Методы гистохимического выявления ферментов

МЕТОДЫ ГИСТОХИМИЧЕСКОГО ВЫЯВЛЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ [c.221]

Методы гистохимического выявления этих ферментов основаны на выявлении фосфорной кислоты (метод с соля- [c.177]

Поскольку ферментные белки по реакциям связывания красителей практически не отличаются друг от друга, в основе гистохимии ферментов лежит выявление продукта ферментативной реакции. Специфическое выявление ферментного белка может быть проведено лишь с помощью сложных иммуногистохимических методов (см. стр. 297) При этом следует обращать внимание на то, что гистохимические методы не могут дать сведений о том, в каком состоянии находится фермент—в активном или неактивном. [c.172]

Большого внимания заслуживает топохимия АТФазы, активируемой ионами натрия и калия (Ка-К-АТФаза, или. транспортная АТФаза). С уверенностью можно утверждать, что этот очень лабильный фермент был выявлен с помощью гистохимических методов только в сарколемме. [c.183]

Применение. В микроскопии в качестве субстрата для количественного определения и гистохимического выявления локализации эстераз f t —3]. Метод основан на гидролизе индоксилацетата (или других растворимых сложных эфиров индоксила) с выделением свободного индоксила, который кислородом воздуха быстро окисляется в нерастворимый синий краситель — индиго, В гистохимии ферментов в качестве субстрата для выявления катепсина С [Пирс 847] и ацетилхолинэстеразы [4], [c.158]

Имеющиеся в нашем распоряжении гистохимические реакции охватывают методы для выявления белков и аминокислот, углеводов, нуклеиновых кислот, липидов, биогенных аминов, неорганических веществ и ферментов. Поскольку выявление ферментативной активности во многих отношениях отличается от выявления веществ, ферменты рассматриваются отдельно от белков. В специальные методические разделы выделены также радиоавтография и иммуногистохимия. [c.53]

Ферменты существуют в клетке, как правило, в двух формах в виде экстрагируемых, растворимых лиофермен-тов и в виде нерастворимых, связанных с клеточными структурами десмоферментов. Если гистохимическое выявление десмоферментов при наличии подходящих методов не представляет большой сложности, то выявление лиоферментов сопряжено со значительной, а иногда и пол- [c.174]

Результаты гистохимического выявления кислой фосфатазы, несомненно, зависят от выбора субстрата. Для гистохимического выявления фосфатаз в качестве субстрата наиболее пригодны нафтол-AS-BI- и -TR-фосфат. Методом Лойды (Lojda) с нафтол-А8-В1-фосфатом выявляется широкий спектр кислых фосфатаз. Все проведенные до сих пор исследования по электрофоретическому разделению кислых фосфатаз показали, что данные по числу изоферментов кислой фосфатазы неоднозначны. Чаще всего выделяют 3—4 типа. Кислая фосфатаза является широко распространенным ферментом, отличающимся выраженной изменчивостью. [c.181]

Липазы гидролизуют эфиры жирных кислот с довольно длинной цепью независимо от того, являются ли они триэ-фирами или моноэфирами. Согласно Деснуйе (Desnuelle), под липазами, как правило, понимают большую группу ферментов, гидролизующих различные эфиры, к которым могут относиться как водорастворимые, так и водонерастворимые моно- и полиэфиры. Поскольку ацильная группа может быть алифатической или ароматической, а вторая группа спиртовой или фенольной, обычно используемый термин липаза мало чем отличается от определения эстераза . Для гистохимического выявления липаз обычно используют в качестве субстратов различные виды твинов, которые могут, однако, расщепляться и неспецифическими эстеразами. Разработанный Гомори метод с солями металлов для выявления липаз не позволяет получать достаточно определенных результатов и поэтому не может считаться надежным для выявления этих ферментов. [c.193]

Гистохимическое выявление арилсульфатаз требует предварительной фиксации ткани (глутаральдегид или формалин). Имеется 3 основных принципа выявления этих ферментов реакция азосочетания, реакция осаждения солями металлов и индигогенные методы. [c.198]

Так, например, способность холинэстераз катализировать гидролиз эфиров тиохолина, лежащая в основе гистохимических методов выявления локализации этих ферментов (см., например, [19— 21, 59]), была использована для создания количественных методов измерения активности холинэстераз. Мейер и Вильбрандт [60], применяя ацетил- и бутирилтиохолины, определяли скорость гидролиза субстратов по количеству 2,6-дихлорфенолиндофенола, восстановленного продуктом реакции — тиохблином. [c.154]

Как упоминалось, методология гистохимического исследования локализации ГАМК или образующего ее фермента — глу-таматдекарбоксилазы — неприменима для выявления других тормозных систем — глицина и таурина и их рецепторов. Анализ их распределения производят, как правило, с использованием методов электрофизиологической регистрации высвобождения нейропередатчика из нервных окончаний при их разнообразной стимуляции. [c.229]

В середине 60-х годов для идентификации и локализации антигенов в гистохимических препаратах и выявления полос преципитации в иммунодиффузионных и иммуноэлектрофоретических методах в качестве высокочувствительной метки было предложено использовать молекулы ферментов. Являясь по своей природе мощными химическими катализаторами, ферменты способны эффектив- [c.6]

Эти методы основаны на том, что белки по-разному относятся к катаболическим ферментам. Действие фермента определяется по продуктам распада белка или путем микроскопического изучения обусловленных ферментативным действием изменений субстрата в гистологическом препарате. Именно этот второй подход и находит применение в гистохимических методах. Изменения субстрата, происходянще в препарате, оцениваются при помощи методов окрашивания, направленных на выявление реакционноспособных групп в молекулах беика, а также при помощи окрашивания забуференными растворами красителя. Помимо этого, используются также и гисто-физиче-ские методы (например, интерференционная или поляризационная микроскопия). Эти методы позволяют исследова- [c.66]

Эти преимущества и отчетливый контраст тяжелых металлов на электронных микрофотографиях делают в принципе возможным использование метода Гомори с солями металлов для ультраструктурной локализации ферментов, высвобождающих фосфат. Благодаря легкой растворимости фосфата кобальта и сульфида кобальта в OSO4 в процессе дофиксации в электронно-микроскопических исследованиях для выявления щелочной фосфатазы вместо Са используют РЬ . Для предотвращения вьша-дения солей свинца в осадок, наблюдаемого уже при слабощелочных значениях pH, в инкубационную среду доба-, вляют комплексообразователи, такие, как тартрат, тирон, цитрат. Принцип комплексообразования зарекомендовал себя очень хорощо. Благодаря ему появилась возможность заменить методы, состоящие из двух последовательных реакций, одновременными реакциями, ведущими непосредственно к образованию конечного гистохимического продукта. [c.179]

После реакции антиген — антитело локализацию антигена устанавливают по активности связанного фермента. Использование пероксидазы в качестве ферментной метки имеет два решающих преимущества 1) фермент выпускается промышленностью в сравнительно чистом виде 2) для его выявления разработаны надежные гистохимические методы на световом и электронно-микроскопическом уровнях. Успех реакции определяется высокой удельной активностью антитела и чистотой ферментного препарата. Для конъюгации антител с ферментом используют различные реагенты. Помимо функционального реагента—и, п -дифтор-л ,л< -динитроли нилсульфона, который не оказывает существшного воздействия ни на ментативную, ни на иммунологическую активность, важное значение, по-видимому, имеет также глутаральдегид, поскольку и он не [c.302]