Реконструкция вирусов

Книга дает сведения о химии вирусов бактерий, растений и животных. В ней обсуждаются следующие темы выделение вирусов, получение препаратов вирусов и их компонентов, состав и структура вирусных компонентов, модификация и мутагенез, реконструкция вирусов из их компонентов, репликация вирусов и, наконец, биология опухолеродных вирусов и умеренных фагов. [c.9]

На ранних этапах изучения инфекционной РНК ВТМ важно было установить отсутствие в ней вирусного белка с большей точностью, чем это позволяет чувствительность описанных методов. При использовании стандартных методов выделения нуклеиновых кислот содержание белка в выделенном препарате редко бывает ниже 1 %, а в случае ВТМ это соответствует комплексу одной молекулы РНК ВТМ с одной субъединицей оболочечного белка. Однако если выделять РНК в присутствии бентонита, то загрязнение препарата белком значительно снижается. А в случае ВТМ содержание примеси можно снизить еш,е больше (до 1 белковой субъединицы на 20—50 молекул РНК), если использовать метод реконструкции вируса (см. ниже). Определение следовых количеств примесей всегда сопряжено с трудностями методического характера, а достоверность результатов, полученных с помощью различных тестов на минимальных концентрациях веществ, сомнительна. Для определения примеси белка в препаратах вирусных нуклеиновых кислот были поставлены опыты с радиоактивной меткой ( 8) белка. Все, что удалось извлечь из этих опытов, сводится к тому, что содержание остаточного белка, судя по количеству метки, соответствует 0,04% (при пересчете на содержание серы в белковой оболочке ВТМ). Действительно, то соотношение аминокислот, которые в следовых количествах были обнаружены в препаратах нуклеиновых кислот, не соответствует количественным соотношениям этих же аминокислот в белковой оболочке. Тот факт, что препараты, содержащие 0,04 и 1% белка, не различаются по своей инфекционности (на 1 мг РНК), убедительно доказывает, что инфекционность — свойство, присущее вирусной РНК [142, 455]. Положение это убедительно было доказано только для РНК ВТМ. Однако нет никаких оснований сомневаться в том, что вывод этот носит общий характер и что инфекционность всех вирусов заключена в их нуклеиновых кислотах. [c.179]

СБОРКА И РЕКОНСТРУКЦИЯ ВИРУСОВ [c.215]

СБОРКА II РЕКОНСТРУКЦИЯ ВИРУСОВ 217 [c.217]

Хотя РНК вирусов этой группы обычно можно разделить на два или три компонента, при реконструкции вируса из этой смеси РНК с соответствующим белком образуются преимущественно частицы одного типа, содержащие одну молекулу РНК, эквивалентную одной молекуле с молекулярным весом около 10 . [c.221]

Чем реконструкция изометрических вирусов отличается от реконструкции вирусов бактерий [c.287]

Единственный генетический эксперимент, который может быть поставлен на ВТМ, заключается в том, что используется РНК различных мутантов ВТМ. Мутанты отличаются друг от друга либо морфологически но внешней картине некрозов, которые образуются на листьях, либо по патологии заболевания. Суш,ествуют мутанты ВТМ, приводяш,ие только к местным поражениям листьев, в которые введен впрус, в то время как обычно встречаю-Ш.ИЙСЯ дикий тип ВТМ есть общее заболевание всего организма. Извлекая из разных мутантов ВТМ отдельно РНК и белок, мы можем произвести реконструкцию вирусов, соединяя различные РНК с гомологическими белками от других мутантов. В результате получаются вполне активные вирусные частицы, причем они всегда несут в себе признаки того мутанта, от которого взята РНК, и не воспринимают никаких качеств от мутанта, давшего белок. К сожалению, более сложные генетические опыты с ВТМ невозможны, так как для него не удается наблюдать генетическую рекомбинацию. [c.359]

В последнее время Френкель-Конрат, Цугита, Ниренберг и Матеи изучили свойства того специфического белка, который синтезируется рибосомами Е. соН под действием вирусной РНК. По всем данным, это настоящий белок ВТМ. У него та же иммунологическая специфичность, он точно так же хроматографируется на DEAE-целлюлозе наконец, если смешать радиоактивный белок, синтезированный на рибосомах с нерадиоактивным белком ВТМ, служащим носителем, и осуществить с полученной смесью экснеримент по реконструкции вируса из белка и РНК, то радиоактивный белок войдет в частицы вируса вместе с носителем. Единственное, чем синтетический белок отличается от природного, это, по-видимому, присутствие некоторого количества незавершенных фрагментов белковых макромолекул, вследствие чего при реконструкции вируса используется лишь часть радиоактивного белка, а сам процесс реконструкции затрудняется. [c.478]

Много полезных сведений получит читатель и при знакомстве с разделом об инфекционности вирусных нуклеиновых кислот в опытах in vivo и in vitro (гл. X) — факт, впервые установленный X. Френкель-Конратом в опытах по реконструкции вирусов. [c.6]

К главным событиям этого периода, благодаря которым вирусология из описательной науки превратилась в экспериментальную, вероятно, следует отнести следующие выделение чистых вирусов, начавшееся с работы Стенли по выделению вируса табачной мозаики выяснение Дельбрюком с сотрудниками механизма репликации фагов развитие представлений о ДНК и РНК как об активном начале вирусов (работы Херши и Чейз, Гирера и Шрамма, Френкель-Конрата) реконструкция вирусов и получение смешанных вирусных частиц (опыты Френкель-Конрата, выполненные совместно с Вильямсом и Сингером) ренатурация вирусных белков, проведенная [c.12]

Теперь мы рассмотрим условия, необходимые для реконструкции вирусов посмотрим, до какой степени вирусные частицы, произведенные in vitro, идентичны вирусным частицам, образующимся in vivo обсудим, каким образом опыты по реконструкции можно использовать для изучения механизма вирусной инфекции. При этом мы будем рассматривать преимущественно ВТМ — единственный вирус, реконструкция которого хорошо изучена. Однако можно думать, что многие заключения, сделанные при изучении этой системы, имеют общее значение. [c.216]

ДНК мелких фагов [202]. Частицы, полученные с РНК ВТМ, характеризовались константами седиментации до 152S, а инфекционность их РНК была устойчива к действию РНК-азы [525]. Комплекс с рибосомной РНК имел двойной пик в соответствии с двумя компонентами рибосомной РНК. Мы уже упоминали, что, хотя вирусные частицы этой группы имеют такие же размеры и такое же содержание белка, как и вирус желтой мозаики турнепса, они тем не менее содержат вдвое меньше РНК. Исходя из этого, можно понять, почему в такие оболочки удается загнать удвоенное количество РНК. Но удивительнее всего, что сказанное относится лишь к посторонней РНК— при реконструкции вируса с гомологичной РНК ее количество в вирусной частице никогда не бывает удвоенным. Неожиданным в опытах оказалось и то, что белки различных вирусов рассматриваемой группы, по многим свойствам непохожие друг на друга, тем не менее оказались способными взаимодействовать между собой с образованием частиц со смешанными оболочками [536]. Вирусоподобные частицы образуются также и в отсутствие нуклеиновой кислоты, но в противоположность другим верхним компонентам вируса они при этом отличаются от вируса по электрофоретической подвижности [27]. [c.222]

Изучение реконструкции вирусов растений и мелких бактериофагов in vitro указывает на то, что сборка простых вирусов — это спонтанный процесс, осуществляемый за счет общего повышения энтропии процесс этот происходит быстро — после того, как концентрация белка и нуклеиновой кислоты достигнет некоторой достаточной величины. С другой стороны, мы уже обсуждали необходимость в факторе созревания для стабилизации пикорнавирусов (гл. IX, разд. Б). Как показывают результаты полученные с аденовирусами и вирусом группы герпеса ДТП может носить более общий характер [407] Что касается созревания РНК-содержащих фагов то после того, как синтез потомства фага завершен (обычно когда накапливается около 10 ООО частиц на клетку) клетки Е. oli лизируют, а фаговые частицы высвобож даются в окружающую среду. В отличие от ДНК-содержа щих фагов в этом случае нет никаких указаний на суще ствование лизирующего фермента. Вирусы же растений остаются в клетках до тех пор, пока механические причины или же биологические переносчики не доставят их новому хозяину. [c.260]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология