Химические реактивы для хроматографии

Молекулярная масса и изоэлектрическая точка - характерные параметры белка. Однако в основе точной идентификации белковой молекулы лежит определение аминокислотной последовательности. Уже на первом этапе этого процесса, включающего расщепление белка на мелкие фрагменты, можно получить значительную информацию о данном белке. В настоящее время в продаже имеются протеолитические ферменты и химические реактивы, расщепляющие белки по определенным аминокислотным остаткам (табл. 4-10). Так, фермент трипсин отщепляет остатки лизина и аргинина со стороны карбоксильных групп химический реактив бромистый циан расщепляет пептидные связи, расположенные после остатков метионина. Поскольку такие специфические ферменты и реактивы расщепляют в белковой молекуле ограниченное количество связей, при их воздействии образуется смесь больщих пептидов. Разделив эту смесь методом электрофореза или хроматографии, можно получить пептидную карту, характеризующую исследуемый белок. Такие пептидные карты называют иногда фингерпринтами (отпечатками пальцев) белка (рис. 4-53). [c.219]

Для этой же цели предложено использовать триэтиламин в качестве основания, так как этот реактив доступен, растворим, удобен в работе и обладает малой химической актив-ностью. Предполагается, что сильные основания, так же как четвертичные гидроксиды, разрушают силикагелевую подложку. Подвижную фазу для ион-парной хроматографии желательно фильтровать через фильтр из стекловолокна, а после окончания работы колонку следует промывать пятикратным объемом элюента метанол — вода (50 50). [c.81]

Реактивы и растворы. Ацетонитрил х.ч., перегнанный. Гексан х.ч., перегнанный. Хлороформ X. ч., перегнанный. Кали едкое х, ч. Кальций сернокислый ч. д. а. Реактив высушивают в сушильном шкафу при температуре 150°С в течение 24 ч. Хранят в банке с притертой пробкой. Кислота серная концентрированная. Кислота соляная концентрированная. Натрий азотистокислый ч. д. а. Натр едкий, 50%-ный раствор. 1-нафтол ч.д.а. Силикагель КСК. Окись алюминия для хроматографии II степени активности. Стандартный раствор дикурана с содержанием 200 мкг/мл готовят из химически чистого препарата, растворяя его в спирте. Проявляющий реагент № 1 к смеси, состоящей из 46 мл воды и 4 мл соляной кислоты (удельная масса 1,19), прибавляют 1 г нитрита натрия. Проявляющий реагент № 2 2,8 г едкого кали растворяют в 50 мл воды и добавляют 0,1 г 1-нафтола. Оба раствора применяют свежеприготовленными. [c.133]

Подготовка образца перед записью спектра. Очевидно, что с уменьшением числа компонентов в данном образце возрастает точность и полнота структурного и функционального анализа по инфракрасным спектрам. Поэтому в инфракрасной спектроскопии приготовление образцов играет чрезвычайно важную роль. Современный инфракрасный спектрофотометр, какими бы хорошими ни были его конструктивные характеристики, не может дать лучшего спектра, чем это определяет качество представленного образца. Исследуемый образец должен быть обработан механически и химически для удаления по возможности всех нежелательных примесей. Полосы представляющего интерес соединения должны быть записаны в оптимальных условиях. Очевидно, что для этого нужно иметь соответствующее лабораторное оборудование и аппаратуру, с помощью которых можно проводить ректификацию или вакуумную перегонку, использовать адсорбционную, бумажную и препаративную газожидкостную хроматографию, провести химическое разделение (например, применяя реактив Жирара для выделения альдегидов или боратный метод для выделения первичных или вторичных спиртов, которые затем могут быть регенерированы водой). Необходимо также оборудование для разделения на основе различной растворимости, начиная с делительной воронки и кончая протнвоточнымн жидкостными колоннами. Все это увеличивает возможности ИК-метода в значительно большей степени, чем какие-либо тщательные калибровки прибора. [c.139]

Инертность материалов, используемых в ТСХ, делает их идеально пригодными для применения сильнодействующих реактивов. Миллер и Кирхнер [1] в 1953 г. впервые высказали и развили идею о возможности проведения химических реакций непосредственно на хроматографических пластинках. В этом методе пробу можно поместить на пластинку и нанести на пробу реактив. По заверщении реакции можно путем элюирования соответствующим растворителем разделить продукты реакции. В тех случаях, когда этот метод цепригоден, реактив и исходное соединение, согласно предложению Метиса и Оуриссона [2], можно смешать в микроколичествах в маленькой пробирке или в капилляре. Полученную смесь можно после этого нанести непосредственно на хроматографическую пластинку. Зная величины Rf исходного соединения и продуктов реакции, нередко можно с уверенностью идентифицировать соединение. Так, например, если пробу цитраля нанести на пластинку с силикагелем и добавить каплю 30 %-ного пероксида водорода, а затем облучить в течение 10 мин УФ-светом, то в результате окисления образуется гераниевая кислота. На другую пробу цитраля можно нанести каплю 10 %-ного раствора алюмогидрида лития в эфире. При этом происходит восстановление цитраля в гераниол. Проведя хроматографирование и найдя значения Rf продуктов этих двух реакций, а также величину Rf исходного соединения, легко идентифицировать последнее. Многочисленные примеры, приведенные в данной главе (табл. 6.1), иллюстрируют не только универсальность этого метода, но и широкие возможности применения тонкослойной хроматографии для анализа многих соединений различных типов. Впрочем, в такой демонстрации нет особой необходимости, если принять во внимание огромное количество описанных в литературе разделений разнообразных соединений на различных адсорбентах. [c.194]

Газы, химически связанные кровью, выделяют посредством химической обработки в реакционном сосуде, соединенном с хроматографом [73]. На схеме на фиг. 43 показана конструкция такого реакционного сосуда. Газ-носитель поступает в нижнюю часть а камеры и приходит через диск из пористого тефлона в верхнюю часть б, где помещена проба крови и реактив. Тефлоновый диск разбивает поток газа-носителя, проходящий через жидкую смесь, на мелкие струйки, а равномерное перемешивание обеспечивается небольшой магнитной мешалкой в. Выделившиеся газы проходят через короткую осушительную трубку для удаления влаги и затем поступают в колонку. Для анализа пробы в реакционную камеру вводят гемоли-зирующий агент и выдувают воздух газом-носителем. Затем вводят точно измеренное количество крови (около 0,1 мл). Спустя 10 сек или раньше [c.143]