Био-гель градиент концентрации

Разработанный Лерманом и Фишером метод электрофоретического разделения близких последовательностей ДНК основан на использовании различий в температуре плавления, обусловленных нуклеотидными заменами [27, 28]. Они исходят из того факта, что последовательность оснований влияет на Гт области плавления и что конформация фрагмента ДНК обусловливает его подвижность в геле под действием электрического поля. Принцип метода — электрофорез ДНК в акриламидном геле фиксированной концентрации с линейно возрастающим к нижней части геля градиентом концентрации веществ, денатурирующих ДНК обычно мочевины или формамида (рис. 3, ). Электрофорезная камера нагревается до температуры примерно 60°С. [c.129]

Рис. 11.10. Схема системы для создания градиента концентрации раствори-гелей со смесительной камерой [13, с. 101]

Полупроницаемые мембраны бывают пористыми и непористыми. Через непористые мембраны растворитель и растворенные вещества проникают под действием градиента концентрации в результате молекулярной диффузии. Поэтому эти мембраны называют диффузионными. Они представляют собой квазигомогенные гели. Скорость диффузии компонентов через эти мембраны зависит от энергии активации при взаимодействии частиц компонентов с материалом мембран. [c.563]

Электрофорез в градиенте концентрации. Здесь опять речь идет о методе, при котором определяющую роль играет размер молекулы белка. Носитель состоит из полиакриламидного геля возрастающей концентрации (например, от 2 до 16 или от 3 до 30 % акриламида). В этом градиенте пористости белковые молекулы тормозятся, т. е. останавливаются, по мере того как ячейки сетки становятся все более мелкими. [c.40]

Диффузионные мембраны обычно применяют для разделения газов, жидких смесей методами испарения через мембрану, диализа. Диффузионные мембраны являются практически непористыми. Они представляют собой квазигомогенные гели, через которые растворитель и растворенные вещества проникают под действием градиента концентраций (молекулярная диффузия). [c.315]

Приведем существующую классификацию полупроницаемых мембран, применяемых при осуществлении процессов обратного осмоса и ультрафильтрации (рис. 6.36). Указанные мембраны могут быть пористыми и непористыми, причем последние являются квази-гомогенными гелями, через которые растворитель и растворенные вещества проникают под действием градиента концентраций (молекулярная диффузия), поэтому такие мембраны получили название диффузионных. [c.225]

Составы выделяющихся фаз определяются параметрами термодинамического равновесия. Однако свойства твердой фазы — геля, зависят не только от состава, но и его структуры, т. е. размеров структурных элементов и их взаимного расположения. Структура выделяющейся твердой фазы в основном определяется кинетикой перехода из одного фазового состояния в другие. Она обусловливается большим числом факторов скоростью охлаждения, градиентами концентраций, механическим полем и т. д. Структурные изменения в твердой фазе, связанные с разными путями перехода к одному и тому же термодинамическому равновесию, могут быть настолько велики, что физико-механические свойства материалов, например прочность нитей, могут количественно сильно различаться. [c.200]

На основе рассмотренных выше данных можно представить следующую картину осаждения. При соприкосновении осадительной ванны с вискозой на поверхности формующейся нити вследствие нейтрализации растворителя образуется зона значительного пересыщения, в которой практически мгновенно по спинодальному механизму возникают центры структурообразования. Вокруг этих, центров (рис. 7.36) в развертке 180° начинается рост фибриллярных структур полимерной фазы (геля). Через короткий промежуток времени (0,1—0,5 с) фибриллы, растущие из соседних центров, сталкиваются и взаимно подавляют свой рост во всех направлениях, кроме одного — перпендикулярного к плоскости соприкосновения вискозы с осадительной ванной. В начальной ЗО не, обозначенной на рис. 7.36 индексом а, образуется более плотная структура. Это мембрана, обнаруживаемая у большинства волокон, сформованных по мокрому способу. В дальнейшем происходит рост фибрилл только в одном направлении — перпендикулярном плоскости соприкосновения вискозы с осадительной ванной, где наблюдается наибольший градиент концентраций. [c.207]

Адсорбция вообще понимается как обогащение веществом на границе фаз, что особенно касается фиксации материала на внутренней поверхности коллоидного геля. Поэтому явления адсорбции характеризуются градиентом концентраций на граничных поверхностях дисперсоидов в отличие от молекулярных растворов. Разумеется, структура адсорбирующего геля особенно опре- [c.303]

Для бинарной смеси гексафторидов изотопов урана максимальная скорость потока будет ниже 100 м/с, и изотопная разность градиентов концентраций будет очень малой, однако если в качестве газа-носителя использовать водород или гелий, скорость звука в которых больше 1000 м/с, то эффект разделения существенно возрастёт. Таким образом, в зоне разворота потока у наружного края, как и у стенки ротора центрифуги, образуется обогащение по урану в целом по отношению к водороду или гелию и обогащение ураном-238 по отношению к урану-235. [c.195]

В отличие от гетерогенных процессов фракционирование смеси вещества в однофазной системе основывается не на перераспределении веществ при установлении равновесия, а на кинетике перемещения компонентов в силовом поле (электрическом, гравитационном) или при наличии градиента концентрации. На этих принципах основаны методы электрофореза, седиментации и диффузии. Если рассматривать сочетание аналитического и препаративного фракционирования, то наибольшее внимание следует уделить электрофорезу. Сложные смеси веществ могут быть с успехом разделены на основе использования этого метода. Во многих случаях он является равноценным по сравнению с лучшими вариантами хроматографии, а для некоторых систем даже превосходит хроматографические методы по эффективности. Особенно важным оказалось использование электрофореза при фракционировании смесей белков и нуклеиновых кислот в колонке, заполненной гелями как природных, так и синтетических полимеров. Степень разделения зон веществ при фракционировании методом электрофореза определяется отношением подвижностей компонентов в электрическом поле. Увеличение высоты колонки здесь также приводит к лучшему разделению компонентов, как и при хроматографии, хотя при электрофорезе нет многократного повторения элементарных актов межфазного переноса. [c.9]

Нуклеиновые кислоты характеризуются отчетливым отрицательным зарядом и очень высокой молекулярной массой. Поэтому нейтральные гомогенные гели с достаточно большими порами обеспечивают хорошее разделение этих соединений. Размер пор, требуемый для исследования нуклеиновых кислот и их субъединиц, можно определить методом гель-электрофореза при градиенте концентрации, как для белков (см. табл. 12.6). Если механические свойства неплотного полиакриламидного геля непригодны, можно использовать смешанный гель, содержащий 2,5% полиакриламида и 0,5% агарозы. При анализе субъединиц более низкой молекулярной массы концентрацию полиакриламида увеличивают до 3% при 0,5%-ной концентрации агарозы в [c.350]

Полупроницаемые мембраны могут быть пористыми и непористыми. Непористые полимерные мембраны являются квазигомо-генными гелями, через которые растворитель и растворенные вещества проникают под действием градиента концентраций (молекулярная диффузия). Поэтому такие мембраны часто называют диффузионными. Скорость, с которой проходят через мембрану отдельные компоненты. [c.45]

Ион-парной хроматографией в присутствии 0,2%-ного раствора ГФМК последовательно на двух различных колонках ig-силика-геля с элюцией линейными градиентами концентрации ацетонитрила (О—50% и 32,5—40%) удалось очистить и разделить две очень близкие формы фактора роста из эпидермиса слюнной железы мыши [Burgess et al., 1982]. [c.206]

Для очистки мембранной D-лактатдегидрогеназы Е. соИ хроматографией на оксиапатите [Pratt et al., 1979] был использован пологий линейный градиент концентрации (0—0,2 М) К-фосфатного буфера, pH 7,2 (500 мл для колонки размером 2,6 X 20 см). Растворимость белка обеспечивали включением в состав буфера детергентов (1% Тритона Х-100 и 0,1% ДДС-Na). Очистке на оксиапатите предшествовали освобождение фермента из ме.мбрин с помощью дезоксихолата натрия, хроматография на DE-52 и гель-фильтрация на сефадексе G-200. На всех хроматографических этапах очистки в составе элюентов тоже присутствовали детергенты. [c.234]

М мочевины, 1 мМ ДТТ и 0,5% метиламина. На колонке СМ-целлюлозы (1 X 30 см) линейным градиентом концентрации Na l (О—0,4 М) смесь белков удавалось разделить примерно на 20 фракций (рис. 122). Конечно, по своему качеству это разделение уступает двумерному электрофорезу рибосомальных белков, но зато его можно вести в любом препаративном масштабе и нет проблемы элюции белков из геля. [c.311]

Индивидуальные рРНК в препаративных кол-вах получают из изолнр. субчастиц рибосом или ультрацентрифугированием суммарной РНК в градиенте концентрации сахарозы. Для аналит. целей индивидуальные рРНК м.б. получены с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. [c.266]

Для контроля за степенью очистки белков чаще применяют метод электрофореза. Большинство авторов в качестве носителя используют гомогенные гели или градиент концентрации акриламида. Основной способ при этом — электрофорез в диссоциирующей среде ДДС-Na соответственно процедуре, которую описал Лэммли [68]. В определенных случаях завершающим приемом при этом являются иммунодиффузия [29, 114] либо иммуноэлектрофорез [17, 80, 118]. При исследовании структуры некоторые авторы прибегают к двумерному электрофорезу. Тогда первая миграция молекул может происходить в гомогенном геле полиакриламида с ДДС-Na или без него во втором направлении молекулы мигрируют в полиакриламидном геле с ДДС-Na в присутствии восстановителей дисульфидных связей (р-меркапто-этанол) [10, 40, 61, 78]. Чтобы охарактеризовать субъединицы легуминов гороха и конских бобов, Матта и др. [77, 78] применяют сочетание ДДС-Na с р-меркаптоэнталом и электрофокусированием. Рестани и др. [92 пользуются этим же способом применительно к глобулинам люпина, а Ху и Еэзен [53] демонстрировали гетерогенность белков сои. Указанные методы с [c.155]

Для выявления белков при электрофорезе в гелях их обрабатывают одним из следующих красителей бромфеноловым синим, амидо черным 10В, кислотным синим 83, кумасси бриллиантовым голубым R-250 и др. Интенсивность окраски и соответственно относительное содержание каждой белковой фракции обычно определяют денситометрнчески путем прямого сканирования на денситометре. В последние годы стали применять методы электрофореза белков с градиентом концентрации геля, что значительно повышает разрешающую способность, особенно при фракциони-ровании белков с высокой молекулярной массой, превышающей 50000-100000. [c.31]

Среди тех молекул, которые способны проникнуть в поры геля, быстрее всего туда проникают молекулы наиболее низкомолекулярных фракций, имеющих минимальные гидродинамические размеры, они же занимают большую часть объема пор, тогда как молекулы средних размеров проникают в поры медленнее и занимают лишь часть объшаа пор. Бели после этого еще раз промыть колонку чистым растворителем, то подвижная фаза уже не будет содержать молекул полимера, а неподвижная будет обогащена рш, и градиент концентрации заставит молекулы полимера ди ун-дировать в противоположном нащ>авлении — из пор. [c.117]

Разработан общий метод разделения антибиотиков группы стрептотрицина, заключающийся в хроматографировании на СМ-целлюлозе в градиенте концентраций хлорида натрия [47]. Этим методом было показано, что все антибиотики данной группы представляют собой смеси из шести стрептотрицинов, которые отличаются между собой числом остатков L-p-лизина. Стрептотрицины разделяли также на СМ-целлюлозе в пиридинацетатном буферном растворе и методом гель-хроматографии на сефадексе LH-20 [48, 49]. Таким путем было показано, что раце-момицины А, С, В и D идентичны стрептотрицинам F, Е, D и С [c.219]

Колонки с модифицированными гелями (50X5 мм) предварительно уравновешивались при 4 °С 10 мМ буфером (КН2РО4+КОН, pH 7,5), содержащим 0,02% азида натрия. Объем образца фермент — белок, наносимого на колонку, равен объему колонки после нанесения образца. колонка промывалась несколькими объемами уравновешивающего буфера в линейном градиенте концентрации КС1 (от О до 1,0 моль/л общий объем элюата 20 мл) с последующим ударом 200 мкл 5 мМ NADH, наносимого на колонку так же, как и смесь фермент — белок. Скорость потока 8,0—10,0 мл/ч объем фракции 1,4 мл. [c.72]

В ЭТОМ случае ему удалось наблюдать колебания, когда концентрации соли в растворах по обе стороны мембраны были одинаковыми. Помещая один из двух электродов, предназначенных для измерения электропроводности, непосредственно в слой ионообменной смолы и изменяя положение этого электрода, Теорелл обнаружил, что при прохождении постоянного тока в мембране устанавливался градиент концентраций. Возникновение такого градиента вызвано различием в, числах переноса ионов в мембране и растворе, в результате которого у одной поверхности мембраны концентрация противоионов убывает, у другой — растет. Теорелл постулировал, что колебания и в этом случае происходят вследствие искажения концентрационного профиля, если поток объема значителен, или вследствие релаксации, если поток объема близок нулю. Хотя при исследовании слоя ионообменной смолы явления могут быть в некоторой степени осложнены, следует считать, что они определяются теми же физическими причинами, что ив случае обычных мембран. Форгакс [63] обнаружил также колебания электрического потенциала при прохождении постоянного тока через ионообменные (катионо- и аниопообменные) мембраны и через гель агар-агара. [c.504]

В этом методе электрофореза используется электрофоретическое перемещение макромолекул в среде с градиентом плотности пор геля. Конечный результат — разделение смеси на отдельные компоненты в соответствии с размерами молекул, при этом электрофоретическая подвижность не играет существенной роли. Необходимым условием такого разделения является наличие у исследуемых соединений зарядов одного типа и отличной от нуля электрофоретической подвижности в применяемой среде. Движение веществ от старта постепенно тормозится вследствие уменьшения пор геля, и с увеличением расстояния от старта подвижность макромолекул постепенно уменьшается. При больших молекулярных массах нодвил ность уменьшается почти до нуля. Ограничение подвижности, вызываемое гелем, приводит к фокусированию зон. Для того чтобы подвижность снижалась до нуля, наряду с градиентом концентрации акриламида необходимо наличие градиента степени сшивки геля. Поэтому в новых типах гелей имеется градиент концентраций и полиакриламида, и бисакриламида. На этих гелях можно разде- [c.299]

Рис, 12,8. Зависимость расстояния, на которое мигрируют зоны белков различной молекулярной массы, от длительности электрофореза при данном градиенте концентрации полиакриламидного геля (с разрешения фирмы Isolab In .). [c.300]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНОЙ МАССЫ БЕЛКОВ С ПОМОЩЬЮ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ В ЛИНЕИНОМ ГРАДИЕНТЕ КОНЦЕНТРАЦИИ Г901 [c.347]

Имеются две основные модели, с помощью которых можно вывести уравнения, предсказывающие влияние как температурного градиента, так и градиента концентрации растворителя на эффективность фракционирования. Первая из этих моделей предложена Капланом [22]. Каплан приводит экспериментальные факты, свидетельствующие о том, что фазовая диаграмма для раствора аморфного полимера представляет собой асимметричную кривую смешения с критической точкой, весьма близко расположенной к ординате растворителя. Поэтому Каплан постулирует, что описывающая состояние разбавленного раствора полимера при охлаждении точка пересекает кривую смешения и в осадок выпадает очень вязкая или гелеобразная фаза, находящаяся в равновесии с гораздо большим объемом практически чистого растворителя. Эта модель предполагает, что разбавленный раствор подобного типа присутствует в любой содержащей полимер зоне колонки. Как следует из расчетов Бейкера и Вильямса, гель будет выпадать в осадок при температуре, соответствующей 0-температуре Флори [37], т. е. темиературе, при которой, согласно Флори, происходит разделение фаз в системе растворитель — полимер бесконечного молекулярного веса. Обогащение смеси лучшим растворителем приведет к растворению геля и последующему выделению его в осадок, но уже при меньшей темнед)атуре. Объем элюирующей жидкости, протекающей через колонку в любой момент времени, считается малым по сравнению с объемом, взятым для создания полного градиента концентрации растворителя. Следовательно, различием между составами растворителя в верхней и нижней частях колонки можно пренебречь, Исходя из этого, Каплан получил уравнение [c.101]

Смотреть страницы где упоминается термин Био-гель градиент концентрации: [c.93] [c.5] [c.119] [c.178] [c.188] [c.206] [c.211] [c.309] [c.129] [c.453] [c.20] [c.54] [c.277] [c.277] [c.278] [c.66] [c.76] [c.81] [c.300] [c.300] [c.348]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология