Нуклеазы II также Рибонуклеазы

До самого последнего времени расшифровка нуклеотидных последовательностей ДНК представляла почти неразрешимую проблему не только из-за большого размера молекул, но также из-за отсутствия подходящих нуклеаз. Часто прибегали к транскрибированию участков ДНК с образованием РНК или же каким-либо образом встраивали определенные рибонуклеотиды в ДНК, чтобы использовать имеющиеся рибонуклеазы для частичного расщепления ДНК. Однако за последние несколько лет было открыто большое число высокоспецифичных рестриктаз. Они расщепляют двухцепочечную ДНК в определенных последовательностях, состоящих из четырех-шести оснований, и позволяют расчленить длинные молекулы на фрагменты, поддающиеся анализу. Для определения последовательностей в таких рестрикционных фрагментах бьши разработаны новые, очень мощные методы. Ключевым моментом в этих методах является возможность разделения (с помощью электрофореза) фрагментов ДНК, которые различаются по длине на один нуклеотид, в то время как сами фрагменты содержат до нескольких сотен звеньев это позволяет точно локализовать места химических или ферментативных расщеплений просто измерением длины получающихся фрагментов ДНК. Эти новые методы столь эффективны, что они за короткое время дали возможность получить информацию о последовательностях ДНК, превосходящую по объему все накопленные за десятилетия данные о последовательностях белков и РНК. [c.158]

Нуклеиновые кислоты поступают в организм с пищей главным образом в составе нуклеопротеи-нов и высвобождаются в результате действия протео-литических ферментов кишечника. Панкреатический сок содержит рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы, гидролизующие нуклеиновые кислоты до нуклеотидов. Полинуклеотидазы или фосфоэстеразы кишечника, дополняя действие панкреатических нуклеаз, также гидролизуют нуклеиновые кислоты до мононуклеотидов. Далее, под воздействием нуклеотидаз и фосфатаз происходит гидролиз нуклеотидов до нуклеозидов, которые либо всасываются, либо под воздействием фосфатаз слизистой кишечника деградируют до пуриновых и пиримидиновых оснований. Основания могут подвергаться окислению гуанин, например, окисляется до ксантина и затем до мочевой кислоты аденозин превращается в инозин, затем в гипоксантин и далее в мочевую кислоту (рис. 35.1). Мочевая кислота всасывается в кишечнике и затем выделяется с мочой. В организме человека большая часть пуринов, высвободившихся из нуклеиновых кислот, которые поступают с пищей, превращается в мочевую кислоту (при этом не происходит их включения во вновь образующиеся молекулы нуклеиновых кислот). Свободные пиримидины, скармливаемые крысам, также в основном катабо-лизируются и выделяются без включения в нуклеиновые кислоты тканей организма. Таким образом, нуклеиновые кислоты пищи практически не выступают в роли поставщика непосредственных предшественников нуклеиновых кислот тканей организма. [c.15]

Свертывание может происходить значительно быстрее, чем синтез цепи. Свертывание in vitro осуществляется чрезвычайно быстро, по крайней мере для малых белков, не содержащих дисульфидных мостиков. Нуклеаза стафилококка повторно свертывается в течение 1 с [438], а метмиоглобин — в течение 10 с [439]. Если эти величины применимы также и к условиям in vivo, свертывание цепи может происходить по крайней мере в 10 раз быстрее, чем биосинтез аминокислотной последовательности. Дисульфидсодержащие белки, например панкреатическая рибонуклеаза, повторно свертываются за время от 1 до 10 с, если дисульфидные связи не были разорваны в процессе предшеств ющей денатурации [440]. Однако если такие белки развернуты и восстановлены, последующее свертывание цепи (которое включает образование правильной системы дн-сульфидных связей) продолжается при оптимальных условиях в течение многих минут. [c.182]

Дизамещенные фосфаты гидролизуются ферментами фосфо-диэстеразами. Некоторые из них неопецифичны, но больщинство участвует в гидролизе иуклеиновых кислот и называется нуклеаза-ми. Существуют рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы (гл. 34), и по действию они соверщенно различны. Экзонуклеазы атакуют фосфодиэфирные связи последовательно, начиная с одного конца цепи нуклеиновой кислоты, в то время как эндонуклеазы атакуют также и связи внутри цепи. [c.633]

На препаратах метиловый зеленый окрашивает ДНК в зеленый цвет, а пиронин окрашивает РНК в красный. При этом параллельные препараты перед окрашиванием обрабатывают нуклеазами, например 0,1%-м водным раствором рибонуклеазы в течение 2—3 ч при температуре 37 С. Вместо рибонуклеазы можно использовать 5—10%-й раствор трихлоруксусной кислоты. Необходимость обработки параллельных препаратов нуклеазами связана с тем, что эти красители не специфичны для нуклеиновых кислот и могут связываться другими веществами. Так, пектиновые вещества могут также окрашиваться пиронином. [c.93]

II. Действие ферментов. Одноцепочечная вирусная РНК Крайне чувствительна к действию рибонуклеаз. Поскольку достаточно только одного разрыва в молекуле РНК, чтобы она потеряла инфекционность, крайне важно избежать действия фермента в процессе выделения РНК. В очищенных вирусных препаратах часто присутствуют следы рибонуклеаз из листьев. Они должны быть удалены либо из интактного вирусного препарата, либо во время выделения РНК, либо, наконец, в ходе этого процесса следует использовать ингибиторы рибонуклеаз. Деградация под действием нуклеаз может быть также сведена к минимуму, если использовать условия, при которых аетивность фермента минимальна — низкая температура (0—4 °С), соответствующие значения pH и ионной силы. [c.54]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология