Индикаторный гель

В другой модификации метода. вместо азота применялся гелий. Окись углерода определяли при помоши специального индикаторного геля, предложенного Национальным бюро стандартов США для колориметрического определения окиси углерода. [c.158]

Метод индикаторного геля. Этот метод часто применяют при электрофорезе на полосках ацетата целлюлозы, а также в тех случаях, когда для локализации ферментов приходится использовать высокомолекулярный субстрат. [c.281]

Электрофорез проводят обычным способом, а затем на электрофореграмму осторожно, следя за тем, чтобы обе поверхности полностью соприкасались, накладывают индикаторный гель, содержащий субстрат, соответствующий буфер и кофакторы. Этот сэндвич инкубируют во влажной камере. После инкубации индикаторный гель (а в некоторых случаях исходную электрофореграмму) окрашивают для обнаружения продукта ферментативной реакции. Таким образом, этот метод дает контактный отпечаток зон, содержащих ферменты. Иногда индикаторный гель заменяют полоской фильтровальной бумаги. Обычно индикаторные гели готовят из агара или крахмала и значительно реже — из акриламида. Следует отметить, что данный метод позволяет также обнаруживать ферменты, имеющие низкомолекулярные субстраты. [c.281]

На том же принципе основано обнаружение СО при помощи индикаторного геля N65. На силикагеле, пропитанном сульфатом палладия и молибдатом аммония, образуется желтый кремние-молибдат, который под воздействием окиси углерода восстанавливается в зеленовато-синее гетерополисоединение Чувствительность реакции 0,001% окиси углерода. Восстановление фосфорномолибденовой кислоты может быть также использовано для фотометрического определения окиси углерода. [c.127]

Чувствительность и надежность этого метода сильно возрастают при использовании вместо раствора хлористого палладия колориметрического индикаторного геля, описанного Шефердом [131]. [c.59]

Уолтон, Маккаллох и Смит [159] определяют относительное содержание окиси углерода в собранном газе с помощью колориметрического индикаторного геля [131]. Этим методом можно определить содержание кислорода вплоть до 0,01%. [c.63]

Во многих методиках вспомогательные ферменты просто добавляют к инкубационной среде. Можно также использовать индикаторный гель , содержащий вспомогательный фермент (или ферменты). Еще один способ применения вспомогательного фермента описал Харрисон [518]. Для обнаружения после электрофореза в полиакриламидном геле гексокиназы, глюкозо- фосфатизомеразы и фосфоглюкомутазы к гелеобразующему раствору перед полимеризацией акриламида добавляют глюкозо-б-фосфат— дегидрогеназу. В результате вспомогательный фермент оказывается равномерно распределенным в геле и иммобилизованным благодаря возникновению ковалентных связей с матриксом. При этом он сохраняет способность катализировать превращение глюкозо-6-фосфата, образующегося под действием указанных выше ферментов. Таким образом, при инкубации геля в среде, содержащей NADP, ФМС и соль тетразолия, в местах локализации разделенных ферментов появляется формазан. [c.286]

Обнаружение и количественное определение фосфатазной активности проводят также с другим флуорогенным субстратом—нафтол-А5-МХ-фосфатом (2-окси-3-амидо-М- (2 , 4 диметил-фенил)-нафталинфосфатом), который под действием фосфатаз превращается в сильно флуоресцирующее соединение. Инглис и др. [611] применили для этой цели метод индикаторного геля. Для его приготовления 2 /о-ный агар смешивают с равным объемом раствора 4 мМ нафтол-АЗ-МХ-фосфата в 0,4 М 2-ами-нО 2-метил-1-пропаноловои буфере (pH 11,2). После электрофореза пленки из ацетата целлюлозы кладут на пластину этого геля, тщательно разглаживая их, и инкубируют при 37 °С. При освещении пленок УФ-светом в тех местах, где произошла реакция, появляется флуоресценция. С помощью сканирующего устройства в УФ-свете можно проводить количественное определение фермента. Аналогичный метод был описан для выявления щелочных фосфатаз после электрофореза на ацетате целлюлозы [110]. [c.300]

Протеолитическую активность можно обнаружить различными методическими приемами. Уриель [1322, 1323] погружал агаровые пластины в забуференный раствор белкового субстрата. Меркель [861] использовал хромопротеиды, выделенные из морских красных водорослей. Полоски ацетата целлюлозы после электрофореза помещали на пластины агара, содержащего субстрат. Эти ферменты после электрофореза на ацетате целлюлозы можно определять также с помощью индикаторного геля, включая в агаровый гель неокрашенные белки (например, казеин) [872]. [c.303]

Можно заполимеризовать субстрат и кофакторы в другом ( индикаторном ) геле на основе агарозы или импрегнировать ими фильтровальную бумагу. После окончания электрофореза белков в пластине рабочего ПААГ на его поверхность накладывают индикаторный гель или бумагу. Ферменты диффундируют в них из рабочего геля и обнаруживают себя соответствующей цветной реакцией. Габриель привел длинный список индикаторных цветных реакций для ферментов [Gabriel, 1971]. Во многих случаях в этих реакциях фигурирует восстановление НАД с дальнейшей передачей электрона на краситель. Удобно в качестве заключительного этапа реакции воспользоваться неферментативным восстановлением тетразолиевой соли до ее формазана, что дает сильно окрашенные и зачастую нерастворимые продукты (схема реакции приведена ниже), [c.102]