Сефароза производные

Производные сефарозы, готовые для прямого присоединения аффинных лигандов, перечислены в табл. 8.2. Из новых носителей предложена активированная бромцианом сефароза 6МВ (макро-гранулированная сефароза 6В размер частиц 200—300 мкм) она предназначена для аффинной хроматографии клеток. Активированная тиол-сефароза 4В (смешанный дисульфид, образованный [c.185]

Производные с содержанием гидразида 15,25 мкмоль/мл использованы для дальнейших замещений тем же методом, который описан для присоединенных монофункциональных гидразидов. Методы приготовления производных гидразид-сефарозы показаны на рис. 8.5. [c.216]

Рис. 8.5. Методы получения производных гидразид-сефарозы [90],

Производное сефарозы, содержащее карбоксилатные ионы, промывают [c.246]

Агароза с длинноцепочечным гидразидным производным Сефароза 4В [c.287]

Антитела к легкой цепи иого производного Сефароза 4В 389 [c.291]

Сефароза 4В с гексаметилендиамином и диазотированным п-аминобен-зильным производным Се<1)ароза 4В [c.303]

Малатдегидрогеназа NAD + Сефароза 4В с гексаметилендиамином и диазотированное и-аминобен-зильное производное 76 [c.304]

В работе [73, 74] выделены витамин В12-связывающие белки с использованием аффинной хроматографии на витамин В12-сефарозе, Производные витамина В12 можно получить частичным кислотным гидролизом (в 0,4 М H I в течение 64 ч при комнатной температуре) амидных групп незамещенных пропион-амидных боковых цепей корринового кольца витамина Bt2- Полученная смесь MOHO-, ди- и трикарбоксипроизводных витамина Bi2 может быть разделена хроматографией на QAE-сефадексе. [c.189]

Сшитые полисахариды широко применяются в промышленности. Наибольший интерес представляют сшитые целлюлозы, крахмалы, декстраны (сефадекс) и агарозы (сефароза), используемые как хроматографические носители наиболее распространенными сшивающими агентами являются эпихлоргидрин и формальдегид. Сшивкой разных полисахаридов получают водонерастворимые субстраты для очистки и определения ферментов. Так, обработкой гликозаминогликанов циклическими имидокарбонатными производными агарозы [248] получен субстрат для определения гликоз-аминогликаназ. [c.275]

Принцип хроматогра( )ии сродства использован для ввделения тубулина 271,277,288 Смолу сродства готовили, например, исходя из сефарозы, активированной бромцианом, и деацетилколхицина, де-ацетилизоколхицина или их смеси. Другой путь присоединения этих производных колхицина к агарозе - через боковую цепь гексановой кислоты (СН-сефароза). Из готовой смолы сродства облучением получали люми-смолу сродства. Смолы сродства с колхициновыми группами задерживали тубулин. Тубулин, насыщенный колхицином, тоже по- [c.71]

Емкость нерастворимых аффинантов, приготовленных путем присоединения 3 -(4-аминофенилфосфорил)дезокситимидин-5 -фосфата к производным сефарозы 4В и биогеля Р-300, в аффинной хроматографии стафилококковой нуклеазы [c.70]

Для проверки этого предположения Лоу и др. [22] сопоставили кривые титрования 6-аминогексаноил-ЫАО+ — сефарозы, немодифицированной сефарозы и 6-аминогексаноил — сефарозы, а также соответствующих производных целлюлозы они иродемонстриро-вали различное влияние носителя (см. рис. 8.1). [c.90]

Ряд алкилагароз со структурой СНз(СН2)пМН—сефароза (где п принимает значения от О до 7), и-аминоалкилагароз со структурой ЫН2(СН2)п ЫН—сефароза (где п — от 2 до 8) характеризуется близким содержанием алкильных боковых цепей на гранулу геля [15, 49]. В одинаковых условиях (pH, ионная сила, состав буферного раствора и температура) способность СНз(СН2)пЫН—сефарозы удерживать фосфорилазу Ь зависит от длины углеводородных цепей. При хроматографии на производных сефарозы (я = 0 или 1) фосфорилаза Ь выходила из колонки с фронтом растворителя при п = 2 происходила задержка фермента, а при п = 3 фермент адсорбировался. Элюирование фосфорилазы Ь с модифицированной сефарозы (п = 3) возможно с помощью деформирующих буферных растворов, которые, как было показано, приводят к обратимым структурным изменениям фермента. На производном сефарозы с л = 5 связывание фосфорилазы было настолько сильным, что фермент не элюировался с колонки, даже когда pH деформирующего буферного раствора понижался до 5,8, хотя деформирующая способность такого буфера намного выше. Освободить фосфорилазу Ь из комплекса с этим производным можно только в неактивной форме после промывки колонки 0,2 М уксусной кислотой. Сама агароза содержит отрицательные заряды, а связывание алкил- или ариламинов на активированной бромцианом агарозе вводит в гель положительные заряды (разд. 8.2.4). В связи с этим йост и др. [28] обращали внимание на то, что на сефарозе с алкиламинами, прикрепленными после предварительной активации носителя бромцианом, связывание белков происходит большей частью при pH выше изоэлектрической точки выделяемых белков. Поэтому допускалось, что в этих случаях электростатические взаимодействия с положительно заряженной Ы-замещенной изомочевиной более существенны для связывания, чем гидрофобные взаимодействия с гидрофобной боковой цепью. Тем не менее гранулы агарозы не связывают фосфорилазу Ь, пока к ним не будут прикреплены алкильные боковые цепи некоторой минимальной длины. Кроме того, отмеченные выше заряды в равной мере присутствуют во всех членах гомологического ряда, и, следовательно, они не могут быть причиной различий в степени [c.152]

В работе Лоу и др. [42] сопоставлены свойства сорбентов на основе целлюлозы и сефарозы, для чего использовались экспериментальные кривые титрования 6-аминогексил-МАО+—сефарозы, немодифицированной сефарозы, 6-аминогексаноил — сефарозы и соответствующих производных целлюлозы (рис. 8.1). Очевидно образование ионизирующих групп после активации бромцианом это было также показано в случае целлюлозы, когда для реакции присоединения использовали дициклогеисилкарбодиимид [38]. Отклонение, наблюдаемое для сефарозы, существенно меньше, [c.180]

Рис. 0.1. кривые титрования 6-амино-капронил- АВ+-полимеров [421 Сплошные линнн относятся к сефарозе х 4В и ее производным, пунктирные — к О-целлюлозе и ее производным I — носитель с присоединенной б-аминогексановой кислотой 2 — носитель с присоединенной 6-ами-нoкaпpoнил-NAD+. [c.181]

Производные полиакрилгидразид-сефарозы ведут себя как идеальные нерастворимые носители для аффинной хроматографии. Они сохраняют свойства сефарозы, в особенности минимальное неспецифическое взаимодействие с белками, хорошие фильтрующие свойства и высокую пористость. Кроме того, они механически и химически устойчивы. Эти производные обладают также преимуществами акриламидных гелей. При нейтральных pH они не несут заряда и содержат большое число групп, способных модифицироваться. [c.216]

Содержание последнего определяют, измеряя оптическую плотность при 412 нм (е= 1,36-10 л моль см , pH 8). Метод использован для определения 5Н-групп в производных сефарозы [14] и дигпдролипоевой кислоты, ковалентно связанной с сефарозой [47]. [c.243]

Взаимодействие между миозином и актином, на котором основано превращение химической энергии в механическую энергию в мышце, изучено Боттомлн и Трейером [138]. Исследовалось влияние ионной силы на специфическое и обратимое связывание тяжелого меромиозина и миозинового субфрагмента 1 на сефарозе с иммобилизованным G-актином. Комплексы, образуемые между производными миозина и иммобилизованным G-актином, могут диссоциировать при низких концентрациях АТР и ADP и пирофосфатов как в ирисутствии, так и в отсутствие Mg +. Кроме того, и связанный с сефарозой, и свободный G-актин лишь немного увеличивают Мд-+-стимулируемую АТРазную активность миозина. Такой подход позволяет решить вопрос, обязательно ли комилек-сообразование между миозином и актином приводит к активации АТРазы. [c.376]

Рис. 1. Хроматография L-лактат- и L-аланиндегидрогеназ на сефарозе с привязанными производными АМР.

Если в качестве аффинного лиганда используется кофактор, согласно данным Лоу и Дина [57], очень важно, чтобы нативная конформация, кофактора сохранялась даже после его связывания. Это справедливо также в том случае, если аффинным лигандом является биологически активный белок. Он должен быть присоединен к носителю минимально возможным числом связей, так как при этом увеличивается вероятность сохранения нативной третичной структуры белка. В качестве примера приведем работу Куатреказаса по выделению инсулина [14] на колонке с сефарозой с присоединенными при pH 6,5 или 9,5 антителами к свиному инсулину. Как будет показано ниже, белок связывается с активированной бромцианом сефарозой посредством непротонированных аминогрупп. Снижение pH уменьшает число связавшихся групп. Различия в величинах pH в процессе присоединения приводят к тому, что первое производное (pH 6,5) характеризуется почти 80%-ной теоретически возможной емкостью по инсулину, в то время как у второго производного (pH 9,5) эта емкость равна только 7%. Поскольку общее содержание белка одинаково в обоих случаях, второе производное должно содержать иммуноглобулин, который не способен [c.11]

Из перечня носителей, приведенного в разд. 7.3, следует, что наиболее часто используются для аффинной хроматографии агароза и ее производные. Хорошо известны промышленные препараты сефароза и биогель А. Сефароза — прО(Мышленное название сферического геля агарозы, выпускаемого фирмой Pharma ia Fine hemi als АВ (Швеция). Сефароза продается в набухшем состоянии, суспендированная в дистиллированной воде, содержащей 0,02% азида натрия в качестве бактериостатического агента. [c.13]

Авторы постулируют двухстадийную реакцию. На первой стадии в качестве лабильного промежуточного соединения образуется цианат. Он дает сначала инертный карбамат, а затем активный имидокарбонат, к которому в слабощелочной среде и присоединяется аминогруппа с образованием ковалентной связи между белком и носителем. Однако, согласно литературным данным, этот механизм является спорным, так как вици-нальные гидроксильные группы сефарозы не способны к образованию пятичленного имидокарбонатного цикла. Тем не менее возможно, что изменения могут происходить во время процесса стабилизации. Если исходить из результатов изучения модельных реакций с метил-4,6-0-бензилиден-а-о -глюкопиранозидом [1], то наиболее вероятно, что связывание аффинного лиганда с носителем осуществляется главным образом через производные изомочевины. [c.14]

В качестве примера связывания аффинного лиганда рассмотрим получение нерастворимого производного химотрипсина [50]. Раствор (140 мл) химотрипсина (20 мг/мл) и 60 мл 0,5М боратного буфера (pH 8,7) прибавляют к 100 мл аминохлор-сылш-триазинового производного сефарозы и выдерживают смесь 18 ч при постоянном перемешивании при 23 °С. Продукт промывают смесью 5М хлорида натрия и 8М мочевины (1 1 по объему). Изучение зависимости количества связанного химотрипсина от концентрации фермента показало, что при концентрации химотрипсина 4 мг на 1 мл реакционной смеси с сефарозой связывается более 60% химотрипсина, а при концентрации 8 мг/мл количество связанного белка превышает 70%. В отдельных экспериментах концентрация боратного буфера в реакционной смеси менялась в пределах 0,07—0,2М. [c.18]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология