Кумасси

ОПРЕДЕЛЕНИЕ С КУМАССИ СИНИМ [c.83]

Метод основан на связывании с белками одного из кислых красителей кумасси синего, выпускаемого в двух модификациях R-25Q и G-250. При связывании с белками спектр поглощения красителя меняется интенсивности окраски от концентрации белка в пробе и диапазоне 1—10 мкг/мл имеет линейную зависимость. [c.83]

Г, 1. Раствор красителя кумасси G-250 (с. 83). [c.85]

Широкое распространение в настоящее время получил так называемый зональный электрофорез — электрофорез на твердом носителе (на бумажных полосах, агаре, крахмале, акриламиде), пропитанном буферным раствором с нужным значением pH. Положение белков на бумаге или геле определяют путем фиксации и последующего окрашивания их тем или иным красителем (обычно бромфеноловым синим, ами-довым черным или кумасси синим). Количество белка в каждой фракции можно ориентировочно определять по интенсивности окраски связанного красителя. Такое определение не дает строго количественного соотношения белковых фракций, так как количество красителя, связываемого различными белками, неодинаково. [c.89]

Краситель кумасси J -250 — 0,04%-ный раствор, приготовленный на 20%-ном изопропаноле и 10%-ной СНзСООН. [c.120]

Кумасси / -250 — 0,04%-ный раствор, приготовленный на смеси изопропанол—этанол—уксусная кислота—вода в соотношении 2 1 1 6. [c.122]

Определение концентрации иммобилизованной ЛДГ. Концентрацию иммобилизованной ЛДГ определяют по модифицированному методу Бредфорд (с. 85). Приготовленный раствор Кумасси 0-250 хранят при комнатной температуре в защищенном от света месте. Через 2— [c.387]

Метод основан на образовании окрашенного в синий цвет комплекса красителя кумасси ярко-голубого 0-250 с белком. [c.31]

Приготовление реактива Бредфорд 0,05 г кумасси ярко-голубого G-250 растворяют в мерной колбе вместимостью 500 мл в 25 мл 95 % спирта, прибавляют 50 мл 85 % раствора кислоты ортофосфорной и доводят объем раствора водой до метки. [c.35]

Приготовление раствора кумасси ярк о - г ол у б о г о Q-250 0,06 г кумасси ярко-голубого G-250 растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в растворе хлористоводородной кислоты (0,6 моль/л) и доводят объем раствора той же кислотой до метки, фильтруют. Оптическая плотность полученного раствора при длине волны 465 нм должна быть не менее 1,3 и не более 1,5. [c.35]

Краситель кумасси синий для белков [c.376]

С использованием красителя Кумасси-бриллиантового голубого [1] [c.34]

В спектрофотометрическую кювету с длиной оптического пути 1 см вносят 0,1 мл суспензии иммобилизованного на сефарозе белка, добавляют 2 мл раствора кумасси, перемешивают при комнатной температуре 2—3 мин и быстро измеряют оптическую плотность смеси при 595 нм, используя в качестве контроля кювету, содержащую 0,1 мл суспензии неактивированной сефарозы и 2 мл красителя. Для построения калибровочного графика к 0,1 мл суспензии неактивированной се-<фарозЫ добавляют от 2 до 20 мкг исходного препарата белка и 2 мл раствора красителя, а затем измеряют оптическую плотность. С помощью данного метода можно определить содержание белка в препаратах иммобилизованных ферментов, содержащих более 10 мкг белка в [c.85]

После завершения электрофореза прибор отключают от источника тока, сливают буферный раствор, трубочки вынимают из прибора и с помощью стальной иглы (под слоем воды) или водой, вводимой шприцом между поверхностью геля и стенкой трубочки, выталкивают столбик геля в 7%-ный раствор уксусной кислоты. Столбики геля помещают в пробирки и добавляют раствор красителя амидового черного 10 Б. Время окрашивания 5—10 мин. В качестве красителя можно использовать кумасси R-250. В этом случае прокрашивают 1—2 ч при комнатной температуре. После окрашивания избыток красителя отмывают 7%-ным раствором уксусной кислоты, цилиндрики геля сохраняют в том же растворе кислоты. [c.96]

После окончания электрофокусирования гели извлекают из трубок. Часть гелей прокрашивают для выявления белковых зон, а один или два геля используют для измерения градиента pH, сформированного в ходе изоэлектрофокусирования. Существует много вариантов окраски гелей. Один из них состоит в том, что гели погружают на 1 ч в 0,075%-ный раствор кумасси (7-250 в 3,5%-ном растворе НСЮ4. Затем гели 3— [c.101]

Для выявления белков при электрофорезе в гелях их обрабатывают одним из следующих красителей бромфеноловым синим, амидо черным 10В, кислотным синим 83, кумасси бриллиантовым голубым R-250 и др. Интенсивность окраски и соответственно относительное содержание каждой белковой фракции обычно определяют денситометрнчески путем прямого сканирования на денситометре. В последние годы стали применять методы электрофореза белков с градиентом концентрации геля, что значительно повышает разрешающую способность, особенно при фракциони-ровании белков с высокой молекулярной массой, превышающей 50000-100000. [c.31]

Реагент. Кумасси бриллиантовый синий G-250 (100 мг) растворяют в 50 мл 95%-ного EtOH. Добавляют 100 мл 85%-ной (масс./об.) фосфорной кислоты. Разбавляют водой до 1 л. [c.466]

Для обнаружения белков на бумажной реплике можно использовать любой метод проявления, рекомендуемый при электрофорезе на бумаге. Преимущество лиссаминового зеленого (в виде насыщенного раствора в 5%-ной уксусной кислоте) по сравнению с амидо-черным В состоит в том, что избыток красителя отмывается полностью [8], давая совершенно чистый фон. В качестве высокочувствительного проявителя Моррис [9] предложил 0,01%-ный раствор нигрозина в смеси метанол — ледяная уксусная кислота — вода (50 40 10) с последующим промыванием в той же системе. Чувствительным красителем для проявления белков на бумаге является также кумасси бриллиантовый синий К-250, введенный Фазекашем де Сан Гро и др. [c.261]

Окрашивание и обесцвечивание. Гели опускают в небольшие пробирки с окрашивающим раствором. Раствор готовят из 1,25 г красителя кумасси ярко синего в смеси 454 мл 50%-ного метанола и 46 мл ледяной уксусной кислоты с последующим от-фильтровыванием нерастворившегося материала через ватман № 1. Окрашивание длится 2—10 ч при комнатной температуре. Затем гель удаляют из окрашивающего раствора, споласкивают дистиллированной водой и помещают в раствор для удаления избытка краски (обесцвечивания), состоящий из 75 мл ледяной уксусной кислоты, 50 мл метанола и 875 мл воды, не менее чем на полчаса. Далее гель обесцвечивают электрофоретически в том же аппарате в течение 2 ч, используя раствор для обесцвечивания. Длина геля после обесцвечивания, а также положения зон белков, окрашенных в синий цвет, измеряются. Гели хранят в 7,5%-ной уксусной кислоте. [c.423]

Наиболее надежными и универсальными красителями для белков являются амидовый черный 10В [109] и кумасси синий [12]. Наибольшее распространение получил универсальный краситель Stains-al [15], который окрашивает рибонуклеиновую кислоту в голубовато-розовый цвет, дезоксирибонуклеиновые кислоты и белки — в красный, кислотные полисахариды— в синий. [c.307]

Обесцвечивание гелей после обнаружения зон кумасси синим происходит с достаточной скоростью в процессе диализа в 12,5%-НОЙ трихлоруксусной кислоте. Самым простым, но длительным способом удаления из геля избытка амидового черного 10В также является обычный диализ. Гели, имеющие форму [c.308]

Зоны окрашивают так же, как описано для дискретного электрофореза в полиакриламидном геле. Наиболее чувствительным является обнаружение с помощью кумасси синего R250 (Serva, Гейдельберг) 1,25 г этого красителя растворяют в 227 мл метанола и добавляют 46 мл уксусной кислоты. Раствор разбавляют водой до 500 мл и фильтруют. Гели высушивают в течение 2—12 ч. Обесцвечивание проводят в растворе, содержащем 50 мл метанола и 75 мл уксусной кислоты в 1000 мл воды, путем диализа или электрофореза (см. выше). [c.347]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология