Тизелиуса аппарат

Наиболее совершенная и довольно сложная конструкция аппарата для электрофоретического разделения, предложенная Тизелиусом, основана на методе подвижной границы. Компоненты раствора (например, плазмы крови), обладающие различными подвижностями, пространственно разделяются в U-образном сосуде после длительного электрофореза. Оптическая система построена так, что свет, проходящий через сосуд в нормальном к нему направлении, преломляется на границах, которые разделяют растворы отдельных компонентов. [c.218]

Рис. 476. Принципиальная схема аппарата Тизелиуса.

Хотя метод электрофореза известен уже со второй половины XIX в., точные измерения на чистых белках стали проводить лишь после создания Тизелиусом усовершенствованного аппарата для электро ретического анализа методом подвижной границы. В этом приборе электрофоретическая кювета помещалась в низкотемпературный термостат, благодаря чему для разделения белков можно было использовать высокие градиенты потенциала, избежав тепловой конвекции. Сама кювета имела прямоугольное сечение, оптические поверхности и смещающиеся относительно друг друга части. Это позволило получать четкие границы раздела между белковым и буферным растворами и наблюдать изменения показателя преломления в зоне подвижных границ с помощью теневой оптической системы, использующей принцип Фуко—Теплера. [c.164]

Тизелиусу заключается в том, что этим путем оказалось возможным проводить очень точные количественные анализы сложных смесей макромолекулярных веществ. Кроме того, существует препаративный вариант аппарата Тизелиуса, который по сравнению с вышеописанными камерными приборами имеет ряд преимуществ. Вся операция разделения в этом аппарате проходит при низкой температуре и при постоянном pH, а ход разделения регистрируется очень точным оптическим устройством. [c.534]

Принципы, положенные в основу конструкции прибора Тизелиуса, описаны выше. Современный аппарат для фронтального электрофореза является сложным и дорогим устройством, вклю- [c.62]

Для электрофоретического разделения полисахаридов пользуются как аппаратом Тизелиуса, так и электрофорезом на бумаге или на стекловолокнистой бумаге, а также на колонке со стеклянным порошком. Последние два метода имеют преимущества перед бумажным электрофорезом, поскольку в этих случаях исключается взаимодействие полисахаридов с целлюлозой бумаги, обладающей сильными сорбционными свойствами. [c.56]

В самое последнее время в практику вошел электрофорез на бумаге, в известной мере заменяющий исследования на громоздком и дорогостоящем аппарате Тизелиуса. При этом на пропитанную буферным раствором полосу хроматографической бумаги наносят каплю белковой смеси (сыворотка крови, лимфа и т. п.). Сама середина бумаги подвешивается на подставке и ее концы погружаются в катодную и анодную ванны, заполненные буфером, с угольными электродами. На угольные электроды подается известное напряжение. Капля белковой смеси, продвигаясь к тому или иному полюсу, расслаивается. Белки, имеющие наибольший электрокинетический потенциал, продвигаются быстрее, белки с меньшим потенциалом отстают. [c.279]

Литературу по электрофорезу на бумаге несколько осложняет разнообразие терминологии, используемой различными исследователями. Михаэлис [1] в 1909 г. применил термин электрофорез при описании движения коллоидных ионов в электрическом поле в обзоре, изданном в 1945 г., Мартин и Синге [2] называют электромиграцию ионов с низким молекулярным весом в опорной среде ионофорезом. Разделения как маленьких, так и больших молекул, основанные на различиях в заряде, проводятся в одинаковых или сходных аппаратах, и по этой причине большинство исследователей склонны применять термин электрофорез с соответствующим прилагательным, указывающим на характер используемой опорной среды. Тизелиус и др. предложили удачное выражение зональный электрофорез для разграничения этих методов от метода подвижной границы. По-видимому, нет надобности вводить специальные термины для обозначения побочных эффектов, обусловленных хроматографией, адсорбцией или испарением. [c.244]

Электрофоретическое разделение красителей на бумаге основано на их подвижности в электрическом поле. Красители наносят на хроматографическую бумагу, насыщенную подходящим буферным раствором. Наиболее часто используется низковольтный метод с горизонтально расположенной бумагой, например в горизонтальных аппаратах Виля и Фишера или Кремера и Тизелиуса [16, 124, 125]. В этих приборах бумагу размещают горизонтально, а ее концы погружают в катодное и анодное пространства, заполненные подходящим электролитом. К электродам подключают постоянный ток низкого напряжения, обычно менее 10 В/см. [c.98]

Придумано много самых разнообразных и остроумных методов очистки белка. О них можно было бы написать целую книгу. Но чтобы вы представили себе, как это делается, расскажем лишь об одном широко распространенном сейчас способе, предложенном в 30-х годах шведским ученым Тизелиусом. Ведь все белки разные. В один входит больше аминокислот, обладающих щелочными свойствами, а в другой — кислыми. Значит, получится, что белки бывают щелочными и кислыми. Теперь поставим такой опыт. Возьмем раствор смеси этих белков и нальем в стакан. Опустим в него электроды и начнем пропускать электрический ток. Естественно, что кислые белки будут двигаться в одну сторону, причем более кислые быстрее, менее кислые медленнее, а щелочные белки поедут в противоположном направлении. На этом принципе Тизелиус и построил свой аппарат для [c.40]

Рис. 7.8. Кюветы аппарата Тизелиуса в поперечном разрезе слева видна единственная полоса белка, справа можно видеть несколько полос. Если белок не окрашен, полосы остаются невидимыми для глаза.

В 1937 г. Тизелиус [12] предложил новую модель электрофоретического аппарата. Усовершенствование способа создания четких границ раздела с помощью особой кюветы со шлифами, термостатирование ее при 0° С для уменьшения разрушающих границу раздела конвекционных потоков и, наконец, применение специальных оптических систем для регистрации границы раздела по существу означало создание нового метода [13]. [c.21]

Рпс. 3.1. Аппарат для фронтального электрофореза (по Тизелиусу) [c.50]

Так, Крем ер и Тизелиус [94] помещали бумажную полоску между стеклянными пластинами, которые затем опускали в органическую жидкость, например хлорбензол. Концы бумаги подводили под колокол, заполненный влажной бумажной массой и осуществляющий электрический контакт бумаги с электродными сосудами. В работе [95] описан упрощенный аппарат (рис. 3.6), в котором бумажная полоска, укрепленная на стеклянной раме, непосредственно опускалась в органическую жидкость. [c.61]

Боратный буфер и полисахарид образуют несущий отрицательный заряд комплекс [1, 6], который, как можно ожидать, будет двигаться в аппарате Тизелиуса к аноду [1 ] (см. также стр. 411). Однако на полосках носителя и в колонках со стеклянным порошком при pH 9,3 электроэндоосмос настолько велик, что приводит к перемещению веществ в направлении к катоду. [c.295]

Зная электрофоретическую подвижность белка, установленную в аппарате Тизелиуса методом движущейся границы, и учитывая предполагающиеся условия опыта, можно вполне удовлетворительно предсказать поведение белка в приборе типа аппарата Коммонера. Относительные подвижности, измеренные в аппарате Свенссона, хорошо согласуются с соответствующими величинами, полученными другим методом. Поэтому оказывается удобным добавлять в случае необходимости в раствор окрашенный белок с целью определения траектории его движения, по которой можно рассчитать пути перемещения других белков. [c.72]

Определение электрофоретической однородности препаратов гамма-глобулинов может быть произведено также с помощью метода подвижной границы в аппаратах типа Тизелиуса. [c.990]

Разделять смеси белков посредством электрофореза начали еще в первые годы XX в. Однако до сравнительно недавнего времени этот метод применялся лишь в аналитических целях. В течение 30 и более лет широко использовался довольно Сложный аппарат Тизелиуса для электрофореза в свободном растворе, однако с его помощью не всегда удавалось добиться полного разделения компонентов. И до сих пор остается справедливым утверждение, что электрофорез — это в основном аналитический метод. Все современные более тонкие электрофоретические методы, такие, как гель-электрофорез, изоэлектрическое фокусирование и изотахофорез, были разработаны главным образом с целью улучшить способы анализа смесей белков. Тем не менее каждый из этих методов может быть приспособлен для препаративных целей с использованием десятков и даже сотен миллиграммов белковой смеси. [c.213]

Наиболее полное разделение смеси белков на индивидуальные компоненты достигается с помощью электрофоретических методов. Как уже обсуждалось в разд. 5.2, проведение препаративного электрофореза, несмотря на то что он обладает значительными теоретическими преимуществами, сопряжено с большими трудностями. Поэтому он используется не часто. В аналитическом же варианте электрофорез — это один из наиболее широко применяемых методов исследования. Действительно, чтобы охарактеризовать очищенные препараты белков, их теперь почти обязательно подвергают электрофоретическому анализу. Для проведения аналитического электрофореза в гелях требуется всего 5—25 мкг белка это обычно не слишком значительная часть полученного препарата. До того как были предложены гелевые системы, электрофоретический анализ проводили в аппарате Тизелиуса методом движущейся границы. Хотя для этого приходилось расходовать десятки миллиграммов белка, разделения очень сходных белков не достигалось и анализ каждого образца требовал больших усилий и внимания. Затем был разработан аналитический электрофорез на бумаге и других целлюлозных материалах, используемых в качестве носителей, что исключило два из указанных выше недостатков метода Тизелиуса количество необходимого для анализа белка значительно сократилось и проводить электрофорез стало намного легче, так как для этого метода требуется только простое оборудование. Однако разрешение осталось примерно таким же, как н прежде, даже при использовании обладающих хорошими качествами современных ацетатцеллюлозных пленок это объясняется тем, что разделение компонентов смеси происходит в соответствии только с приблизительной величиной отношения заряд/размер и многие белки движутся вместе в виде одной зоны (ср. с разд. 5.2). [c.316]

Метод Тизелиуса. Этот метод в принципе сводится к методу подвижной границы, однако в нем много специфических особенностей. Измерения по этому методу проводят в приборе, который представляет собою усовершенствованный аппарат Кёна. Для создания резкой,границы между коллоидным раствором и боковой жидкостью в приборе Тизелиуса используют не краны, а сдвиг пришлифованных частей U-образной трубки относительно друг друга. На рис. VII, 25 дан разре основной части прибора, соответствующей U-образной трубке прибора Кёна. Нижняя часть трубки в момент наполнения верхней части боковой [c.208]

Перед зарядкой ячейки аппарата Тизелиуса приготовляют 2 %-ный раствор полисахарида в боратном буфере с pH 9,6 и днализуют его против примерно 400 мл буферного раствора в течение 16—24 ч. [c.48]

Имеется ряд аналогичных конструкций, позволяющих осуществить разделение больших количеств смесей. К ним относятся конструкция Свенсона [651, прибор Машбефа [46] и препаративный аппарат для электрофореза конструкции Тизелиуса [74]. [c.535]

Для анализа смесей кислых полисахаридов может с успехом применяться электрофорез в аппарате Тизелиуса. Таким путем, например, отделяют сульфированные полисахариды от полиуронидов водорослей при низких рН . Разделение нейтральных полисахаридов проводят в боратном буфере в условиях, при которых полисахариды различаются по способности образовывать комплексы с борной кислотой . Таким способом удалось легко отделить маннан от глюкана в водорастворимой фракции полисахаридов andida albi ans . [c.487]

Таким образом, если смесь белков поместить в электрическое поле, то белки с суммарным отрицательным зарядом будут передвигаться по направлению к аноду, белки с положительным зарядом — к катоду, а белки, находящиеся в изоэлектрической точке (т. е. с нулевым суммарным зарядом), останутся на месте. Разделение такой смеси можно проводить на фильтровальной бумаге, пропитанной буфером, на забуференных крахмальных колонках или в усовершенствованном аппарате для электрофореза, сконструированном Тизелиусом. Для подробного ознакомления с принципами, положенными в основу использования аппарата Тизелиуса, рекомендуем две статьи Олберти [ 1 ]. [c.16]

Дальнейших успехов в химии гликонротеинов следовало ожидать на основе развития методов и лабораторной техники идентификации и количественного определения малых количеств сахаров и аминокислот, структурного анализа олиго- и полисахаридов, эффективного разделения и очистки белков, оценки гомогенности макромолекул и определения их молекулярных весов. С введением улучшенных методов исчерпывающего метилирования и периодатного окисления углеводов, реагентов (борогндридов щелочных металлов), избирательно восстанавливающих карбонильную группу, аналитической ультрацентрифуги Сведберга, аппарата Тизелиуса для электрофореза с подвижной границей, ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии, метода меченых атомов, метода фракционирования белков плазмы крови холодным спиртом по Кону, хроматографии на бумаге и на колонках, хроматографии на ионообменниках, полученных из целлюлозы, упрощенных микрометодов электрофореза (электрофорез на бумаге, крахмальном или агаровом гелях), иммуноэлектрофореза и, наконец, последнего по времени, но важного в этой области открытия конститутивных и индуцируемых бактериальных ферментов, действующих избирательно на гетеросахариды, настало время для третьего и наиболее сложного и плодотворного периода исследования гликонротеинов. [c.18]

I — прибор с горизонтальной камерой, в котором бумага располагается между стеклянными пластинами (S) 2 — прибор обычного типа [33], пригодный для горизонтального электрофореза белков (разработано много модифицированных его вариантов) 3 — прибор с горизонтальной камерой для разделения белков у этого прибора небольшой объем влажной камеры и насыщение парами электролита происходит быстро 4 — аппарат Кре-мера и Тизелиуса [14], в котором отвод тепла осуществляется с помощью инертной жидкости 5 — аппарат с подвешенной в центре бумагой, часто используется (в виде различных модификаций) для рутинного анализа белков и низкомолекулярных соединений [62, 108] 6 — прибор, в котором избыточное тепло бысттро удаляется иаертной жидкостью, например ССЦ пригоден для разделения низкомолекулярных соединений при градиенте [c.290]

Бацитрацин. Для полного разделения компонентов бацитрацина, входящих в обычные его препараты, с успехом применялся [3] хроматографический процесс на активированном угле с пониженной сорбционной емкостью. Как известно из ряда работ Тизелиуса и Порат [36—38], обработка адсорбента рядом веществ, приводящая к дезактивации поверхности, способствует повышению обратимости адсорбции и улучшает разделение веществ в хроматографическом процессе. Для разделения компонентов, входящих в состав бацитрацина, применяется предварительная обработка активированного угля этилацетатом или гексанолом и уксусной кислотой. Элюция смесью, содержащей гексанол, уксусную кислоту и бутилацетат, приводит к более детальному разделению смеси, чем это может быть осуществлено противоточным методом в аппарате Крэга. [c.168]

Для этой цели Тизелиус создал специальный электрофоретический аппа -рат, обычно называемый его именем. Не описывая подробно этого довольно сложного прибора, укажем лишь на то, что сама электрофоретическая трубка в аппарате представляет и-образный капилляр. Исследование ведется при температуре около (У во избежание разогревания, возможного при высокой разнице потенциалов, и для устранения конвекционных токов. Образовавшиеся в капилляре в силу различной электрофоретической подвижности белковые фракции обладают различными коэффициентами преломления. Поэтому луч, проходя через зоны белковых фракций, будет давать различное отклонение. Благодаря особому устройству оптической регистрации этот отклоняющийся луч автоматически вычерчивает на фотопластинке кривые отклонения, как это показа1но на рис. 83, для сыворотки крови. [c.278]

Электрофоретические данные. При электрофорезе эремурана в аппарате Тизелиуса мы получили очень сходную картину два пика (рис. 1) — подвижного и практически неподвижного компонента, а затем препаративно выделили две [c.57]

Определялась также константа диффузии поливинилацетата в метиловом спирте (определение производилось в аппарате Тизелиуса). Получено уравнение В КМ- ), где М — молекулярный вес полимера, К и р — постоянные для интервала степеней полимеризации 20—3000. Радиус полимерной молекулы, вычисленный из этого уравнения, совпадает с вычисленным из вязкостной формулы Эйнштейна для молекулы сферической формы. Полученная величина радиуса нронорцио1ьчльна корню квадратному из степени полимеризации. [c.38]

Микроскопические исследования подобного рода проводил Тизелиус, который изучал изменения оптических свойств при диффузии воды в обезвоженный чейландит в вакуум-аппарате. Эти наблюдения дополняются очень ценными данными исследований по влиянию высушивания на обменную емкость синтетических цеолитов. При синтезе обменников на основе алюмосиликатов превышение температуры сушки становится заметным по отщеплению воды и тем самым параллельно происходящей инактивации. Последняя связана, очевидно, с дегидратацией поликремниевых кислот и их солей. При этом имеют также значение необратимое сжатие и появляющиеся в связи с этим нежелательные изменения пористости. Для смол, содержащих железо, имеют место окислительные процессы. Пересушивания неорганических обменных гелей, как известно, следует избегать. [c.342]

Тизелиус [142] приложил к белкам принцип изоэлек-грического фракционирования при помощи переноса в электрическом поле, применяя прибор, показанный на рис. 25. Это 12-камерный аппарат из перспекса с пергаментной бумагой в качестве катодной мембраны, кожей 5 качестве анодной мембраны и фланелью в качестве промежуточной мембраны. Перемешивание достигается горизонтально колеблющимся стеклянным стержнем. После достижения стационарного состояния все отделения опорожняются сразу и одновременно, для чего имеется специальное приспособление. Из табл. 1 можно видеть разделение, достигнутое для яичного альбумина и гемо глобина в 0,005 п. растворе сульфата натрия после 24-часового опыта. Видно, что разделение почти полное, юлько одна ячейка содержит оба белка. [c.255]

Прибор Гана и Тп-зелиуса [50] изображен на рис. 29. Для поддержания постоянного значения pH они также применяли протекание буферного раствора, который, однако, прохо-дпл через электродные камеры а и г. Электродами служила платиновая проволока мембраны /1, Б и Г непроницаемы для белков, б--фильтровальная бумага. Перенос, приводящий к очистке, происходит в камерах в и г аналогично переносу в приборе Теорелла. Две камеры а и б добавлены для предохранения от слишком большого падения потенциала на центральной мембране В. При подборе мембран подходящей проницаемости или лучше при экра-ргировании мбхмбран А или Г можно было регулировать по желанию распределение градиента потенциала в аппарате. Ган и Тизелиус применили прибор для очистки продажного пепсина п лабораторного приготовления муци-назы. Первый был очищен в 9,4 раза, последний в 2,2 раза [c.266]

При электрофорезе в аппарате Тизелиуса (в боратном буфере) были обнаружены два компонента быстро движущийся,, составляющий главную часть препарата и медленно движущийся. Оба содержали глюкозу и маннозу и давали окрашивание с йодом. Осажденный в виде медного комплекса и затем регенерированный эремуран содержал глюкозу и маннозу в отношении 1 2. Выделенный из медного комплекса, он терял свою растворимость в воде, однако его хлопья, суспендированные в воде, окрашивались йодом в темный красно-бурый цвет. Слюнная амилаза и 3-амилаза не расщепляют эремуран. [c.216]

Имеются еще два способа использования аппарата Тизелиуса для электрофореза по методу свободной границы, которые позволяют оценить гомогенность и полидисперсность макромолекулярных препаратов, а именно метод стационарной восходящей границы [25] и метод обратимого расширения границы [26, 27]. Оба метода позволяют отличить монодисперсные препараты от полидисперсных и не обязательно связаны с гомогенностью, как она определена здесь. Первый метод требует наблюдения восходящей границы при продолжительном электрофорезе. При этом наблюдается эффект обострения границы вследствие изменения проводимости в области ее зоны для монодисперсных препаратов этот эффект через некоторое время уравновешивается размыванием границы за счет диффузии. Форма границы становится тогда постоянной. Такое стационарное состояние не достигается для полидисперсных препаратов (метод не вполне строг [14]). Метод обратимого расширения границы предусматривает наблюдение стационарной границы в изоэлектрической точке. Граница электрофоретически полидисперсного материала будет расширяться в электрическом поле, и это расширение будет налагаться на расширение, вызываемое диффузией. Однако в противоположность расширению, вызываемому диффузией, электрофоретическое расширение будет обратимым при изменении направления тока [28]. Кажущийся коэффициент диффузии, рассчитанный для расширяющейся границы в электрическом поле Е в см), может быть представлен как функция времени [c.46]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология