Модификация клонов

Изолированные протопласты можно культивировать. Обычно для этого используют те же среды, на которых растут изолированные клетки и ткани. Сразу же после удаления ферментов у протопластов в культуре начинается образование клеточной стенки. Протопласт, регенерировавший стенку, ведет себя как изолированная клетка, способен делиться и формировать клон клеток. Регенерация целых растений из изолированных протопластов сопряжена с рядом трудностей. Получить регенерацию через эмбриогенез удалось пока только у растений моркови. Стимуляцией последовательного образования корней и побегов (органогенез) добились регенерации растений табака, петунии и некоторых других растений. Следует отметить, что протопласты, изолированные из генетически стабильной клеточной культуры, чаще регенерируют растения и с большим успехом используются при исследованиях генетической модификации протопластов. [c.178]

Ключевым моментом этого метода является то, что плазмидная ДНК клонов, несущих и экспрессирующих ген фермента модификации, оказывается устойчивой к расщеплению соответствующей эндонуклеазой рестрикции, поскольку сайты узнавания в ней метилированы. [c.248]

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К КЛОНИРОВАНИЮ, МОДИФИКАЦИИ И ХАРАКТЕРИСТИКЕ ИНДИВИДУАЛЬНЫХ КОСМИДНЫХ БИБЛИОТЕК КЛОНОВ [c.74]

Способность к синтезу определенных антител данным клоном клеток глии может сохраняться в течение всей жизни так же, как это свойственно иммунологической памяти вообще. Столь же продолжительной оказывается модификация синапсов, что и служит в конечном счете основой,ДП . [c.395]

Модификации — это смена фенотипов при изменении условий существования клона. Например, вид andida irapi /isB субклоновых культурах на сусле-агаре может образовывать рудиментарные коремии. При пересеве этих субклонов на среду Сабуро можно наблюдать быструю реверсию их в исходное состояние (гладкая форма колоний). Следовательно, конкретный фенотип данного вида микроба воспроизводится в совершенно определенных условиях его существования и всецело зависит от генотипа или наследственной конституции клетки, [c.100]

Автоматический дифрактометр ДАР-УМ представляет собой эквина-клонный дифрактометр для монокристаллов, управляемый ЭВМ Днепр- . В выбранной для управления одним дифрактометром модификации оперативное запоминающее устройство имеет емкость 2К слоев, пассивное — ЗК слоев. Имеются 288 входных дискретных каналов, 120 выходных дискретных каналов, из них используется около половины. Для организации прерывания по заданному времени в ЭВМ встроен специальный секундомер. В комплект дифрактометра входят также стабилизированный источник рентгеновского питания, автоматический эквинаклонный гониометр и измерительный канал, заканчивающийся пересчетным устройством. [c.14]

Настоящая глава посвящена генетическим подходам к выделению, генноинженерному манипулированию и анализу индивидуальных космидных клонов или библиотек клонов. В ней представлены методики упаковки космидных клонов в лямбо-доидные фаговые частицы и отбора нужных космид (или плазмид) из полных библиотек путем гомологичной рекомбинации. Рассмотрены также способы модификации отобранных клонов или групп клонов с помощью вставок или замещений определенных последовательностей. [c.74]

Космидные векторы — плазмиды, несущие os-последователь-ности, распознаваемые компонентами системы упаковки фага X [1], представляют собой удобный инструмент для клонирования и анализа больших фрагментов геномов, картирования хромосом и клонирования генов, размер которых превышает 20 т. п. н. Хотя в настоящее время разработаны приемы, позволяющие конструировать космидные клоны и оперировать с космидными библиотеками, все же неизбел но возникают трудности при получении и анализе больших библиотек, необходимых для клонирования генома млекопитающих в частности, вызывает затруднение введение специфических модификаций во вставки в тех случаях, когда их нельзя прямо увязать с характеристиками рестрикционной карты. Эти трудности могут быть весьма существенными. Во многих случаях для их преодоления используются методы генетики бактерий, позволяющие упростить илп облегчить решение этих задач. [c.74]

Модификация космидных клонов путем гомологичной рекомбинации — исключительно эффективный и высокоизбирательный процесс. В большинстве случаев, когда работают с интакт-ными космидами, подходящие сайты рестрикции либо трудно идентифицировать, либо их вовсе нет. И преимущество генетических подходов обычно состоит в том, что они требуют значительно меньших затрат труда. [c.86]

Рис. 6. Камера-люсида для отбора клонов. Полностью отражающее зеркало (1) (серебрение по передней плоскости) расщепляющее луч зеркало (2) (наполовину серебренное спереди и затемненное сзади) для наблюдений достаточно увеличения Х2 на расстоянии 50 см мы использовали или самодельный монокуляр, или цейсовский аналитический микроскоп с 500-мм линзами (как на рисунке). Для построения изображения фильтр освещается небольшим осветителем, расположенным рядом с правым зеркалом в поздних модификациях освещающий пучок падает на фильтр под таким углом, что его оптический путь совпадает с наблюдаемым. Все зеркала могут двигаться и наклоняться так, чтобы световой путь к пленке (3) и к фнль тру (4) мог быть идентичен. Во время работы поддон обязательно заполняют сухим льдом до уровня пластиковой платформы, на которой стоит чашка Петри с исследуемым фильтром. Охлажденная фольга (5) защищает фильтр от атмосферной влаги.

Имеет ли сохранение способности к дифференцировке генетическую основу Не обязательно. Каким образом можно объяснить наследование способности к дифференцировке в данном направлении у многих поколений деля1дихся стволовых клеток Сразу же возникает предположение, что произошло изменение генетического материала, другими. словами, что ДНК во всех клетках данного клона модифицирована одинаковым образом. Но это пе единственное объяснение. Позвольте привести яркий и убедительный пример, когда изменеппе, наследуемое Е. oli па протяжении сотен поколений, пе имеет ничего об]цсго с генетической модификацией. Это так называемый феномен поддержания (рис. 13-9). [c.243]

Современные методы определения частоты спонтанного мутирования представляют собой модификации подхода, использованного С. Лурия и М. Дельбрюком (1942). Эти авторы впервые исследовали распределение числа мутантных клеток в параллельных клонах — бактериальных культурах. Рассмотрим один из вариантов определения частоты спонтанного мутирования на конкретном примере исследования мутаций Ade - Ade у мутанта по гену adel дрожжей-сахаромицетов. Этот пример удобен тем, что колонии, образуемые исходной культурой, красные и нуждаются в аденине. Мутанты же (в данном случае ревертанты) белые и [c.298]

Описаны различные модификации метода бляшек с использованием суспензии клеток в агарозе или агарового покрытия [16, 18]. Один из этих методов разработан для медленно размножающегося вируса бешенства [19]. Сублиния клеток ЗНК-21 (клон 13S) была адаптирована к росту в суспензионной культуре в присутствии агарозы в течение 1,5—2 нед [20] (эти клетки способны расти как в монослое, так и в суспензионной культуре на среде МЕМ-10). Клетки, хранящиеся в жидком азоте, сначала выращивают в виде монослоя, а затем пассируют путем регулярной трипсинизации. Размороженные клетки проходят около 30 пассажей. После этого их способность давать бляшки может нарушиться. [c.118]

Переключение экспрессии с одного гена VSG на другой. Как только трипаносомный клон переходит с образования одного VAT на синтез другого, выключается один VSG-ген и включается другой. Каждому VAT соответствует только один вид VSG-mPHK. Ранее в этой главе мы обсуждали три механизма переключения для быстрой регуляции транскрипции. При синтезе флагеллина Salmonella оперон Н2 включается и выключается в результате обратимых инверсий промотора. При инверсии G-сегмента в геноме фага Ми промотор остается на месте, но определенные гены перемещаются в положение правее промотора. У дрожжей при переключении типа спаривания сегменты, содержащие соответствующие гены и промоторы, перемещаются в активный участок генома. Именно этот последний механизм используют трипаносомы для переключения генов VSG, но не в чистом виде, а с некоторыми модификациями, еще не до конца установленными. Ясно одно для трипаносом и других простейших характерны уникальность, с одной стороны, и изменчивость-с другой. [c.298]

Секвенирование больших фрагментов ДНК методом химической деградации по Максаму-Гилберту было возможно путем построения подробной рестриктазной карты клонированного фрагмента ДНК, разработки на ее основе стратегии секвенирования, заключающейся в выборе тех или иных рестриктазных фрагментов исследуемого клона, полностью перекрывающих всю длину вставки (рис. 8.1). Далее следовал этап препаративного расщепления ДНК соответствуюпщми рестрикционными эндонуклеазами, препаративный гель-электрофорез, концевое мечение элюированных фрагментов и проведение реакций химической модификации и гидролиза. Следует отметить, что данный подход к секвенированию крупных вставок методом Максама-Гилберта вполне может быть применен и в настоящее время, однако разработ- [c.234]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология