Жидкостная хроматография при высоких давлениях градиентные элюирования

Взаимосвязь жидкостной хроматографии высокого давления с другими хроматографическими методами иллюстрирует рис. 7.19. Преимуществами жидкостной хроматографии высокого разрешения являются высокая скорость разделения, возможность многократного использования колонок, автоматическая непрерывная подача растворителя, возможность с высокой воспроизводимостью осуществлять программы изменения состава смешанного растворителя в процессе разделения (градиентное элюирование) и [c.447]

На большинстве же приборов для градиентного элюирования в жидкостной хроматографии при высоком давлении можно готовить градиенты только из двух элюентов. Градиентное элюирование усложняется из-за различия в вязкости используемых растворителей, различия в сжимаемости и неидеального поведения смесей. Выбранная система элюентов должна быть испытана на воспроизводимость приготовления градиентов и постоянство подачи при заданной программе. [c.146]

Хроматограмма на рис. 12.12 иллюстрирует применение жидкостной хроматографии высокого разрешения для анализа поглощающих в УФ-области компонентов (таких, как составляющие нуклеиновые кислоты) мочи. Хроматографирование проводилось на колонке с сильноосновной анионообменной смолой (размер частиц 12—15 мкм) при градиентном элюировании. В качестве стартового элюента использовался 0,015 М раствор ацетата натрия с pH 4,4. К нему добавляли градиентную смесь 6,0 М ацетата натрия с pH 4,4. Линейный градиент создавался через 30 мин после ввода пробы и поддерживался первые 24 ч. После этого от 24 до 30 ч подавался неградиентный элюент конечной концентрации 6,0 моль/л. Объемная скорость подвижной фазы составляла 8 мл/ч при давлении на входе от 70 до ПО атм. Первые 4 ч в колонке поддерживалась температура 25 °С, затем ее повышали. С помощью петли для образца р колонку вводилось 200 мкл необработанной мочи и за 30-часово [c.311]

Благодаря высокой чувствительности детекторов, применяемых в современных жидкостных хроматографах, для анализа достаточно нескольких микролитров вещества. Разделение осуществляется в короткие промежутки времени за счет использования колонок малых размеров и высоких скоростей элюирования (давления на входе в колонку до нескольких сотен атмосфер). При применении некоторых типов детекторов (спектрофотометрических, транспортных и др.) можно управлять ходом разделения путем регулируемого изменения температуры, давления или состава элюента в ходе анализа. Программируемое изменение состава элюента (градиентное элюирование) плодотворно реализовано, например, в уже отмечавшейся методике ЛЭАХ [123, 124] (см. рис. 1.1). На применении транспортного детектора и смеси трех растворителей в качестве подвижной фазы основан способ [c.33]

Весьма важный узел жидкостного хроматографа представляет собой система подготовки и подачи элюента. В нее входят резервуар с элюентом, где должна быть предусмотрена возможность дегазации растворителя (в вакууме, при нагревании или ультразвуком), а также соответствующие фильтры для удаления воды и взвещенных твердых частиц из органических растворителей. Система подачи элюента должна обеспечить, во-первых, беснульсацион-ный поток жидкости через колонку и детектор. Пульсация или монотонное изменение скорости потока элюента приводит к невоспроизводимости удерживаемых объемов, что, в свою очередь, затрудняет качественный и количественный анализ. Кроме того, пульсация потока элюента искажает работу детектирующих систем, это также отражается на погрешности измерений и чувствительности анализа. Система подачи элюента должна обеспечить, во-вторых, возможность изменения в сравнительно широком диапазоне скоростей потока (в пределах двух порядков) в-третьих, возможность работы при высоких давлениях, необходимых для сокращения времени разделения, и, в-четвертых, возможность работы в режиме градиентного элюирования. [c.316]

Чувствительность транспортного детектора по сравнению с ПИД применяемым в газовой хроматографии, не очень велика, однако находится в той же концентрационной области, что и чувствительность почти всех детекторов в жидкостной хроматографии, т. е. составляет 1—3 мкг/мл. Если учесть, что на проволоке остается очень незначительное количество пробы, то эта чувствительность отличная. Не следует упускать из виду, что часть пробы при испарении растворителя теряется. При этом различия в летучестях компонентов пробы могут исказить количественный результат. Кроме того, не все сгорающие газы подходят для ПИД. Этот детектор был бы идеальным для жидкостной хроматографии при высоких давлениях, так как с его похмощью можно определять свойства собственно пробы, не содержащей элюента, и при этом были бы возможны без особых осложнений разделения с использованием градиентного элюирования. [c.72]

В приборе для жидкостной хроматографии при высоком давлении с аналитической колонкой 30 см х 4 мм (внутр.) элюирование с градиентом от О до 100% компонента Б должно продолжаться не менее 20 мин при скорости элюента 2 мл/мин. Чем короче период градиентного элюирования, тем меньше компонентов удается отделить друг от фуга в процессе элющювания. Если при постояннсш времени градиентного элюирования увеличивают скорость потока, то объем удерживания, при котором вымывается пик, увеличивается. Однако из-за более высокой скорости увеличивается также ширина полос, так что улучшить разделение не удаедся. [c.148]