Сефароза алкиламино

Алкиламины с различной длиной Сефароза 4В 520, 521 [c.319]

Ряд алкилагароз со структурой СНз(СН2)пМН—сефароза (где п принимает значения от О до 7), и-аминоалкилагароз со структурой ЫН2(СН2)п ЫН—сефароза (где п — от 2 до 8) характеризуется близким содержанием алкильных боковых цепей на гранулу геля [15, 49]. В одинаковых условиях (pH, ионная сила, состав буферного раствора и температура) способность СНз(СН2)пЫН—сефарозы удерживать фосфорилазу Ь зависит от длины углеводородных цепей. При хроматографии на производных сефарозы (я = 0 или 1) фосфорилаза Ь выходила из колонки с фронтом растворителя при п = 2 происходила задержка фермента, а при п = 3 фермент адсорбировался. Элюирование фосфорилазы Ь с модифицированной сефарозы (п = 3) возможно с помощью деформирующих буферных растворов, которые, как было показано, приводят к обратимым структурным изменениям фермента. На производном сефарозы с л = 5 связывание фосфорилазы было настолько сильным, что фермент не элюировался с колонки, даже когда pH деформирующего буферного раствора понижался до 5,8, хотя деформирующая способность такого буфера намного выше. Освободить фосфорилазу Ь из комплекса с этим производным можно только в неактивной форме после промывки колонки 0,2 М уксусной кислотой. Сама агароза содержит отрицательные заряды, а связывание алкил- или ариламинов на активированной бромцианом агарозе вводит в гель положительные заряды (разд. 8.2.4). В связи с этим йост и др. [28] обращали внимание на то, что на сефарозе с алкиламинами, прикрепленными после предварительной активации носителя бромцианом, связывание белков происходит большей частью при pH выше изоэлектрической точки выделяемых белков. Поэтому допускалось, что в этих случаях электростатические взаимодействия с положительно заряженной Ы-замещенной изомочевиной более существенны для связывания, чем гидрофобные взаимодействия с гидрофобной боковой цепью. Тем не менее гранулы агарозы не связывают фосфорилазу Ь, пока к ним не будут прикреплены алкильные боковые цепи некоторой минимальной длины. Кроме того, отмеченные выше заряды в равной мере присутствуют во всех членах гомологического ряда, и, следовательно, они не могут быть причиной различий в степени [c.152]

Метод пригоден для связывания сахаров, которые образуют эфирные связи по своим гидро ксильнь М группам. Белки и пептиды своими первичными аминогруппами образуют алкиламинные связи. С веществами, которые содержат тиольные группы, образуются тиоэфирные связи. Когда используется 1,4-бис (2,3-эпокси-пропокси) бутан, то между лигандом и цепью агарозы вводится пространственная группа, соответствующая цепи из 12 углеродных атомов. Под действием бисоксирана происходит поперечное сщи-вание углеводных цепей матрицы геля, которое повышает ее устойчивость. Это позволяет применять более жесткие условия для связывания и элюирования. Эти гели поступают в продажу под названием эпоксиактивированной сефарозы. [c.195]

Хофсти [19] провел подобное же исследование, касающееся не-гомогенности и необратимости связывания белков на сорбентах, таких, как сефарозы, замещенные н-алкиламинами или 4-фенил-н-бутиламином. Например, на колонку (2 мл) сефарозы с присоеди- [c.277]

Если лиганды небольших размеров можно присоединять непосредственно к активированной сефарозе 4В, то крупным лигандам, таким, как белки, часто мешают при этом стерические препятствия, поэтому реакция между матрицей и лигандом протекает медленно и не до конца. Когда же белки вступают в реакцию, то вполне вероятно, что они образуют несколько ковалентных связей с матрицей. К сефарозе, активированной бромцианом, можно присоединить удлиняющие мостики , которые могут иметь на концах аминогруппы, карбоксильные, тиоловые и другие функциональные группы. Замещенную агарозную матрицу можно получить в лаборатории [36] или можно купить готовую агарозу с присоединенным к ней в качестве удлиняющего мостика алкиламином, конец которого связан с сукцинил-N- yK-цинимидным эфиром. Эта группа реагирует с алкил- или ариламинами. [c.217]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология