Сефароза, активированная бромцианом

Антитела в бикарбонатном буфере можно прямо смешать с сефарозой, активированной бромцианом (10 мл белка в 1 мл геля), или же очищать дальше с помощью гель-фильтрации нлн ионообменной хроматографии. [c.51]

СВЯЗЫВАНИЕ АФФИННОГО ЛИГАНДА С СЕФАРОЗОЙ, АКТИВИРОВАННОЙ БРОМЦИАНОМ [c.16]

Очистка антител. Осуществляется с помощью сефарозы, активированной бромцианом, к которой присоединяются различные антигены, такие, как белки, вирусы или альбумин бычьей сыворотки, связанные с гаптенами метод является наилучшим для получения чистых антител. [c.218]

Присоединение аминов к сефарозе, активированной бромцианом, приводит, таким образом, к замещенным изомочевинам. Так, [c.188]

Использование сефарозы. активированной бромцианом [c.218]

Для синтеза аффинного сорбента, соответствующего специфичности данного фермента, лиганд (субстрат или его аналог) присоединяют к инертной матрице (макропористые гидрофильные гели, синтетические полимеры, неорганические носители). Для уменьшения пространственных трудностей при взаимодействии фермента с матрвдей лиганд присоединяют к носителю через промежуточное звено (вставку, ножку, спейсер). Присоединение лигандов к поперечносшитой агарозе — сефарозе обычно проводят, активируя ее бромцианом (см. с. 91). Связывание с сефарозой, активированной бромцианом, л-амино-бензилянтарной кислотой, используемой в качестве лиганда, обеспечивает взаимодействие сорбента с каталитическим центром только карбоксипептидаз благодаря сходству лиганда с субстратами карбоксипептидазы [c.82]

Принцип хроматогра( )ии сродства использован для ввделения тубулина 271,277,288 Смолу сродства готовили, например, исходя из сефарозы, активированной бромцианом, и деацетилколхицина, де-ацетилизоколхицина или их смеси. Другой путь присоединения этих производных колхицина к агарозе - через боковую цепь гексановой кислоты (СН-сефароза). Из готовой смолы сродства облучением получали люми-смолу сродства. Смолы сродства с колхициновыми группами задерживали тубулин. Тубулин, насыщенный колхицином, тоже по- [c.71]

Изучение реакции Ы-замещенной изомочевины, конъюгированной сефарозой, с аминами и бычьим сывороточным альбумином [93] помогло понять расхождение между опубликованными данными о стабильности конъюгатов. Соединения, содержащие нуклеофилы, например амины или белки, расщепляют связи изомочевины согласно приведенной выше схеме. Если расщепление связей наблюдается в отсутствие таких соединений, то это происходит, вероятнее всего, благодаря освобождению адсорбированных молекул аффинного лиганда, которые были плохо отмыты. Количество освобождающегося лиганда в результате очень медленного гидролиза изомочевины обычно очень мало и не мешает нормальному процессу аффинной хрохматографии. Как показано в разд. 8.5, отщепление аффинного лиганда от специфического сорбента существенно главным образом в системах с высоким сродством или при выделении небольших количеств вещества. Шнапп и Шалитин [65] предотвращали отщепление аффинных лигандов под действием нуклеофилов после присоединения к сефарозе, активированной бромцианом, путем замены связи изомочевины более устойчивой связью гуанидина, для чего бромцианом активировали носитель, содержащий аминогруппы. [c.189]

Когда связывание аффинного лиганда на нерастворимом носителе закончено, рекомендуется удалить остающиеся активные группы, чтобы исключить дальнейшее связывание. Если аффинный лиганд связывается своими аминогруппами, в качестве инактивирующих агентов наиболее часто используются низкомолекулярные первичные амины. Например, согласно рекомендациям фирмы РЬагтас1а, при связывании на сефарозе, активированной бромцианом, инактивация остающихся активных групп может быть достигнута достаточно просто при взаимодействии с 1 М 2-ами-но этанолом при pH 9 и комнатной температуре в течение 2 ч, в то же время после связывания на эпоксиактивированной сефарозе для инактивации в тех же условиях требуется 4 ч. Используется тот же буфер, что и при связывании, например 0,1 М. бикарбонат натрия, содержащий 0,5 моль/л хлорида натрия. Для бло- [c.216]

Если амины связываются с сефарозой, активированной бромцианом, то при этом, как показали Уилчек и сотр. [103а], образуются положительно заряженные группировки N-замещенной изомочевины, которые могут далее реагировать с аминами, об- [c.14]

Метод связывания аффинантного лиганда с сефарозой, активированной бромцианом, разработан Аксеном, Поратом и Эрнбеком [4, 76] Куатреказас дополнил его на основе собственных данных [14]. [c.16]

Если лиганды небольших размеров можно присоединять непосредственно к активированной сефарозе 4В, то крупным лигандам, таким, как белки, часто мешают при этом стерические препятствия, поэтому реакция между матрицей и лигандом протекает медленно и не до конца. Когда же белки вступают в реакцию, то вполне вероятно, что они образуют несколько ковалентных связей с матрицей. К сефарозе, активированной бромцианом, можно присоединить удлиняющие мостики , которые могут иметь на концах аминогруппы, карбоксильные, тиоловые и другие функциональные группы. Замещенную агарозную матрицу можно получить в лаборатории [36] или можно купить готовую агарозу с присоединенным к ней в качестве удлиняющего мостика алкиламином, конец которого связан с сукцинил-N- yK-цинимидным эфиром. Эта группа реагирует с алкил- или ариламинами. [c.217]

В случае сефарозы, активированной бромцианоМ, удлиняющие мостики чаще всего получают с помощью реакции с 1,6-диаминогексаном и 6-аминогексановой кислотой. Для присоединения лиганда используют водорастворимый карбодиимид, в результате чего образуются амидные связи. В этой реакции гидрохлорид 1-этил-3-(З-диметиламинопропил)карбодиимида или 1-цикло-гексил - 3- (2-морфолиноэтил) карбодиимидмето-п-толуол-сульфонат дают хорошие выходы в водных и не водных средах при pH 4,5—6,0. [c.218]

Одним из лучших носителей для колоночных реакторов оказалась сефароза, активированная бромцианом. На ней успешно иммобилизовали и использовали в анализе не только отдельные ферменты, но и полиферментные системы. Один из первых таких датчиков был предложен для определения триптофана. Два фермента триптофаназу и лактатдегидрогеназу — соиммобили-зовали на ВгСЫ-сефарозе, заполнили колонку. Анализируемую смесь с добавкой двух кофакторов пиридоксальфосфата [c.88]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология