Оксипролин нингидринная реакция

Идентификация аминокислот и пептидов во фракциях. А. Нингидриновая реакция. Нингидрин реагирует со всеми аминокислотами, имеющими а-МНа-группу, давая фиолетовое окрашивание, за исключением пролина или оксипролина, в реакции с которыми нингидрин дает желтое окрашивание.Некоторые примеси (медь, кадмий и др.) могут влиять на цвет пятен. Для проявления хрома- [c.192]

Аминокислоты открывают цветной реакцией с нингидрином. Две капли 0,1%-ного раствора нингидрина в нитратном буфере наносят на фильтровальную бумагу. Высушивают в шкафу при 100— 105" С. На сухое пятно наносят две капли исследуемого раствора. Бумагу вновь сушат при той же температуре 5—10 мин. В присутствии аминокислот или аминов возникает синее, фиолетовое или красное пятно либо кольцо. Реакцию дают все а-аминокислоты (кроме пролина и оксипролина). [c.126]

Поскольку поглощение при этой длине волны практически линейно зависит от числа исходных аминогрупп, на основе нингидриновой реакции удалось разработать удобный колориметрический метод количественного определения аминов. Если нагревание с нингидрином проводить при pH 1—5, то количество свободной аминокислоты можно определить по объему выделившейся двуокиси углерода (полипептиды и первичные амины также дают лиловое окрашивание с нингидрином, однако в этом случае СО2 не образуется). Таким образом, нингидриновая реакция позволяет определять свободные аминокислоты даже в присутствии полипептидов. В случае имино-кислот (пролина и оксипролина) образуется продукт ярко-желтого цвета с максимумом поглощения около 440 ммк. Это позволяет использовать нин-гидриновую реакцию для определения иминокислот в белковых гидролизатах, содержащих большой избыток аминокислот. [c.48]

Пролин и оксипролин относятся к аминокислотам пиррольного ряда. Они отличаются от всех других аминокислот тем, что ие содержат первичной аминогруппы. С нингидрином они дают не фиолетовое, а желтое окрашивание. Характерной Для них цветной реакцией является реакция с изатином — появление синего окрашивания у пролина и зеленого У оксипролина. Пролин — единственная из аминокислот, входящих в бел- [c.475]

В противоположность а-аминокислотам, а-иминокислоты пролин (X, R—Н) и оксипролин (X, R—ОН) при взаимодействии с нингидрином образуют аддукт (XI). При этом освобождается СО2 (IX), но без одновременного выделения NHj. В результате реакции в уксуснокислой среде образуется желтый продукт (XI), который в нейтральной области при нагревании с избытком нингидрина переходит в вещество (XII) пурпурного цвета. [c.138]

Описана [7] чувствительная реакция на бумаге оксипролина с нингидрином. [c.264]

Для определения пролина нингидрин малочувствителен, поэтому используют 0,5%-ный раствор изатина в изопропиловом спирте, содержащем 4% уксусной кислоты по объему. После прогревания обработанной этим реактивом хроматограммы в сушильном шкафу пролин проявляется в виде яркого синего пятна. Чувствительность реакции для пролина 0,1 мкг в 1 мкл. Пятна других аминокислот с изатином приобретают слабую розовую окраску. Оксипролин окрашивается в голубой цвет. [c.43]

Дженкинсон и Тинслей [19] идентифицировали с помощью хроматографии на бумаге состав аминокислот, гидролизат которых был получен в ходе изучения аминокислот растительного происхождения, выделенных из компоста. Десять мл гидролизата, содержавшего приблизительно 1 мг связанного азота, запаривали досуха при пониженном давлении, растворяли в 5 мл воды и снова упаривали досуха. Остаток растворяли в 1,5 мл воды и центрифугировали. Осветвленную жидкость в количестве 0,04 мл наносили на бумагу Ватман № 1. Разделение проводили элюентом, предложенным Вольфом [20]. Хроматограмму проявляли, окуная лист в 0,2%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Были идентифицированы следующие аминокислоты цистеиновая, аспарагиновая, глутаминовая, лизин, аргинин, глицин, гистидин, серии, аланин, тирозин, пролин, валин, треонин, изолейцин, лейцин и фенилаланин. Метионин не поддавался определению, поскольку его трудно было отделить от глицина в описанных системах растворителей. Метио-нин-5-оксид тоже не отделялся от валина. Хроматограммы опускали в 0,1%-ный раствор изатина в ацетоне для обнаружения про-лина и подтверждения отсутствия оксипролина. Детектирование и определение содержания пептида с остатком лизина в середине цепи проводили с помощью 2,4-динитрофторбензола [21]. Эта реакция протекает, поскольку е-аминогруппа, в отличие от а-амино-группы лизина, свободна и может вступать в реакцию. [c.306]

Исключение составляют пролин и оксипролин, которые образуют в реакции с нингидрином продукты желтого цвета. Количественное измерение поглощения при 570 нм (для красно-фиолетового продукта )и при 440 нм (для желтого продукта) лежит Б основе широко известной процедуры аминокислотного анализа [43]. [c.524]

Этот метод позволяет проводить одновременно анализ 50 фракций. После развития пурпурной окраски фракции разбавляют 5 мл смеси этанол—вода (1 1), охлаждают перед электрическим вентилятором и встряхивают в течение 30 сек для окисления большей части оставшегося гидриндантина. Измеряют величины экстинкции при 570 ммк (и 440 ммк для пролина и оксипролина). В реакции с нингидрином, изображенной на стр. 78, все аминокислоты, за исключением цистеина, дают один и тот же окрашенный продукт — дикетогидриндилиден-дикетогидриндамин [14]. [c.77]

При взаимодействии нингидрина с пролином и оксипролином возникает желтоватая окраска Пирролидонкарбоновая кислота и дикето-пиперазин не дают никакой окраски. Реакция с нингидрином удается только, если раствор аминокислоты нейтрален. Положительную реакцию с нингидрином дают все белковые соединения и продукты расщепления белков, амины (вероятно, в соединениях с слабыми кислотами), аминоальдегиды, производные мочевины, аммониевые соединения органических кислот, некоторые неорганические соединения (сероводород, тиосульфат в присутствии ионов аммония), а также альдегиды и сахара, обладающие свойствами восстановителей. Последние образуют весьма характерные красноватые окраски, пригодные для отличия их по этому признаку. Для проведения реакции с окрашенными жидкостями (коричневыми гидролизатами) в качестве экстрагента применяют амиловый спирт. Исследуемый раствор смешивают с раствором нингидрина как указано выше, смесь слабо кипятят 1—2 мин, охлаждают и встряхивают с 2 мл амилового спирта. В присутствии аминокислот слой амилового спирта приобретает сине-фиолетовую окраску. В присутствии альдегидов или соединений с кетостроением амиловый спирт приобретает желтую окраску или остается бесцветным. [c.705]

Пролин можно определить без предварительного хроматографического разделения реакцией его с нингидрином в сильнокислом растворе [ИЗ]. Рен и Виггелл [114] исследовали недавно модификацию этого метода и показали, что единственной аминокислотой, серьезно мешающей определению пролина, является оксипролин. [c.150]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология