Экворин

РИС. 13-30. Структура люциферинов из нескольких светящихся организмов. Приведен формулы активированных молекул, готовых к реакции с О2. Однако соединени AF-350 является продуктом расщепления светящегося белка экворина, активируемог [c.72]

Концентрация свободных ионов кальция в тканях чрезвычайно низка, и до последнего времени не существовало надежного метода для ее количественной оценки. Сейчас в этих целях используют метод, основанный на измерении интенсивности кальций-зависимой флуоресценции белка экворина (гл. 13, разд. 3). [c.375]

С использованием белка экворина, светяш егося в присутствии следовых количеств удалось показать, что поступление Са в аксон при возбуждении происходит в две фазы. Первая фаза совпадает по времени с входяш им Ма -током и блокируется ТТХ. Вторая фаза, длительностью несколько секунд, нечувствительна к ТТХ и ТЭА, но подавляется при введении в среду Мп, а также, верапамила и ингибитора Са2 -канала—1)-600. Очевидно, быстрый Са2 -ток обусловлен переносом Са по Ма -каналам, а медленный — активацией небольшого числа специфических Са2 -каналов. Са2 -каналы обнаружены также в пресинаптических мембранах отростков нейронов. [c.149]

Второй метод - люминесцентный анализ. Он позволяет регистрировать в эксперименте перенос ионов кальция с помощью белка экворина, получаемого из светящихся медуз. Особенность этого белка заключается в том, что, обладая высоким сродством к ионам Са +, он люминесцирует в их присутствии. Экворин вводится в препарат сердечной мышцы, и с помощью специальной оптической аппаратуры регистрируется изменение интенсивности свечения во времени. Полученные результаты позволяют описать процессы переноса ионов кальция при генерации потенциала действия в мышце сердца. [c.110]

Общим для любых мышечных клеток является процесс освобождения ионов Са + и внутриклеточных депо - саркоплазматического ретикулума и дальнейшая активация сокращения. Ход кальциевого выброса из СР экспериментально наблюдается с помощью люминесцирующего в присутствии ионов Са + белка экворина, который был выделен из светящихся медуз. [c.161]

Ill, хлортетрациклин, экворин, квин-2 и фура-2. Кальциевый индикатор мурексид (пурпурат аммония) применяют уже четверть века в основном в опытах с изолированными клеточными органеллами. Высокое значение Kd комплекса мурексид с Са + (3 мМ) позволяет пренебречь буферной способностью данного индикатора, но в то же время ограничивает его применение диапазоном концентрации Са + выше 10 мкмоль/л. Чаще всего мурексид используют в опытах на изолированных митохондриях, Са-транспортирующая система которых имеет относительно низкое сродство к Са + (см. гл. 4). [c.30]

В 1962 г. появилось сообщение о выделении из медузы Aequorea aequorea белка, испускающего свет в присутствии Са +. Этот белок, получивший название экворин, отличали высокая чувствительность и специфичность по отношению к Са +. Возникла мысль использовать его в качестве индикатора кальциевых ионов внутри клеток. До самого последнего времени экворин широко применяли в исследованиях на самых различных одиночных клетках. [c.31]

Реакция экворина с кальцием протекает следующим образом [c.31]

Наиболее информативными были исследования (D. G. Allen, J. R. Blinks, 1978), в которых сравнивали кинетику изменения сигнала экворина и цикл сокращения — расслабления волокон скелетной и сердечной мышц. Обращает на себя внимание, что при одноразовой электрической стимуляции мышцы люминесцентный сигнал достигает своего максимума менее чем за 10 мс после импульса (рис. 9). Все это время мышца находится в покоящемся состоянии затем происходит медленное уменьшение сигнала и рост силы мышечного сокращения. Лишь в тот момент, когда интенсивность люминесценции вновь близка к исходной, развивается максимальный сократительный [c.31]

Рис. 9. Люминесцентный (1) и механический (II) ответы при одиночном сокращении волокна скелетной мышцы лягушки после инъекции экворина (по Д. Блинксу и др., 1981)

К интерпретации результатов опытов с экворином, однако, следует подходить с осторожностью. Интенсивность его люминесценции при активации клетки увеличивается по крайней мере в 1000 раз. В то же время концентрация свободного кальция при этом меняется не более чем в 40 раз. Кроме того, следует учитывать, что в возбужденной клетке существует градиент по ионам кальция (рис. 10). Поскольку кривая зависимости люминесценции экворина от Са + характеризуется значительной крутизной в области концентрации катиона от 0,1 до [c.32]

Наиболее серьезные аргументы в пользу физиологической значимости Са-индуцированного выброса Са + из саркоплазма-матического ретикулума получены А. Фабиато на одиночных клетках сердца, лишенных сарколеммы (А. РаЬ1а1о, 1985). Этим ученым выполнены поистине ювелирные эксперименты с использованием нескольких микроманипуляторов и микропипеток, предназначенных для введения в клетку различных веществ и регистрации сократительной активности. Соответствующие сигналы, поступающие в результате изменений формы клетки и концентрации Са +, регистрируемой по свечению экворина, обрабатывали с помощью компьютера. [c.85]

Опыты были проведены на клетках Пуркинье сердца собаки, в которых все миофибриллы окружены плотным слоем саркоплазматического ретикулума, состоящего из трубочек и так называемого соединительного ретикулума. Последний способен к выбросу Са +, но не имеет контакта с сарколеммой. Под контролем микропроцессора с помощью микроинъекций было возможно изменять концентрацию Са + у поверхности саркоплазматического ретикулума за время около 1 мс. Оказалось, что спонтанные сокращения кардиомиоцита и сопутствующие им поглощение и выброс Са + могут изменяться при дополнительном внесении Са + в участок, непосредственно примыкающий к области цистерн. При этом, когда флуоресцентный сигнал экворина увеличивается (что соответствует увеличению концентрации Са + в цитоплазме), внешний вызывает [c.85]

Кроме вышеупомянутой -галактозидазы в качестве белков-репортеров в настоящее время интенсивно используются и другие природные или генетически модифицированные белки, включая хлорамфениколацетилтрансферазу, различные флуоресцирующие белки, например, люциферазу светлячков, обелин, экворин, а также зеленый флуоресцирующий белок (GFP) и его аналоги. Флуоресцирующие белки, т.е. белки, способные испускать свет в результате контакта с электромагнитным излучением, в последнее время получили очень широкое распространение. Поэтому некоторые их свойства и области их применения будут кратко рассмотрены ниже. [c.383]

Биолюминесценция. Некоторые живые организмы обладают способностью светиться, испуская электромагнитное излучение в видимой части спектра. Биолюминесценцией называют образование видимого света в результате химической реакции, протекающей в живом организме. Этот важный биологический феномен используется организмами для защиты от внешних врагов, при половом размножении и в целях маскировки. В настоящее время описано более 30 различных биолюминесцентных систем у бактерий, грибов, червей, ракообразных, насекомых и рыб [186]. Во всех этих системах, как и в случае с рассмотренным экворином, [c.383]

Экворин отвечает большинству требований, предъявляемых к белкам-репортерам. Тем не менее, широкое его использование в молекулярно-биологических исследованиях, по-видимому, сдерживается зависимостью от внешнего субстрата, колентеразина, а также характером люминесценции, которая происходит в виде вспышки с продолжительностью 5 сек, что создает определенные затруднения в детекции белка в динамических опытах. Однако благодаря чрезвычайно высокой чувствительности систем, созданных на основе экворина, он постепенно внедряется в практику, хотя несоизмеримо более низкими темпами, чем его природный партнер - GFP. [c.387]

На основе экворина были созданы клеточные микросенсоры для быстрого обнаружения патогенных вирусов и бактерий. Для этой цели генно-инженерными методами были получены В-клеточные линии, экспрессирующие на своей поверхности молекулы разных иммуноглобулинов, специфичных в отношении конкретных возбудителей, а также апоэкворин. Взаимодействие иммуноглобулинов с лигандами запускает внутриклеточный каскад [c.390]

Биохимия Том 3 (1980) -- [ c.74 , c.375 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.198 , c.199 ]

Биохимия мембран Кальций и биологические мембраны (1990) -- [ c.30 , c.32 ]

Искусственные генетические системы Т.1 (2004) -- [ c.383 , c.385 , c.390 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.198 , c.199 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология