Белки радиоактивная метка

При поглощении хлоропластами СО2, меченного С, первым органическим соединением, в котором обнаруживается радиоактивная метка, оказывается 3-фосфоглицерат. Две молекулы этого соединения образуются под действием присутствующего в хлоронластах фермента рибулозо-1,5-дифосфат — карбоксилазы (в листьях шпината его содержание составляет 16% общего количества белка). Этот фермент содержится в зеленых растениях, а также в пурпурных и зеленых бактериях. Реакция, катализируемая данным ферментом, отличается от других реакций карбоксилирования тем, что продукт карбоксилирования расщепляется тем же самым ферментом. Структура субстрата, к которому фермент проявляет абсолютную специфичность, не допускает образования наблюдаемого продукта путем прямого р-карбоксилирования. На основании косвенных доказательств было сделано предположение о реализации следующего механизма [c.175]

Определение количества фосфорилазы а. Из реакционной смеси отбирают аликвоты и помещают их на диски фильтровальной бумаги (ватман 3 ММ). Белок, нанесенный на фильтры, фиксируют 20%-ным раствором трихлоруксусной кислоты, после чего фильтры тщательно отмывают от не связанной с белком радиоактивной метки несколько раз сменяемым раствором 5%-ной трихлоруксусной кислоты. Затем фильтры обрабатывают смесью абсолютного спирта и ацетона (1 1) и подсушивают в термостате при 70—80° С (или на воздухе). Сухие фильтры помещают во флаконы со сцинцилляционной жидкостью. Определение радиоактивности проводится методом жидкостной сцинцилляционной спектрометрии. [c.224]

В целом, несмотря на неясность некоторых аспектов поведения в живом организме белка, меченного при помощи бифункциональных комплексонов радиоактивными метками, накопленный опыт убедительно свидетельствует о перспективности этого направления химии комплексонов [28, 84, 86, 1008— 1011], [c.504]

Другой проблемой, относящейся к мечению белков радиоактивным иодом, является степень гомогенности распределения метки в белке. В идеале желательно иметь материал, который постоянно содержит только 1 или 2 атома иода на молекулу белка, так как это соответствует наименьшим возможным изменениям протеина. Для создания такой степени иодирования необходимо сохранить низкий уровень иодирования (1/10), применяя при этом специальные мягкие окисляющие агенты для предотвращения потерь иодирующего агента на окисление 5Н-групп. [c.514]

Применяя гормон, связанный с полилизином, можно получить антисыворотку, специфичную к декапептиду ангиотензину. Если инкубировать такую сыворотку с ангиотензином, содержащим радиоактивную метку, а затем хроматографировать на сефадексе G-25, то можно установить, что он элюируется вместе с сывороточными белками и при этом объем выхода равен свободному объему (Kav = 0). Однако если постепенно увеличивать количество неактивного ангиотензина, то все большая часть радиоактивной метки будет обнаруживаться в низкомолекулярной области Kav = ) Такое поведение явно свидетельствует о присутствии в применяемой сыворотке специфического антитела. [c.149]

На ранних этапах изучения инфекционной РНК ВТМ важно было установить отсутствие в ней вирусного белка с большей точностью, чем это позволяет чувствительность описанных методов. При использовании стандартных методов выделения нуклеиновых кислот содержание белка в выделенном препарате редко бывает ниже 1 %, а в случае ВТМ это соответствует комплексу одной молекулы РНК ВТМ с одной субъединицей оболочечного белка. Однако если выделять РНК в присутствии бентонита, то загрязнение препарата белком значительно снижается. А в случае ВТМ содержание примеси можно снизить еш,е больше (до 1 белковой субъединицы на 20—50 молекул РНК), если использовать метод реконструкции вируса (см. ниже). Определение следовых количеств примесей всегда сопряжено с трудностями методического характера, а достоверность результатов, полученных с помощью различных тестов на минимальных концентрациях веществ, сомнительна. Для определения примеси белка в препаратах вирусных нуклеиновых кислот были поставлены опыты с радиоактивной меткой ( 8) белка. Все, что удалось извлечь из этих опытов, сводится к тому, что содержание остаточного белка, судя по количеству метки, соответствует 0,04% (при пересчете на содержание серы в белковой оболочке ВТМ). Действительно, то соотношение аминокислот, которые в следовых количествах были обнаружены в препаратах нуклеиновых кислот, не соответствует количественным соотношениям этих же аминокислот в белковой оболочке. Тот факт, что препараты, содержащие 0,04 и 1% белка, не различаются по своей инфекционности (на 1 мг РНК), убедительно доказывает, что инфекционность — свойство, присущее вирусной РНК [142, 455]. Положение это убедительно было доказано только для РНК ВТМ. Однако нет никаких оснований сомневаться в том, что вывод этот носит общий характер и что инфекционность всех вирусов заключена в их нуклеиновых кислотах. [c.179]

На рис. 4.4 показано, что радиоактивная метка может включаться во все возможные участки белка, в зависимости от той точки, в которой находился синтез данной молекулы в момент добавления метки. Но в целых, завершенных молекулах радиоактивность содержится только в том конце, который синтезируется последним. Если увеличить время мечения, то метку можно обнаружить и в начале молекулы. Из этого следует, что радиоактивность включается в обратном порядке-от конца к началу. Согласно этим данным, белок синтезируется в направлении от Н-конца к С-концу. [c.59]

Лишь белковая составляющая Т2 содержит серу (в составе аминокислот метионина и цистеина). Фаг Т2 размножали на бактериях, культивируемых в среде с радиоактивным изотопом 8, в результате чего белок фага был помечен этим изотопом. По меньшей мере 99% всего фосфора в фаге Т2 приходится на ДНК, ее пометили радиоактивным изотопом Эти радиоактивные метки позволяли проследить пути белка и ДНК фага Т2 при инфекции. [c.97]

Молекула ДНК обладает высоким отрицательным зарядом и, следовательно, в электрическом поле быстро движется к положительному электроду. При электрофорезе в полиакриламидном геле молекулы ДНК разделяются по размеру, так как меньшие молекулы легче и быстрее проходят через поры геля. Молекулы белка, связавшись с ДНК, вызывают уменьшение подвижности ее молекул в геле. Чем больше связавшийся белок, тем медленнее движется связанная с ним ДНК. Это явление лежит в основе метода, регистрирующего сдвиг подвижности в теле. С помощью этого метода удается обнаруживать даже следовые количества сайт-специфического ДНК-связывающего белка. Короткие фрагменты ДНК, длина и последовательность которых известна (полученные либо при клонировании ДНК, либо путем химического синтеза), метят радиоактивной меткой и смешивают с экстрактом клеток полученную смесь наносят на полиакриламидный гель и проводят электрофорез Если фрагмент ДНК соответствует области хромосомы, с которой связываются многие сайт-специфические белки, то при радиоавтографии выявляется серия полос, обладающих разной подвижностью. Белки, связанные с ДНК в каждой из полос геля, можно отделить, фракционируя затем клеточные экстракты (рис. 9-9). [c.102]

Введение радиоактивной метки. Каждая субъединица исследуемого белка должна содержать по крайней мере один аминокислотный остаток, по которому можно ввести радиоактивную метку. С целью повышения чувствительности рекомендуется вводить метку по нескольким точкам. Введение метки [c.60]

Эти два белка можно использовать для получения важной информации о механизме сопряжения между компонентами циклазной рецепторной системы. Благодаря их способности -К ADP-рибозированию удалось идентифицировать Ns и N во многих тканях посредством введения в эти N-белки радиоактивной метки с помощью [ P]NAD в качестве субстрата и их ауторадиографической детекции после электрофореза. [c.279]

Обработка фермент-субстратного комплекса альдолазы с диоксиаце-тонфосфатом боргидридом натрия при pH 6 (0°С) приводит к образованию ковалентной связи между белком и субстратом. Эти и другие данные свидетельствуют о промежуточном образовании шиффового основания (рис. 7-10). Использовав меченный С субстрат и восстановление боргидридом натрия [уравнение (7-41)], получили фермент, у которого был помечен лизин активного центра. Локализацию радиоактивной метки определяли анализом последовательности аминокислотных остатков и установили, что остаток меченого лизина занимает положение 227 в цепи, состоящей из 361 аминокислоты. [c.163]

Пример 9-А. Анализ белков, образующихся при заражении бактерии Е. соИ фагом Т4. Если . oli инфицировать фагом Т4, то это приведет к синтезу большого числа белков-медиаторов фага. Относительное количество каждого из них и протекание во времени его синтеза можно изучить с помощью диск-электрофо-реза, используя для обнаружения белка радиоактивную метку. Если смесь всех белков, содержащихся в инфицированной клетке, подвергнуть электрофорезу и затем окрашиванию, гель окажется окрашенным практически равномерно, поскольку в нем будут присутствовать тысячи белков. Однако инфицирование фагом Т4 приводит к прекращению синтеза белков клетки-хозяина, поэтому, если заражение проводить в присутствии Н-лейцина, бактериальные белки не будут радиоактивными. Таким образом, для изучения синтеза белков при заражении фагом Т4 нужно добавлять Н-лейцин через различные промежутки времени после заражения и отделять клетки через несколько минут после каждого добавления Н-лейцина. Затем белки выделяют и разделяют с помощью диск-электрофореза, а зоны обнаруживают с помощью авторадиографии. При этом можно заметить, что в разное время образуются различные зоны. [c.237]

Использование гель-фильтрации для освобождения от радиоактивных предшественников неоднократно цитировалось при описании методов введения радиоактивной метки в белки и нуклеиновые кислоты [Остерман, 1983]. Нередко обессоливание используют и на заключительном этапе очистки для освобождения не только от соли, но и от прочих низкомолекулярных примесей. Например, в одной из работ по выделению РНК-полимеразы очисткой белка на биогеле А-1,5т завершалась целая серия операций, включавшая различные варианты переосаждений белка и ионообмениой хроматографии [Vaisius, Horgen, 1979]. [c.138]

Остерман Л, А. Введение радиоактивной метки в белки//Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэдектрофорезом и радио-иэотопными методами/Под ред. Г. П. Георгиева. М., 1983. С. 236. [c.327]

Эта реакция лежит в основе широко используемого метода обнаружения шиффовых оснований в белках и введения изотопных меток. Например, можно использовать меченный изотопом альдегид или амин либо ввести радиоактивную метку, используя Н-содержащий боргидрид натрия (так называемый бортритид) для восстановления в реакции (7-39). Последующий гидролиз белка (кислотный или ферментативный) позволяет установить, с боковой группой какой аминокислоты был связан субстрат, а частичный гидролиз позволяет локализовать центр связывания в пептидной цепи. [c.144]

Уменьшение количеств белков и пептидов, необходимых для анализа их структуры, является одной из центральных проблем, стоящих перед исследователями. С целью ее решения ведется поиск новых методов изучения структуры, в частности более чувствительных способов идентификации производных аминокислот (см. с. 61). Один из перспективных подходов заключается в широком использовании радиоактивных методов анализа. В ряде лабораторий при деградации пептидов в секвенаторе применяется радиоактивный или С-ФИТ1Д. Можно вводить радиоактивную метку непосредственно в анализируемый белок. Для многих белков это достигается добавлением радиоактивно меченных аминокислот непосредственно в питательную среду, на которой выращивается культура, являющаяся источником исследуемого белка. Таким же путем оказывается возможным радиоактивно метить белок избирательно по определенным аминокислотным остаткам. Если белок, радиоактивно меченный, например, по остаткам лейцина, анализировать с помощью секвенатора, то простое измерение радиоактивности экстрактов, содержащих анилинотиазолиноны, позволяет безошибочно определить, в каких положениях полипептидной цепи в N-концевой области белка расположены остатки лейцина (рис. 31). Аналогичным образом можно определить положение и других аминокислотных остатков. Такой прием используется для анализа N-koh-цевой последовательности предшественников белков, доступных лишь в ничтожно малых количествах. Для исследования полной структуры он, однако, не применяется из-за дороговизны и трудоемкости. [c.79]

Во время роста в клетке имеется большое количество промежуточных и лабильных веществ. Современные методы исследования клеток, фракционирование, микроанализ составных частей, хроматографическое разделение и характеризация нуклеиновых кислот, авторадиография, использование радиоактивной метки и, для клеток с хорошо определенными ядрами, сравнение целых и энуклеированных клеток — все это позволило накопить множество фактов, на основании которых был создан ряд широко обсуждаемых в литературе теорий. В этих теориях фигурирует несколько различных типов РНК одни синтезируются в ядре и мигрируют к рибосомам, другие имеют низкий молекулярный вес некоторые относительно устойчивы, другие имеют малую продолжительность жизпи. Основное внимание в обсуждении обращено сейчас на чтение , перенос и транскрипцию генетической информации. Но в то же время все это связано со сложной системой растущих макромолекул. Большой интервал молекулярных весов, лабильность и необычайная реакционная спо собность — все это заставляет думать о растущих цепях, длина которых меняется и варьирует в широких пределах. Короткожи-вущая мессенджер — РНК действует, как постулируется, в качестве матрицы для синтеза белка на рибосомах, принося информацию от ДНК, тогда как другое лабильное вещество — РНК — переносчик действует как адаптер, ответственный за прикрепление нужной аминокислоты на нужное место. Однако все движение взад и вперед этих лабильных соединений сопряжено с постоянным ростом огромной стабильной макромолекулы. [c.529]

Главным компонентом фракции 1,5 М Na l НК является ДНК, которая составляет до 60% всей ДНК клетки. В клеточном ядре эта ДНК связана с гистонами или другими основными белками и экстрагируется только крепким солевым раствором. Она хорошо защищена белками, почти не включает радиоактивную метку и названа нами ста бильной ДНК. [c.66]

При иодировании тирозина последовательно образуются моно- и дииодтирозин (соответственно МИТ и ДИТ). Введение второго атома иода протекает с более высокой скоростью, по этому ДИТ является основным продуктом реакции. Степень замещения и распределение иодтирозина в пептидах, полученных после гидролиза белка, определяют по включению радиоактивной метки, а также методом дифференциальной спектрофото-метрии. [c.353]

В большинстве случаев, однако, фермент-субстратные производные недостаточно устойчивы по сравнению с исходными и конечными продуктами, и потому выделить их в сколько-нибудь заметных количествах не удается. Иногда такие лабильные промежуточные продукты можно стабилизировать за счет химической модификации. Так, например, инкубация альдолазы с радиоактивным диоксиацетонфосфатом или трансальдолазы с радиоактивным фруктозо-6-фосфатом в присутствии боргидрида натрия (восстанавливающий агент) приводит к необратимому включению радиоактивной метки в белок. В обоих случаях среди продуктов полного кислотного гидролиза белка был идентифицирован К-е-глицериллизин. Таким образом, при этих реакциях должно происходить образование шиффова основания (в результате реакции между кетогруппой молекулы субстрата и Е-аминогруппой остатка лизина), которое затем восстанавливается боргидридом натрия в стабильный вторичный амин [c.197]

После внедрения Т2-фага в клетку Е. oli образование новых рибосом и синтез бактериальной РНК в клетке прекращаются. Однако в существовавшие ранее рибосомы теперь включается новая РНК, для которой характерна большая скорость обновления и которая по своему составу соответствует фаговой, а не бактериальной ДНК. Поэтому в рибосомах начинается синтез фаговых белков. Эксперименты, проведенные с радиоактивной меткой, показали, что информационная РНК связывается с агрегатами 70 S-рибосом. После фаговой инфекции синтез информационной РНК клетки-хозяина прекращается и, будучи нестабильной, она быстро разрушается. [c.374]

Спрашивается какое вещество фаг впрыскивает внутрь клетки Этот вопрос был поставлен и решен еще в 1952 г. Херши и Чейз с помощью радиоактивной метки. Бактериофаг Tg выращивался меченным по нуклеиновой кислоте (40% веса) и по белку (60% веса) путем заражения бактерий Е. oli, выращенных на радиоактивной среде. После очистки радиоактивный фаг использовался для заражения нерадиоактивных клеток Е. соИ. После отделения клеток от фага измерялось по радиоактивности количество перешедшей ДНК и белка. Основной факт, найденный в этой работе, — переход ДНК из фага в клетку практически без белка (0,5% примеси белка к ДНК может являться ошибкой опыта). В дальнейшем меченый белок, если и проникает в клетку, то во всяком случае не участвует в построении новых фаговых частиц. В опытах Херши и Чейз удалось констатировать инъекцию 70% меченой ДНК всех использованных фагов.Потери (30%) в подобных экспериментах вполне естественны нужно учитывать, что среди частиц фага имеется некоторое количество нежизнеспособных и, кроме того, фаги могут прикрепляться не к клеткам, а к обрывкам клеток, погибших в результате лизиса, после чего они впрыскивают свою ДНК просто в среду, и она теряется. [c.364]

Был осуществлен синтез соответствующих производных пиримидиламинокислот, меченных изотопом С, используя которые удалось показать, что при инкубации меченой пиримидиламинокислоты с интактны-ми клетками Es heri Hia oli В., находящимися в логарифмической фазе роста, происходит включение радиоактивной метки в белки клеток указанного штамма [44]. [c.342]

Исследуя причины этого явления, Лидбеттер и Фостер (Leadbetter, Foster, 1959, 1960) предполагают, что неспособность метанокисляющих микроорганизмов использовать эти соединения как углеродные субстраты могла явиться следствием непроницаемости клеточных оболочек. Они экспериментально проверили это предположение в опытах с меченными по углероду субстратами. Авторы обнаружили, что радиоактивная метка включалась в белковую фракцию. Таким образом, было доказано, что некоторые углеродные соединения проникают через клеточную оболочку и даже участвуют в биосинтезе клеточных белков. Причин, почему испытанные метаболиты в такой мере, как это необходимо для роста, не используются клеткой, авторы не установили. [c.144]

Чтобы изучать столь сложный процесс, пришлось в течение длительного времени разрабатывать методику постановки экспериментов, которая позволила бы выделить из всей массы клеточных превращений нужный вид и проследить за его закономерностями. Наиболее широко при этом использовались опыты с аминокислотами, снабженными радиоактивной меткой. Если проследить за интенсивностью включения метки в те или иные клеточные элементы, то можно определить, где в клетке сосредоточены области наиболее интенсивного синтеза белка. Таким способом было установлено, что биосинтез белка связан с определенными клеточными структурами — рибосомами, построенными из рибонуклеопротеидов Это справедливо для всех клеток животного происхождения. В растениях интенсивное включение меченых аминокислот наблюдалось в хлоропла-стах клеток, у бактерий — на поверхности клеточных мембран и те и другие клеточные элементы также содержат рибонуклеопротеидные частицы. Менее интенсивно биосинтез белка протекает в клеточных ядрах и митохондриях. [c.482]

Кинетика индукции, изображенная на фиг. 237, указывает на то, что Р-галактозидаза образуется de novo, а не в результате вызванного субстратом превращения в активный фермент какого-то предсуществовавше-го внутриклеточного предшественника. Для доказательства этого предположения был разработан эксперимент с изотопной меткой принцип этого эксперимента был такой же, как и в случае, когда была опровергнута теория о превращении предшественников при развитии бактериофагов. Клетки Е. соН в течение нескольких поколений выращивали на среде, не содержащей галактозидных индукторов, в присутствии радиоактивной серы Радиоактивные бактерии переносили затем в нерадиоактивную среду без после чего вызывали в них синтез Р-галактозидазы путем добавления в среду индуктора. Когда из таких бактерий выделили и очистили р-галактозидазу, оказалось, что она не содержит Следовательно, этот фермент не мог возникнуть из белка, существовавшего в клетке до добавления индуктора, так как серусодержащие аминокислоты (цистеин и метионин) всех таких белков содержали радиоактивную метку. Очевидно, что индуктор не вызывает превращения в фермент готовых предшественников, а вместо этого заставляет клетку начинать сборку полипептидных цепей Р-галактозидазы непосредственно из аминокислот. Эти опыты показали, что выяснение механизмов влияния индуктора на клетку поможет понять, как контролируется синтез белков. [c.479]

Однако при более тщательном подходе оказывается, что вопрос о топологической разобщенности процессов транскрипции и трансляции у эукариотов не так уж ясен. Во-первых, имеются данные о том, что некоторый синтез белка в ядре все же происходит. Примером таких данных могут псслужить наблюдения, показавшие, что изолированные ядра способны включать меченые аминокислоты в белок. Кроме того, радиоавто-графические исследования клеток, которые короткое время инкубировали с Н-аминсккслотами, свидетельствуют о том, что в ядрах таких клеток обнаруживаются меченые белки, причем они появляются там слишком рано, чтобы это можно было объяснить за счет синтеза их в цитоплазме и последующего перемещения в ядро в готовом виде. Во-вторых, опыты, в которых в РНК различных животных клеток вводили радиоактивную метку, показали, что значительная фракция вновь синтезированных молекул РНК вообще не попадает в цитоплазму, а разрушается в ядре вскоре после своего синтеза. Смысл этих наблюдений неясен, однако не исключено, что они отражают существование молекул мРНК, участвующих в синтезе (гипотетических) ядерных белков на (гипотетических) ядерных рибосомах. [c.507]

В организмах человека и животных происходят процессы синтеза различных органических веществ. Следует, однако, отметить, что процессы синтеза в этих организмах не столь разнообразны, как в зеленых растениях, и известным образом ограничены. Следует подчеркнуть, что животные организмы неспособны использовать энергию солнечных лучей для синтеза органических соединений. Из этого отнюдь не вытекает, что в организме животных не используется для синтеза углекислый газ, вода и аммиак. Уже с давних пор известно, что выделяющаяся нз организмов человека, млекопитающих животных, амфибий и рыб мочевина синтезируется из углекислого газа, воды и аммиака применение метода меченых молекул позволило выявить участие воды, углекислого газа и аммиака в процессах синтеза сложных органических веществ — составных частей организма. После введения в организм животных тяжелой воды можно обнаружить тяжелый водород (дейтерий) в составе жиров, углеводов, белков и других веществ организма. Введение в организм животных карбонатов, меченных i позволяет проследить, как различные органические вещества приобретают радиоактивную метку, благодаря включению в их состав углерода углекислого газа. После введения в организм животных аммонийных солей, меченных стабильным изотопом азота (N ), появляется в составе белков и других азотистых веществ. Все эти данные с несомненностью показывают, что в организме животных для синтеза органических веществ используются минеральные вещества — аммиак, вода и углекислый газ. Было бы, однако, ошибочным считать, что в организмах животных и в зеленых растениях отсутствуют различия в использовании минеральных веществ для синтетических целей. Различия эти прежде всего количественного характера. Объем использования углекислого газа, воды и аммиака для синтеза органических веществ в организмах животных, но сравнению с организмами зеленых растений, незначителен. Далее обращают на себя внимание и различия качественного характера-, ряд веществ, синтезирующихся в растениях, вовсе не синтезируются в организмах человека и животных, и эти вещества должны доставляться человеку и животным в готовом виде с продуктами питания. Так, оргагшзмы человека и животных не способны к синтезу ряда аминокислот, входящих в состав белков, не могут синтезировать различные витамины и т. д. Отсутствие этих веществ в пище приводит к их гибели. [c.235]

На следующем этапе работы эту пленку помещают в раствор, содержащий так называемый зонд, т.е. одноцепочечные молекулы нуклеиновой кислоты, комплементарные отыскиваемым в библиотеке и содержащие радиоактивную метку. Таким радиоактивным зондом может служить информационная РНК, выделенная из ткани, в которой наиболее активно функционирует интересующий нас ген это может быть также искусственный дезоксиолигонуклеотид, синтезированный так, чтобы отвечать известной последовательности аминокислот в том белке, который кодируется разыскиваемым нами геном наконец, это может быть рестрикт из другого участка клонируемой ДНК. Радиоактивный зонд гибридизирует с комплементарной ДНК на поверхности пленки. Затем с пленки смывают не вступившие в гибридизацию остатки зонда и производят радиавтографию, позволяющую установить, где именно на поверхности пленки, а значит и на поверхности чашки Петри, располагаются негативные колонии, содержащие ДНК, способную гибридизировать с зондом (рис. 9.15). Затем из соответствующих негативных колоний можно выделить фаг, содержащий интересующий нас фрагмент чужеродной ДНК. [c.282]

Ступенчатая деградация выделенной радиоактивной ФГК дает возможность показать, что радиоактивную метку (ее обозначают символом С или С) несет карбоксильная (СООН) группа ФГК и что, следовательно, именно она представляет собой видоизмененную форму исходной СОг. Можно было бы-предположить, что поглощаемая СОг соединяется с каким-то двууглеродным фрагментом, в результате чего и образуется ФГК, но это не подтвердилось. Кальвин и Бенсон занялись поисками соединения, которое накапливалось бы после H 4epnaHHH> запаса СОг в процессе фотосинтеза. Они исходили из предположения, что накапливаться в этих условиях должен был как раз неиспользованный акцептор СОг . Такое соединение действительно было найдено (рис. 4.15 и 4.16) и было идентифицировано как рибулозобисфосфат (RuBP) — пятиуглеродное фосфорилированное соединение, распадающееся после присоединения СОг на две молекулы ФГК. Фермент, катализирующий эту реакцию, рибулозобисфосфат-карбоксилаза, занимает в количественном отношении первое место среди белков, содержащихся в зеленой ткани. [c.125]

Разработана методика, где метод изотошюго разбавления используется в сочетании с деградацией по Эдману [15], Со-1 ласно одному из вариантов этого метода, проводят одну сталию деградации но Эдману, в ходе которой блокируются е-аминогруппы остатков лизина, а затем конденсируют второй Ы-кои-невой остаток с реагентом, содержащим радиоактивную метку [94]. В этом случае нет необходимости экстрагировать производное Ы-концевой аминокислоты. Для количественного определения белка в образце используют аминокислотный анализ, а в аликвотных пробах гидролизата определяют радиоактивность. Для определения удельной радиоактивности [ С]ФИТЦ образец очищенного пептида модифицируют аналогичным образом. [c.35]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология