в электрическом поле молекула белка движется со скоростью, определяющейся величиной молекулы, ее формой, количеством и типом ионизированных групп. Материал, кажущийся гомогенным по растворимости, может содержать компоненты, отличающиеся по электрофоретической подвижности. Жестким критерием чистоты является профиль кривой распределения, получаемой при противоточном распределении молекул (Крейг, см. 31.29). [c.674]

Зная электрофоретическую подвижность белка, установленную в аппарате Тизелиуса методом движущейся границы, и учитывая предполагающиеся условия опыта, можно вполне удовлетворительно предсказать поведение белка в приборе типа аппарата Коммонера. Относительные подвижности, измеренные в аппарате Свенссона, хорошо согласуются с соответствующими величинами, полученными другим методом. Поэтому оказывается удобным добавлять в случае необходимости в раствор окрашенный белок с целью определения траектории его движения, по которой можно рассчитать пути перемещения других белков. [c.72]

Определение электрофоретической однородности препаратов гамма-глобулинов может быть произведено также с помощью метода подвижной границы в аппаратах типа Тизелиуса. [c.990]

Тизелиус значительно улучшил метод подвижной границы, сделав его очень точным и изящным методом электрофоретического изучения белков. Фактически им создан новый метод, при помощи которого можно также разделить смесь белков на чистые компоненты. Сосуд Тизелиуса состоит из нескольких пришлифованных частей, которые могут перемещаться друг относительно друга при помощи особого механического устройства. Наблюдается движение фракций белка, и когда определенная фракция оказывается в данной части трубки, ее изолируют передвижением этой секции трубки. Как л в простой и-образной трубке, раствор белка находится в нижней части сосуда. Поверх раствора белка наслаивают буфер с той же концентрацией электролита, что и растворе белка. Между раствором белка и буфером должны получаться резкие границы. На рис. 37 изображен сосуд Тизелиуса. [c.208]