Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Лизат ретикулоцитов

Рис. 5-4. Динамика синтеза белка ВТМ в лизате ретикулоцитов кролика (задача 5-7). В первые три минуты радиоактивность не определяли, поскольку короткие пептиды выходили за пределы столбика геля. Рис. 5-4. <a href="/info/515285">Динамика синтеза</a> белка ВТМ в лизате ретикулоцитов кролика (задача 5-7). В первые три минуты радиоактивность не определяли, поскольку <a href="/info/1403689">короткие пептиды</a> выходили за пределы столбика геля.

    Интересно, что двуцепочечная РНК вызывает сильное ингибирование синтеза белка в лизате ретикулоцитов без всякой их предобработки интерфероном, но оказывает сравнительно слабое воздействие на трансляцию в экстрактах таких клеток, как [c.262]

    Реакцию обычно инициируют добавлением лизата ретикулоцитов к остальным компонентам. Ход реакции можно контролировать по включению [ S]-метионина в материал, нерастворимый в горячей кислоте. В оптимальных условиях включение метки должно нарастать линейно в течение 30—60 мин. [c.216]

    Репрессия трансляции под действием двуспиральной РНК. В лизате ретикулоцитов двуцепочечные РНК, включая как двуспиральные фрагменты вирусного происхождения (полиовируса или реовирусов), так и синтетические комплексы поли(А) поли(и) или поли(1) поли(С), вызывают ингибирование синтеза белка в присутствии гемина, похожее по всем признакам на репрессию, вызываемую отсутствием гемина. Двуцепочечная РНК, которая оказывает такое воздействие на трансляцию, должна состоять не менее, чем из 50 пар нуклеотидных остатков. Оказалось, что, так же как и в результате отсутствия гемина, в присутствии такой двуцепочечной РНК происходит активация ингибитора инициации, обозначаемого как dsl, и этот ингибитор тоже является протеинкиназой, фосфорилирующей а-субъединицу eIF-2. В отличие от H I, однако, dsl связан с рибосомными частицами и представляет собой белок с молекулярной массой около 67000 дальтон. Активация ингибитора требует АТФ и происходит как результат автофосфорилирования белка. Именно автофосфорилирование индуцируется взаимодействием белка с двуцепочечной РНК. По-видимому, механизм репрессии инициации под действием активированного dsl во всем аналогичен таковому в случае H I и заключается в изменении взаимодействия eIF-2 в результате его фосфорилирования с дополнительным белком eIF-2B (см. выше). [c.262]

    KF или NaF ингибирует трансляцию в клетках млекопитающих и в бесклеточных системах. При 30 мМ KF ингибирует инициацию синтеза белка в лизатах ретикулоцитов, при этом лишь незначительно влияет иа элонгацию цепи [JB 250, 3443 (1971)]. Предполагается, что фторид препятствует присоединению 608-субъедини-цы к 408-инициаториому комплексу. Нет сведений об аналогичном действии в прокариотах. [c.231]

    Вы выделили из культуры бактерий антибиотик эдеин. Он ингибирует синтез белка, но не затрагивает ни синтеза ДНК, ни синтеза РНК. При добавлении здеипа к лизату ретикулоцитов синтез белка прекращается спустя некоторое время, как показано на рис. 18. [c.44]

    В качестве бесклеточной системы для синтеза белка можно использовать зависимый от мРНК лизат ретикулоцитов кролика, приготовленный, как описано Престоном [30], или коммерческий препарат лизата. Для контроля следует параллельно получить мРНК из незараженных клеток. [c.155]


    Относительная легкость получения большого количества мРНК реовируса привела к тому, что последние широко использовались для изучения функций мРНК вообще и соответственно транслировались в разнообразных бесклеточных системах. В большинстве случаев наиболее удобен лизат ретикулоцитов кролика, обработанный микрококковой нуклеазой для подавления эндогенного синтеза белка. Если планируется небольшая работа по трансляции in vitro, наиболее удобно, по-видимому, купить компоненты бесклеточной системы у поставщика и пользоваться системой в соответствии с его рекомендациями. Исследователи, планирующие работу большего масштаба, найдут краткое описание метода получения лизата ретикулоцитов кролика в приложении к данной главе. [c.215]

    Методом изотопного разбавления можно определять концентрации тех или иных биологических активных молекул в составе сложных смесей и физиологических жидкостей. Например, недавно этим методом определили концентрацию фактора элонгации eIF-2 в лизате ретикулоцитов [Safer et al., 1979]. [c.268]

    Несмотря на то, что разные эукариотические бесклеточные белоксинтезирующие системы активно транслируют гетерологичные мРНК, гомологичные матрицы, как правило, транслируются более эффективно. Например, глобиновые мРНК используются в синтезе белка в семь-восемь раз лучше лизатами ретикулоцитов, чем экстрактами культивируемых клеток яичников китайских хомячков. Кроме того, в клетках разных типов дифференцированных тканей могут присутствовать специфические белковые ингибиторы трансляции определенных мРНК. Факты такого рода необходимо учитывать при выборе бесклеточной системы для решения конкретных экспериментальных задач. [c.190]

    Б. Как, по вашему мнению, образуется минорный продукт с большей мол. массой за счет мРНК ВТМ в лизате ретикулоцитов  [c.11]

    Скорость роста пептидных цепей можно оценить по данным, представленным на рис. 5-4. В этом опыте единственный вид мРНК ВТМ, кодирующей белок массой 116000 Да, транслировался в лизате ретикулоцитов кролика в присутствии 8-метионина. Пробы отбирали с интервалами в одну минуту и анализировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Продукты трансляции определяли с помощью радиоавтографии. Как следует из рисунка, размер наиболее крупных пептидов увеличивается с продлением периода трансляции. [c.13]

Рис. 5-7. Действие ингибиторов эдеина и циклогексимида на синтез белка в лизатах ретикулоцитов (задача 5-10). Рис. 5-7. <a href="/info/361860">Действие ингибиторов</a> <a href="/info/898123">эдеина</a> и циклогексимида на <a href="/info/76658">синтез белка</a> в лизатах ретикулоцитов (задача 5-10).
    Весьма активную белоксинтезирующую бесклеточную систему можно получить из ретикулоцитов, которые представляют собой незрелые эритроциты, уже лишенные ядра, но еше сохранившие рибосомы. Лизат ретикулоцитов при условии добавления гема способен многократно транслировать каждую глобиновум мРНК. Гем несет две функции он необходим для сборки гемоглобина и, как ни странно, для поддержания высокого уровш синтеза белка. Если не добавить гем, синтез белка через непродолжительное время останавливается (рис. 10-15). [c.182]

    А. Рассчитайте отношение числа молекул H R к числу рибосо и молекул глобиновой мРНК при концентрации H R, подавляющей синтез белка. Лизаты ретикулоцитов содержат рибосомы в количестве 1 мг/мл (мол. масса рибосомы около 4 млн. средняя полисома содержит 4 рибосомы на одну молекулу глобиновой мРНК. [c.182]

    Б. Скорость синтеза белка можно определить по углу наклона кривой на рис. 5-47. Соответственно система синтезирует полипептид размером около 52000 Да за 10 мин, или пептид 5200 Да в минуту, что соответствует 47 аминокислотам в минуту (5200/110). Эта скорость в 10 раз ниже, чем скорость синтеза в клетках Е. oli, и втрое ниже, чем скорость синтеза глобина в том же лизате ретикулоцитов. Как будет обсуждаться в следующем пункте (В), причина относительно низкой скорости синтеза может заключаться отчасти в том, что смесь молекул тРНК в лизате ретикулоцитов не вполне соответствует белку этого растительного вируса. [c.285]

    A. Концентрация рибосом в лизате ретикулоцитов равна 2,5х10 М, а концентрация H R, которая полностью блокирует синтез белка, составляет 5,6 х 10 М. [c.423]

    Многие мутации прерывают синтез белкового продукта. В этих случаях образуются укороченные полипептидные цепи, функционально незначимые. Для диагностики таких мутаций можно применять метод трансляции белкового продукта . Он проводится в системе in vitro на основе полученной специфической мРНК с добавлением лизата ретикулоцитов (в нём содержатся все необходимые компоненты для синтеза белка). В этой системе синтезируется белковый продукт соответствующего гена. Продукт трансляции анализируют с помошью электрофореза. Изменение электрофоретической подвижности бел- [c.268]


Смотреть страницы где упоминается термин Лизат ретикулоцитов: [c.179]    [c.58]    [c.215]    [c.250]    [c.275]    [c.179]    [c.11]    [c.15]    [c.283]    [c.54]   
Молекулярная биология клетки Сборник задач (1994) -- [ c.11 , c.181 , c.182 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Ретикулоциты



© 2025 chem21.info Реклама на сайте