Небольшие суспензионные культуры

Небольшие суспензионные культуры [c.97]

Для удобства изложения небольшие суспензионные культуры в этой главе будут определяться так же, как и в разд. 2.1. Это чисто условное определение, основанное на том, что увеличение объема культуры выше 2 л требует введения в систему дополнительных факторов. Культивирование клеточной суспензии в лабораторных условиях осуществляется обычно во вращательных сосудах, названных так потому, что они содержат в качестве перемешивающего элемента магнитный стержень, приводимый в движение внешней магнитной мешалкой. Детали некоторых широко доступных вращательных сосудов, а также названия фирм-поставщиков и размеры приведены на рис. 3.12. Важно иметь магнитную мешалку высокого качества, чтобы создавалось достаточно сильное магнитное поле, плавно поворачивающее магнит в желаемом диапазоне скоростей вращения (50—500 об/мин), безотказно работающую в течение долгого времени. Кроме того, магнитная мешалка не должна слишком нагреваться, поскольку культуральный сосуд устанавливается прямо на ее верхушку, и желательно включать в систему тахометр, обеспечивающий регистрацию истинной скорости вращения. Всегда проверяйте, может ли мешалка запускаться из всех возможных положений после перерыва в энергоснабжении. [c.97]

Первый этап исключают в случае использования клеток крови, лимфы, опухолей и некоторых других трансформированных клеток, поскольку они растут в виде суспензионных культур Все другие животные клетки прикрепляются к какой-то поверхности Поэтому ткани, из которых получают такие клетки, дезинтегрируют в тканевых гомогенизаторах и обрабатывают протеазой, центрифугируют при небольших скоростях ротора во избежание травмирования клеток [c.344]

Каллус можно механически разделить на одиночные клетки и небольшие комочки клеток и выращивать их затем в суспензионной культуре. В такой культуре клетки очень похожи друг на друга все они имеют тонкую первичную клеточную стенку и крупные вакуоли, пересеченные тонкими цитоплазматическими нитями (рис. 19-66). В ряде случаев из одиночных клеток, выделенных из суспензии, удавалось вырастить целое взрослое растение. Эта [c.205]

Суспензионная культура — суспензия клеток или их агрегатов (небольших групп) во взвешенном состоянии в жидкой среде при использовании аппаратуры, обеспечивающей их аэрацию и перемешивание. [c.467]

Малые гомогенные эксплантаты могут быть представлены как отдельными клетками или протопластами, так и встречающимися в суспензионных культурах небольшими клеточными агрегатами, образованными различным числом клеток. Популяции таких эксплантатов можно использовать в экспериментах по трансформации, а для манипуляций с ними применять методы, разработанные для бактерий. Эта технология часто упоминается как метод совместного культивирования и включает инкубацию агробактерий совместно с многочисленными попу- [c.140]

Трансформацию небольших колоний суспензионной культуры клеток моркови, высеваемых с низкой плотностью на фидерные чашки , путем совместного культивирования с агробактериями с последующей регенерацией растений моркови через соматический эмбриогенез. [c.143]

Выливают 20 мл суспензионной культуры в стерильную пластиковую стандартную пробирку на 25 мл и дают крупным клеточным колониям осесть в течение 5 мин. Небольшие колонии будут осаждаться последними и использоваться для приготовления фидерной чашки. [c.166]

Как уже говорилось, для наращивания клеточной массы удобнее использовать не монослойные, а суспензионные культуры. Некоторые клетки, особенно кроветворные, лучше растут в суспензионной культуре. Другие клетки могут быть адаптированы или отобраны на рост в суспензии. И наконец, небольшая часть клеток, например линии диплоидных клеток человека ( 1-38, МКС-5), вообще не выживает в суспензии. Помимо всего прочего некоторые клеточные продукты могут экспрессироваться, только когда клетки существуют в монослое либо после образования межклеточных контактов (например, для распространения внутриклеточных вирусов по клеточной популяции), что также ограничивает возможность использования суспензионной культуры. [c.94]

В зависимости от способа, условий культивирования и происхождения можно выделить несколько типов культур клеток и тканей. Если культивирование происходит поверхностно на агаризо-ванной питательной среде, то образуется каллусная ткань. Она не имеет четко выраженной структуры, но может различаться по плотности. Происхождение и условия выращивания определят, будет ли каллусная ткань рыхлой, средней плотности или плотной. Рыхлая каллусная ткань имеет сильно оводненные клетки, легко распадается на небольшие группы клеток и кластеры и поэтому может быть использобана для получения суспензионной культуры. Ткань средней плотности характеризуется хорошо выраженными меристематическрши очагами. В ней легко инициируются процессы органогенеза. Наконец, у плотных каллусных тканей различают зоны редуцированного камбия и трахеидоподобных элементов [c.166]

Антоцианидины. Превращение флаванонолов в антоцианидины было показано у нескольких видов растений и подтверждено в экспериментах с суспензионными культурами клеток Однака механизм этого превращения неизвестен. Степень окисления этих соединений формально одна и та же, и поэтому был предложен гипотетический путь, не включающий реакций окисления и восстановления (рис. 4.13). Биосинтез того небольшого числа 3-дезоксиантоцианидинов, которые встречаются в природе остается пока загадкой. [c.145]

Отдельные клетки, небольшие группы или достаточно крупные агрегаты >50 клеток) выращивают во взвешенном состоянии в жидкой среде. Применяют разные аппараты и способы поддержания их в таком состоянии. Начальный момент получения суспензионной, клеточной культуры является событием рандоми-ческим. Зто означает, что только клетки, которые подряду причин способны к перестройке метаболизма и размножению с высоким коэффициентом в данных конкретных условиях суспензионного культивирования, образуют хорошие линии. Важными характеристиками таких линий является высокая степень дезагрегации (5—10 клеток в группе), морфологическая выравненность клеток (небольшие размеры, сферическая или слегка овальная форма, плотная цитоплазма), отсутствие трахеидоподобных элементов. На рис. 5 представлены клетки суспензионной культуры [c.21]

Наиболее пригодна для выделения протопластов рыхлая, не дифференцированная ткань, образующая небольшие агрегаты клеток при переводе в жидкую среду. При добавлении ферментов агрегаты легко распадаются на отдельные клетки. Чаще для выделения протопластов применяют суспензионные культуры клеток. Обычно они имеют небольшое число клеток с уплотненными стенками, не разрушающимися при действии целлюлитических ферментов, и их легко удалить фильтрованием. Кроме того, суспензии удобны для разных манипуляций фракционирования клеток, введения изотопов, получения синхронных популяций. [c.166]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология