Ферменты определение количественное

Определение количественного содержания ферментов в биологических объектах представляет известные трудности, поскольку, за редким исключением, ферменты в тканях присутствуют в ничтожно малых концентрациях. Поэтому о количестве ферментов судят по скорости катализируемой реакции в определенных, согласованных условиях измерения. При оптимальных условиях температуры, pH среды и полном насыщении фермента субстратом скорость катализируемой реакции пропорциональна концентрации фермента. О скорости ферментативной реакции судят или по скорости убыли субстрата, или по скорости образования продукта реакции. Для выражения концентрации фермента и количественной оценки его активности в условных единицах Комиссией по ферментам Международного биохимического союза была рекомендована стандартная международная единица (Е или Ц) за единицу активности любого фермента принимается то количество его, которое в оптимальных условиях катализирует превращение 1 микромоля субстрата или образование 1 микромоля продукта в минуту (мкмоль/мин) . [c.157]

Преимуществом колоночной хроматографии является возможность количественного фракционирования больших количеств веществ без превращения их в какие-либо производные. Однако хорошее разделение часто возможно лишь при малых скоростях элюирования, поэтому были разработаны новые виды колоночной хроматографии. Методы аффинной и адсорбционной хроматографии основаны на избирательной адсорбции молекул на нерастворимом адсорбенте, который содержит группы (молекулы), специфически взаимодействующие с молекулами подлежащих очистке соединений, например ингибиторы (для очистки ферментов) или антитела (для очистки антигенов) в настоящее время эти методы нашли широкое применение и для разделения углеводов. Невзаимодействующие с адсорбентом примеси удаляются, а связанный с адсорбентом сахар затем десорбируют способом, не приводящим к его разрушению. Десорбцию можно осуществить, изменяя pH, ионную силу среды или применяя соответствующий ингибитор взаимодействия, удерживающего вещество на адсорбенте. Для разделения ряда полисахаридов были использованы иммобилизованные формы (см. разд. 26.3.7.6) конканавалина А [40], являющегося фитогемагглютинином (лектином), который специфически взаимодействует с разветвленными полисахаридами определенного строения в настоящее время применяют и другие иммобилизованные фитогемагглютинины. Колоночная хроматография на носителях, покрытых полиароматическими соединениями [41], также находит применение для разделения полисахаридов. Благодаря достижениям в производстве носителей для жидкостной хроматографии под высоким давлением можно осуществить хроматографическое разделение быстро и избирательно описаны методы фракционирования небольших олигосахаридов, продолжающегося менее 1 ч [42]. [c.224]

В последние годы благодаря использованию ферментов функции ионселективных электродов удалось существенно расширить и сделать их применимыми для быстрого клинического анализа на глюкозу, мочевину, аминокислоты и другие метаболиты. Такие электроды называются ферментными электродами или электрохимическими сенсорами. Создание электродов с указанными свойствами оказывается возможным благодаря тому, что ряд ферментов обладает высокой специфичностью, т. е. способностью катализировать превращения одного единственного вещества из многих сотен и даже тысяч веществ близкой химической природы. Если, например, фермент катализирует реакцию, в ходе которой изменяется pH среды, то рН-чувствительный электрод, покрытый пленкой геля или полимера, содержащей этот фермент, позволит провести количественное определение только того вещества, которое превращается под действием данного фермента. Из мочевины в присутствии фермента уреазы образуются ионы МН+. Если ионселективный электрод, чувствительный к ионам ЫН , покрыть пленкой, содержащей уреазу, то при помощи его можно количественно определять мочевину. Ферментные электроды — один из примеров возрастающего практического использования ферментов в науке и технике. [c.138]

Перед тем как приступить к выделению и очистке того или иного фермента, необходимо выбрать удовлетворительный тест для его идентификации и количественного определения. Прямые методы существуют лишь для очень ограниченного круга ферментов, поэтому используют способность ферментов катализировать специфическую реакцию. Чтобы иметь возможность контролировать степень очистки фермента, его активность относят на 1 мг общего белка (так называемая удельная активность ). [c.198]

Определение протеолитической активности ферментов муки в болтушке. Навеску муки (Юг) растирают в ступке с битым стеклом, добавляя такое же количество воды, чтобы получилась кашица. Растертую навеску количественно переносят в мерную колбу емкостью 200 мл и смешивают со 150 мл воды. [c.69]

По своей сущности к экспозиционным тестам близок метод, по которому в организме определяют не само вещество или продукты его метаболизма, а специфическую реакцию, вызванную ими (чаще — угнетение ферментов). Примером такой реакции может служить угнетение активности холинэстеразы крови при воздействии большинства ФОС. Хотя было доказано, что между степенью токсичности ФОС, их физиологической активностью и антихолинэстеразными свойствами не всегда существует прямая количественная зависимость, для практических целей оказалось оправданным принять в качестве критерия опасности определенный уровень угнетения активности фермента. [c.170]

Основу руководства составили работы, которые на протяжении ряда лет используются в учебном процессе на кафедре биохимии 1 ММИ им. И. М. Сеченова. В практикум включены работы, знакомящие студентов с современными методами исследования и проблемами биохимии, такими, как электрофорез белков в полиакриламидном геле, ионообменная хроматография белков, гель-фильтрация, изучение четвертичной структуры белков и др. Подобраны и приспособлены к условиям работы в студенческой лаборатории современные методы выделения и изучения ферментов, их количественного определения в биологических жидкостях и тканях. Авторы стремились по возможности использовать в качестве объектов изучения биологические материалы, с которыми обычно имеет дело клиническая биохимия. [c.3]

Для некоторых биологических молекул разработаны энзиматические методы количественного определения. Они основаны на том, что под влиянием специфического действия фермента на определяемое ве щество образуется эквимолекулярное количество продукта реакции,. обладающего характерным спектром поглощения. Так, пировиноград-ную или молочную кислоту можно количественно определить с использованием лактатдегидрогеназы (с. 31). [c.7]

Изменение характера роста бактерий под действием цианида калия, обусловленное снижением активности ферментов, можно использовать в качестве аналитического сигнала при его определении количественным или полуколичественным апособом. [c.33]

Активность ферментов зависит от реакции среды, температуры, физико-химического состояния субстрата, некоторых специфически действующих на ферменты веществ (активаторов и парализаторов) и от. других факторов. Каждый фермент имеет свой температурный и рН-оптимум, при котором он проявляет максимальную активность. Химический состав ферментов, так же как и белков, еще не изучен полностью, а поэтому определить их количественно очень трудно. Об активности ферментов судят по силе их действия на определенные вещества — субстраты. Количество продуктов распада или синтеза, образующихся при действии фермента на субстрат, служит критерием для определения степени его активности. [c.62]

Возможно, трисомия по 16-й хромосоме у мышей хотя бы в некоторых аспектах может служить экспериментальной моделью трисомии-21 у человека, поскольку эти хромосомы частично гомологичны. Фенотипические аномалии, обусловленные хромосомными аберрациями, и регуляция активности генов. Регуляция активности генов в эмбриональном развитии предполагает определенное количественное равновесие продуктов генов, находящихся в разных хромосомах. Эти продукты могут быть ферментами или структурными белками или иметь регуляторную функцию, например могут репрессировать другие гены. Логично предположить, что дисбаланс в количестве генетического материала приведет к нарушениям во взаимодействии генов и, кроме того, повлияет на механизм регуляции эмбрионального развития. В связи с этим отметим, что триплоидия практически не приводит к крупным дефектам на уровне клеток. Нарушение развития при триплоидии является специфической аномалией плаценты (пузырный занос), которая приводит к подавлению газообмена и вызывает неспецифическое голодание плода. При триплоидии относительное количество материала хромосом не изменяется. С другой стороны, при трисомии часть генетического материала присутствует в большем количестве. Если для нормальной регуляции требуется взаимодействие продуктов генов разных хромосом (именно так предполагается, например, в модели Дэвидсона и Бриттена [1019]), то нарушений развития на уровне клеток следует ожидать как раз при трисомии и моносомии, но не при триплоидии. [c.136]

Для количественного анализа взаимодействия проводят другой эксперимент, в котором определяют максимальный прирост интенсивности флуоресценции зонда при его полном связывании с белком. При этом постоянную низкую концентрацию аурамина О (которую выбирают таким образом, чтобы можно было зарегистрировать флуоресценцию зонда в буфере) титруют нарастающими количествами фермента. Строят график двойных обратных величин и проводят экстраполяцию к бесконечной концентрации белка. Таким образом устанавливают значение интенсивности флуоресценции данной концентрации зонда при его полном связывании с ЛДГ. Соотношение полученной величины с флуоресценцией данной концентрации зонда в буфере показывает, во сколько раз увеличивается флуоресценция аурамина О при связывании. Используют несколько концентраций аурамина О для титрования белком, что повышает точность определения величины прироста флуоресценции (Фтах). В этих экспериментах [c.342]

К началу 70-.х годов стала очевидной необходимость создания определенного количественного подхода к изучению деполимераз, который позволил бы а) проводить сравнительное изучение ферментов пз различных источников (или множественных форм ферментов), имеющих один и тог же классификационный номер, но определенно отличающихся специфичностью действия б) достаточно однозначно характеризовать активный центр фермента [c.38]

Поскольку Ыа+К -АТФаза локализована на поверхностях мембран и даже, возможно, является их структурным компонентом, не удивительно, что активность этого фермента зависит от наличия фосфолипида. Присоединение фосфолипида в определенном количественном соотношении к белку ведет к переходу фермента из неактивной формы в полностью активную форму. У разных организмов и в разных тканях активаторами, вероятно, могут служить различные фосфолипиды в солевой железе морских птиц это, по-видимому, не фосфолипид, а сульфатид (рис. 47). [c.145]

Динатриевую СОЛЬ 1-нафтилфосфата применяют в гистохимии для количественного и качественного определения гидролитических ферментов. В иностранных каталогах указана цен препарата методики получения этой соли в литературе не найдено. Мы получили динатриевую соль 1-нафтилфосфата действием метилата натрия на 1-наф-тилфосфат. [c.134]

Приготовление вытяжки пероксидазы. 2—4 г растительного материала (в зависимости от ожидаемой активности фермента) тщательно растирают с чистым песком, не содержащим соединений железа, или битым стеклом. Растертую массу количественно переносят в мерную колбу емкостью 200 мл, доводят водой до метки, взбалтывают и настаивают 2 ч, а затем фильтруют. Фильтрат служит для определения активности. Активность пероксидазы можно также определять непосредственно в болтушке, не фильтруя ее. [c.108]

Для ферментов эндоденствия расчет сродства сайтов с помощью упрощенного уравнения (20) непригоден, так как субстраты здесь могут связываться в нескольких продуктивных позициях, что опять приводит к необходимости суммирования но нескольким позиционным изомерам. В связи с этим экспериментальное определение только константы скорости второго порядка кцат/Кт недостаточно для выявления сродства сразу нескольких сайтов и еще необходимы независимые экспериментальные данные. Так, Хироми и сотр. дополнительно использовали количественное определение продуктов ферментативного превращения во времени [9]. Это, в свою очередь, позволяет установить константы скоростей реакций образования меченых -меров Р , отщеп- [c.43]

Эти данные, помимо их значимости для характеристики активных центров ферментов (в каждом отдельном случае карта активного центра должна иметь строго определенный, индивидуальный характер), должны давать возможность однозначно (и количественно) предсказывать кинетику действия деполимераз, т. е. вид кинетических кривых, характер распределения продуктов гидролиза по моно- и олигомерам и концентрацию каждого продукта в любой момент времени реакции. В настоящей главе рассмотрим термодинамические особенности связывания деполимеразами субстратов, кинетические же аспекты катализа деполимеразами будут рассматриваться в последующих главах. [c.62]

В-четвертых, присутствие в среде инкубации соединений, необходимых для полноценной работы сопрягающей системы (субстрат, кофакторы, активаторы), может существенно сказаться на скорости изучаемой реакции. Чтобы исключить такую возможность, проводят предварительные эксперименты, где процессы образования продукта реакции и его определения разобщены. С этой целью применяют метод отбора проб проводят изучаемую реакцию в отсутствие компонентов сопрягающей системы, останавливают реакцию, и накопившийся продукт реакции определяют количественно уже с помощью сопрягающей системы. В пробу, содержащую все компоненты сопрягающей системы, вносят порцию определяемого продукта, и реакцию, катализируемуку сопрягающим ферментом, доводят до конца, т. е. до прекращения регистрируемых изменений оптической плотности. [c.209]

Благодаря чувствительности, воспроизводимости и простоте, спектроскопия в УФ/вид.-области применяется для количественного определения микроколичеств металлов, в анализе лекарственных препаратов, биологических жидкостей и пищевых продуктов. Пределы обнаружения обычно лежат в диапазоне 10 -10 моль/л (при использовании экстракщгонного концентрирования), погрешность воспроизводимости метода в обычных случаях не превышает несколько десятых процента. Подробнее см. разд. 9.1.6 (определение микроколичеств металлов, холестерина, ферментов, ВИЧ и др.). [c.156]

Протекающие в митохондриях метаболические процессы сопровождаются непрерывным обменом интермедиатов между матриксом и окружающей средой с помощью ферментов-переносчиков, локализованных во внутренней мембране митохондрий. Вклад транслоказных реакций в регуляцию путей метаболических превращений можно оценить по количественному определению промежуточных продуктов обмена. [c.460]

Движение к активному центру есть движение конформона. Оно происходит путем конформационного раскрытия некоторой щели в глобуле, характеризуемой определенной микровязкостью. Структурное соответствие фермент — субстрат имеет динамический характер количественной мерой соответствия может служить критическая энергия деформации щели, соответствующей размеру и форме молекулы субстрата. При значении модуля Юнга е Ю эрг/см и длине краев щели 1 нм средняя амплитуда тепловых флуктуаций ширины щели составит 0,07 нм. Согласно этим оценкам скорость проникновения субстрата и образование ФСК составит 10 —10 с . Это не обязательно лимитирующая стадия ферментативного катализа. [c.198]

Количественно Г. определяют спектрофотометрич., поля-риметрич. и хроматографич. методами. При газохроматографич. определении Г. предварительно переводят в более летучие соед., напр, в ацетаты сорбита илм нитрил глюконовой К-1Ы. Наиб, специфич. метод определения D-Г.-ферментативный, для проведения к-рого используют фермент глюкозооксидазу, катализирующую в аэробных условиях окисление p-D-Г. с образованием б-г люк оно лактона и HjOj. Выделившиеся продукты количественно определяют разл. методами. [c.590]

Динатриевая соль 2-нафтилфосфата применяется в гистохимии для качественного и количественного определения гидролитических ферментов в тканях. В иностранных каталогах указана цена препарата методики получения этой соли в литературе не найдено. Мы получали динатриевую соль 2-нафтилфосфата действием метилата натрия на 2-нэфтилфосфат. [c.135]

Рассмотрим явление синергизма на примере ферментов целлюлазного комплекса T.vinde [115] Для количественного выражения синергизма целесообразно ввести понятие коэффициента синергизма (А син), за который можно, принять отношение скорости образования продуктов гидролиза при одновременном действии ферментов к сумме скоростей их индивидуального действия [116]. Изучение зависимости коэффициента синергизма от относительной концентрации эндоглюканазы и целлобиогидролазы показало [115, 116], что явление синергизма наблюдается лишь при определенном соотношении этих ферментов (рис. 3.3). Ка,н уменьшается с увеличением относительной концентрации целлобиогидролазы и при каком-то ее значении становится равным единице (это означает, что синергизм отсутствует). Кроме того. Кет зависит от начальной концентрации нерастворимого субстрата. С увеличением концентрации субстрата коэффициент синергизма уменьшается и при соответствующей концентрации становится почти равным единице (рис. 3.4). [c.73]

Приготовление вытяжки фермента из растительного материала. Н аналитических весах взвешивают около 1 г ржаной муки свежего помола. Навеск переносят в фарфоровую ступку, добавляют немного битого стекла, 5 мл дистилл рованной воды и тщательно растирают. Растертую массу количественно перенос в мерную колбу емкостью 100 мл при помощи широкой воронки. Ступку, пестик воронку несколько раз споласкивают дистиллированной водой. Содержимое колб доводят водой до метки, тщательно встряхивают и оставляют на 3—4 ч настаиватьс при комнатной температуре. По истечении срока настаивания содержимое колб хорошо встряхивают и болтушку фильтруют через складчатый фильтр. Фильтрг используют для определения тирозиназы. [c.112]

Через 10 мин после добавления ферментного раствора действие фермента приостанавливают добазлением 2 мл 1 н. раствора соляной кислоты. Для определения количества образовавшихся редуцирующих углеводов содержимое колб после осахаривания количественно переносят в коническую колбу вместимостью 300—400 мл, туда же добавляют пипеткой 20 мл 0,1 н. раствора йода и 60 мл 0,1 и. раствора гидроксида натрия или калия (гидроксид прнлнваюг по каплям при перемешивании). [c.291]

Смотреть страницы где упоминается термин Ферменты определение количественное: [c.110] [c.191] [c.86] [c.158] [c.5] [c.130] [c.78] [c.250] [c.109] [c.110] [c.113] [c.163] [c.166] [c.382] [c.563] [c.279] [c.415] [c.73] [c.117] [c.138] [c.8]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология