Рибонуклеаза ингибитор

Метод состоит в сравнении экспериментальной индикатрисы с теоретической, вычисленной на основе кристаллографических данных. Не обнаружено заметных различий между структурами в кристалле и растворе (в области расстояний 1 нм) для рибонуклеазы и для комплексов рибонуклеазы и лизоцима с их ингибиторами. Однако экспериментальная кривая для лизоцима без ингибитора слегка отличается от теоретической в интервале расстояний 2 нм. Это различие можно интерпретировать как флуктуационное расширение зазора между двумя доменами белка. Заметные различия обнаружены на кривых для миоглобина, что, по-видимому, объясняется флуктуационными смещениями ее СН-шпильки относительно других частей молекулы. Установлены также существенные различия в структурных данных для кристаллического и растворенного лизоцима фага Т4 и для других белков. Таким образом, по крайней мере некоторые белки в растворе характеризуются смещениями доменов, из которых построены глобулы. [c.137]

Очевидно, что такая информация может представлять большую ценность при детальном изучении связывания субстратов и ингибиторов с активным центром фермента. К сожалению, этот подход неприменим для другого наиболее изученного фермента — рибонуклеазы (см. разд. 14.2.3), поскольку этот белок не содержит триптофана. [c.359]

Ингибитор рибонуклеазы из печени крысы [c.339]

Применение. В гистохимии в качестве ингибитора рибонуклеазы, полностью подавляющего активность фермента [I, 2]. [c.202]

Препараты рибонуклеазы, полученные из разных сырьевых источников, мо гут иметь различные свойства [1, 2], Большинство из них специфически расщепляет фосфодиэфирные связи, образованные пиримидиновыми нуклеотидами, и не действует на связи между пуриновыми нуклеотидами. Препараты рибонуклеазы отличаются различной чувствительностью к активаторам, ингибиторам и субстратной специфичностью. Ингибиторами рибонуклеазы. из поджелудочной железы крупного рогатого скота являются Са +, Мп +, Си +, а активатором — Mg2+. [c.338]

В результате изучения взаимодействия ферментов с субстратами и ингибиторами удалось выяснить ряд важных вопросов, касающихся механизма ферментативных реакций. Детальное рассмотрение всех этих исследований увело бы нас слишком в сторону. Поэтому мы остановимся только на некоторых выводах, имеющих непосредственное отношение к предмету этой книги. Прежде всего рассмотрим свойства самого фермента. Активность фермента, как правило, зависит от целостности его третичной структуры. Под действием денатурирующих агентов, изменяющих конформацию фермента, его активность либо уменьшается, либо исчезает полностью. По меньшей мере в одном случае — для рибонуклеазы — установлено, что связывание фермента с субстратом способствует сохранению его конформации даже в присутствии агентов, которые в отсутствие субстрата вызывают денатурацию. Вместе с тем не вся первичная структура необходима для обеспечения активности. Например, фермент папаин, по своим свойствам подобный протеолитическим ферментам, сохраняет свою активность при отщеплении 3/5 его молекулы. Активный фрагмент папаина сохраняет чувствительность к действию денатурирующих агентов, и это свидетельствует о том, что для обеспечения активности необходима определенная третичная структура. В свете этих данных вЪз-никает вопрос почему молекулы ферментов так велики [c.395]

При воздействии ультрафиолетового света, а также нри обработке рибонуклеазой или ингибиторами сульфгидрильных групп поглощение солей резко меняется, причем характер этого изменения напоминает эффект удаления кальция из раствора [50, 150—153]. [c.267]

В заключение необходимо обратить внимание на те трудности, которые возникают при изучении термодинамики и кинетики реакции денатурации из-за необратимости этого процесса для большинства белков. Известны лишь немногие случаи обратимой денатурации — например, для трипсина, химотрипсина, рибонуклеазы и ингибитора трипсина. Не следует думать, что немногочисленность известных случаев обратимой денатурации—это лишь следствие недостаточности наших знаний об условиях обращения процесса для большинства белков. Напротив, необратимость денатурации белков, построенных относительно более сложно и менее жестко , чем перечисленные выше, является закономерным следствием ничтожной вероятности полного восстановления чрезвычайно сложной системы связей, стабилизирующих конформацию полипептидных цепочек в нативной молекуле. Однако при рассмотрении обратимых реакций термодинамические и кинетические характеристики наиболее доступны и полнее выявляются. Возможно поэтому, что особый интерес представит в будущем выявление и исследование промежуточных состояний денатурируемого белка, сколь бы кратковременно ни было их существование. [c.193]

Мы уже видели, что связывание субстратов и ингибиторов с лизоцимом и рибонуклеазой изменяет резонансные сигналы пептидных групп ароматических аминокислот, расположенных вблизи места связывания (см. разд. 14.2.2 и 14.2.3). Особенно важна информация, полученная при изучении резонансных сигналов от гистидиновых и триптофановых остатков лизоцима. Мы теперь рассмотрим прямые наблюдения резонансных сигналов малых молекул. Можно обнаружить изменения химических сдвигов и ширины линий для многих систем. Для определения положения активного центра эти наблюдения, по меньшей мере, столь же полезны, как и изучение резонансных сигналов протонов аминокислотных остатков белка. Однако, поскольку основное внимание в этой книге сосредоточено главным образом на самих полимерах, наше обсуждение этого аспекта исследований белков с помощью ЯМР будет относительно кратким. [c.387]

Ингибиторами трипсина являются фосфорорганические соединения, некоторые металлы, а также ряд высокомолекулярных белковых веществ Высокая субстратная специфичность трипсина позволяет успешно применять его для структурного анализа сложных белков фибрина казеина, рибонуклеазы, инсулина и др. [c.305]

Второе издание этого атласа, опубликованное в 1967—1968 гг., вдвое больше первого и представляет собой исключительно ценную сводку результатов работ по расшифровке последовательности. Там приведены последовательности цитрохрома с, ферредоксина, цепей гемоглобина, миоглобина, различных иммуноглобулинов и их L-цепей, трипсиногена, трипсина, химотрипсиногена, химотрипсина, субтилизина, а-лакталь5умина, триптофан-синтазы, лизоци-мов, рибонуклеазы, ингибитора трипсина, пептидных гормонов, ядов, токсинов, вирусных белков и т. д. Включая видовые вариации, число белков с расшифрованной структурой достигает почти двухсот. [c.40]

Кислый аминополисахарид гепарин [М> 10 ООО) известен в качестве антикоагулянта крови. Кроме того, он применяется в биохимии как ингибитор рибонуклеаз. Это его качество, по-видимому-отражает некоторое сходство полимера, содержащего две-три суль, фогруппы на каждую дисахаридную структурную единицу, с РНК-Две эти особенности определили использование гепарина в качеств, лиганда для аффинной хроматографии факторов коагуляции крове и (особенно широко) для очистки белков, взаимодействующих и нуклеиновыми кислотами (полимераз, обратной транскриптазы, рес стриктаз, факторов инициации и элонгации белкового синтеза и др.). Кроме того, иммобилизованный гепарин связывает липопротеид-липазы и некоторые липопротеиды. Гепарин-агароза выпускается всеми упомянутыми фирмами-поставщиками аффинных сорбентов, кроме Bio-Rad . [c.370]

Эксперименты по повторному свертыванию выявляют быстро и медленно свертывающиеся цепи. Подразделение несвернутых цепей на два класса, быстро и медленно свертывающихся, было-установлено при исследовании рибонуклеазы [440, 447, 448]. В опытах по повторному свертыванию рибонуклеазы, денатурированной без нарушения системы дисульфидных связей, было обнаружено, что 20% цепей повторно свертываются в пределах 0,1 с (быстро свертывающиеся цепи.) Процентное содержание таь их цепей не зависит от способа денатурации (гуанидин гидрохлорид [449], нагревание-[450] и т. д.). Остальные 80% цепей (медленно свертывающихся) превращаются за время от 10 до 100 с в быстро свертывающиеся, которые затем укладываются моментально. Имеется сообщение об-аналогичном, хотя и менее количественном наблюдении в отношении ингибитора трипсина поджелудочной железы быка (BPTI), в котором 15% цепей свертывались значительно медленнее, чем остальные [451]. Это явление пока еще не объяснено. Согласно одной из гипотез [449, 452], в быстро свертывающихся цепях все пептидные-связи представлены правильными цис-транс-тоы 1 аш, тогда как медленно свертывающиеся цепи содержат неправильные изомеры . [c.184]

На протяжении последних десятилетий в связи с повышением разрешающей способности рентгеноструктурного метода была расшифрована третичная структура более 1000 белков, в том числе гемоглобина, пепсина, химотрипсина, рибонуклеазы, лизоцима, трипсина п его ингибитора, ряда фрагментов иммуноглобулинов человека, цптохрома С, карбоаигидразы человека, аспартатампиотраисферазы, инсулина п др. Примеры трехмерной структуры некоторых из них представлены на рис. 1.21. [c.65]

Вслед за первыми работами Сэнгера в последние годы удалось расшифровать первичную структуру многих полипептидов и белков. После определения аминокислотной последовательности инсулина были расшифрованы последовательности рибонуклеазы, полипептида из вируса табачной мозаики, нескольких препаратов цитохрома с, различных цепей гемоглобина, ингибитора трипсина, химо-трипсиногена и химотрипсина, трипсина, глицеральдегидфосфат-дегидрогеназы и т. д. Вместе с последовательностями некоторых пептидных гормонов эти данные вошли в Атлас структуры и аминокислотной последовательности белков , который впервые был опубликован в 1966 г. и затем неоднократно переиздавался [c.40]

Хаммел и Дрейер [31] уравновешивали сефадекс G-25 (0,4 X X 100 см) раствором 2 -цитидиловой кислоты (9 X 10 М) в 0,1 М ацетатном буфере, после чего в том же растворе в колонку вводили 2 мг рибонуклеазы. На диаграмме элюирования помимо пика с /Саю = О, соответствующего комплексу белок — цитидило-вая кислота, наблюдали минимум (с Kav = 0 по отношению к линии фона 2 -цитидиловой кислоты. Если в раствор образца постепенно добавлять все большие количества цитидиловой кислоты, то минимум становится менее выраженным и наконец сливается с линией фона. Концентрация -цитидиловой кислоты в этот момент соответствует точке насыщения комплекса фермент-ингибитор. При дальнейшем увеличении концентрации 2 -цитидиловой кислоты на диаграмме элюирования появляется пик с Kav — 1. [c.148]

Змеиные яды—богатейший источник ферментов. Так, в яде среднеазиатской кобры содержатся фосфолипаза [124], рибонуклеаза [125] и другие ферменты гидролитического характера. Высокой физиологической активностью обладает яд змей из рода Bungarus. Выделяемый из него а-бунгаротоксин обладает активностью фосфолипазы А и одновременно является мощным ингибитором дыхательных ферментов [126] помимо белков с активностью фосфолипазы А, протеазы и гиалуронидазы в яде Bungarus содержатся сильнодействующие кардио- и нейротоксины [127] и ацетилхолинэстераза [c.200]

Предположение о внеядерном или ядерно-независимом синтезе РНК подкрепляется опытом, в котором зародыши были еще полнее ануклеированы рентгеновским облучением обеих гамет (яйцо —50—60 кр, сперма— 70—100 кр) до оплодотворения. Дробление таких зигот происходит при практически полном отсутствии ядер, имеющих нормальные хромосомные наборы. Тем не менее, как видно из рис. 2 кривая 3), в таких зародышах способность к синтезу РНК изменяется так же, как и при облучении после нормального оплодотворения. Реальность включения С -карбоната именно в РНК в таких опытах проверялась обработкой рибонуклеазой. Обнаружено, что 60—80% метки в использованных препаратах РНК разрушается РНК-азой. На основании полученных данных можно сделать вывод, что в ходе дробления облученного яйца синтез РНК может не зависеть от ядер, осуществляясь, по-видимому, на матрицах внеядерных ДНК. О то.м, что это именно ДНК-матрицы, свидетельствуют наши предварительные опыты, показавшие, что этот синтез РНК в облученных дробящихся яйцах угнетается актиномицином Д-типичным ингибитором ДНК-зависимого синтеза РНК [8]. [c.179]

Панкреатическая рибонуклеаза (РНаза) катализирует гидролиз рибонуклеиновой кислоты, расщепляя 3, 5 -фосфодиэфирные связи, соединяющие соседние нуклеотиды. Предполагают, что реакция протекает через образование промежуточного 2, 3 -цикли-ческого нуклеозидфосфата, который затем гидролизуется до З -фосфата. И 2 -, и З -пиримидиннуклеотиды являются потенциальными ингибиторами фермента. [c.294]

Так как полностью очистить РНК от следов рибонуклеаз очень трудно, предпринимались попытки снизить активность рибонуклеаз до минимума с помощью различных ингибиторов. Так, предлагалось проводить опыты при pH 4,6 [8] или пользоваться такими ингибиторами, как сополимер L-тирозина и L-глутаминовой кислоты (1,2 жг/100 мг РНК) [9], по-ливинилсульфат (5 л<г/100 мг РНК) [9], бентонит (2 лгг/100 мг РНК) [9] или проназа (0,02 лгг/100 мг РНК) [10]. Два последних ингибитора интенсивно подавляют активность рибонуклеаз в ироцессе выделения РНК, но их нельзя использовать во время физических измерений. Поли-Ь-тиро-зил-L глутаминовая кислота и иоливинилсульфат активны только в кислой среде (pH 5), поэтому ими нельзя пользоваться при изучении РНК в физиологических условиях. [c.253]

Taba hnik обратился к Hamilton с двумя замечаниями. Во-первых, должно быть, весьма трудно получить чистые ядерные фракции из гомогенатов клеток лимфомы, так как они, вероятно, состоят главным образом из ядер с очень небольшим количеством цитоплазмы. Во-вторых, если изученный фермент представлял собой щелочную рибонуклеазу, то проводил ли автор пробу на ингибитор рибонуклеазы, добавляя, например, р-окси- [c.511]

Активный центр — щель в глобуле рибонуклеазы имеет довольно сложное строение, а каталитический участок содержит остатки гистидина, лизина, серина и треонина. На рис. 32 по данным работы [19] показано на модели строение активного центра рибонуклеазы после адсорбции различных ингибиторов. Гистидиновые остатки (His 12 и His 119) в комплексе с двумя первыми ингибиторами заряжены положительно. В состав активного центра входят лизиновые остатки (Lys 41 и Lys 7), оксигруппы Ser 123 и Tlir 45. Фенилаланин 120 играет большую роль в адсорбционном центре. Механизм действия рибонуклеазы рассматривается в гл. V. Недостаточное разрешение рентгенограмм не позволяет пока с такой определенностью, как для лизоцима, установить молекулярный механизм действия фермента. Однако имеющиеся данные позволяют считать достоверным тот факт, что каталитическая активность рибонуклеазы связана со щелевой адсорбцией молекулы субстрата и стерически обусловленными (жесткими) конформациями каталитически активных аминокислотных остатков относительно молекулы субстрата. [c.118]

Рис. Н.9. Схематическое представление трехмерных структур термолизина (домен П) и цитохрома с (а,б структурная группа а), трипсинового ингибитора соевых бобов и рибонуклеазы А (в,г группа 3), пируваткиназы (домен I) и аденилаткиназы (д,е группа а З) [253]

Выводы Чавеца и Шераги [86], как и Шаффера [87, 88], не.согласуются с результатами и более поздних исследований Крейтона и соавторов рибонуклеазы А [89, 90] и рибонуклеазы Т1 [91] методами, использованными при изучении БПТИ. Здесь также обнаруживаются промежуточные 8-8-продукты, свидетельствующие о внутримолекулярной реорганизации дисульфидных связей по ходу ренатурации, такой же, как в случае трипсинового ингибитора. Не является в связи с этим неожиданным существование ферментов - дисульфидных изомераз, способствующих свертыванию БПТИ и быстрому образованию правильной системы дисульфидных связей [92, 93] (подробнее см. гл. 14). [c.378]

Методы пептидного синтеза с помощью протеаз были с успехом использованы для получения биологически важных пептидов - энкефалинов [2161], ангиотен-зина II [21621, секретина [21631, а также для модификации белков - соевого трипсинового ингибитора [21641 и рибонуклеазы А [21651. [c.201]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология