Гидриндантин

Как уже указывалось, степень гидролиза или деструкции белков может контролироваться несколькими методами [41]. Вероятно, наиболее общей является реакция, основанная на взаимодействии а-аминокислоты с нингидрином с выделением аммиака, углекислого газа и альдегида и конечным образованием соединения, известного под названием фиолетовая Руэмана , и гидриндантина. Механизм этого превращения одинаков для аминов и иминокислот. При реакции с аминокислотами сначала ибра уется компглекс, характерный для первой ступени расщепления по Штреккеру. Последующий электронный сдвиг делает возможным протекание реакции декарбоксилирования и дегидратации с образованием цвиттернона. Гидролиз цвиттериона и реакция с избытком нингидрина приводят к образованию фиолетовой Руэмана П [c.400]

Промежуточный амин может гидролизоваться до свободного аммиака. Для обеспечения максимального развития окраски в растворы нингидрина, предназначенные для количественного анализа, обычно добавляют гидриндантин (восста- [c.213]

Трикетоиндан (HI) в изопропиловом спирте дает [127] гидриндантин (IV). При облучении о-дибензоилбензола (V) в изопропиловом спирте образуется желтый кристаллический продукт [127], который при нагревании дает 1,3-дифенил-гюо-бензофуран (VI). Показано [129], что в противоположность этой реакции о-бензоилбензойная кислота (VII) при облучении в изопропиловом спирте дает дилактон (VIII). Альдегидофталевая кислота ведет себя аналогично [130]. [c.258]

Нингедриновое окрашивание аминокислот и других аминов широко используют в автоматических аминокислотных анализаторах. В смесительную камеру подают 2—4%-ный раствор реактива в смеси (3 1) метилцеллозольва или дн-метилсульфоксида с 4 Л1 ацетатным буферным раствором (pH = 5,5) к раствору добавляют также гидриндантин до концентрации 0,6 г/л (или хлорид олова, хлорид титана). После смешивания элюата с реактивом поток пропускают через капилляр, погруженный в кипящую водяную баню (90—100 С). Фотометрирование проводят при 440 и 570 нм. Чувствительность определения аминокислот — до 10 моль. [c.380]

С обоими этилш синтезами трудно согласовать полуаце-тальную формулу для аллоксантина (XIV) и соответствующую формулу для гидриндантина. [c.188]

Руэман [111] показал, что при обработке в водной среде трикетогидринденгидрата (нингидрин) сероводородом образуется гидриндантин. Гидриндантин растворяется также в кар- [c.24]

Другие модификации нингидринового реагента были описаны Муром и Стейном [11]. По одной из модификаций исключается двухлористое олово, которое добавлялось для образования гидриндантина. В этом случае используют готовый гидриндантин, чтобы предотвратить возможность выпадения солей олова. Блакбурн [34] подробно обсудил химический состав нингидринового и других реагентов на а-аминокислоты, образующих окрашенный продукт (называемый фиолетовая Руэмана), и рассмотрел различные факторы, влияющие на стабильность нингидринового реагента. [c.25]

При использовании гидриндантина для приготовления реагентов могут возникнуть трудности, связа1 йые с й О низкой растворимостью и нестабильностью на воздухе [116]. Розен [И7), Найт [118] и Томас с сотр. [119] описали стабильный и приемлемый для автоматических методов реагент, при приготовлении которого вместо гидриндантина используется цианистый натрий. [c.25]

Киршенбаум [120] использовал в качестве растворителя для нингидринового реагента смесь метилцеллозольв — диметил-сульфоксид (70 30). Для получения полностью растворимой смеси нингидрина и гидриндантина Мур [121] улучшил состав реагента, заменив метилцеллозольв ди] етилсульфоксидоЙ и [c.25]

При реакции (100 °С) нингидрин — гидриндантина и аминокислот образуется двуокись углерода [104]. При попадании пузырьков этого газа в кювету может нарушиться световой поток. Поэтому пузырьки газа, образующ,иеся в результате химической реакции или по другим причинам, должны легко и быстро удаляться. По той же причине необходимо удалять из кюветы и коллоидный осадок, образующийся из солей олова и, возможно, метилцеллозольва (см. обсуждение приготовления нингидринового реагента). Плотность таких коллоидных осадков в отличие от плотности пузырьков газа в некоторых случаях настолько высока, что поток буфера не может вымыть их из кюветы. Поэтому при конструировании кюветы всегда нужно учитывать возможность их загрязнения коллоидными осадками. [c.27]

При приготовлении описанного выше нингидринового реагента нам не раз приходилось встречаться с трудностями. Эти трудности обычно приписывались качеству метилцедлозольва. Важно, чтобы метилцеллозольв не только не содержал следов перекисей (<3 млн. д.), которые мешают протеканию цветной реакции с нингидрином, но и не вызывал помутнения раствора, как это бывает с некоторыми партиями, после контакта с воздухом (особенно если последний попадает при перемешивании нингидринового реагента). При использовании такого недоброкачественного метилцеллюлоза в ходе анализов образуется белый осадок, который удерживается на внутренних стенках трубки реактора и в кюветах колориметра. Этот осадок не похож на гидриндантин, так как он нерастворим в метилцеллозольве, но растворяется в разбавленной кислоте. Для уменьшения образования этого осадка после нингидринного насоса помещают специальный фильтр. [c.55]

При взаимодействии а-аминогрупп с нингидрином (I) развивается фиолетовое окрашивание, связанное с образованием аниона дикетогидриндилидендикетогидриндамина — ДИДА (VII). Начальная стадия реакции [13] включает окислительное дезаминирование аминокислоты (II) с образованием в качестве промежуточного продукта иминокислоты (IV) или кетокислоты (VI), СОг, КНз и альдегида, содержащего на один атом углерода меньше, чем исходная аминокислота. Эта реакция протекает одновременно с восстановлением нингидрина (I) в гидриндантин (III). [c.136]

При конденсации (III) с NH3 образуется ДИДА (VII), обладающий сине-фиолетовой окраской. Указанная схема [13] подтверждается тем обстоятельством, что нингидрин в присутствии восстановителей, превращающих его в гидриндантин (III), быстро реагирует с NH3, образуя (VII). [c.138]

Гидриндантин (ендиол) готовят восстановлением и нингидрина аскорбиновой кислотой. Растворяют 40 г нингидрина в 1 л дистиллированной воды при 90 °С. Растворяют 40 г аскорбиновой кислоты в 200 мл дистиллированной воды при 40 °С. Затем раствор аскорбиновой кислоты вливают в раствор нингидрина при перемешивании. После 30 мин перемешивания и охлаждения гидриндантин отфильтровывают на стеклянный фильтр под вакуумом. Промывают горячей и холодной дистиллированной водой и высушивают в вакуумном эксикаторе над фосфорным ангидридом. [c.267]

Реактивный раствор (свежеприготовленный). Растворяют 2 г нингидрина и 0,3 г гидриндантина в 75 мл этилцеллозольва и добавляют 25 мл буферного раствора. [c.267]

Для проявления хроматограмм опрыскиванием пригодны реактивы а) 0,1%-ный раствор нингидрина в я-бутаноле, насыщенном 0,5 н. цитратным буфером (pH 5,5), и б) 0,1%-ный раствор нингидрина в этаноле, чистом или содержащем 5%-ный раствор коллидина. Хорошие результаты получаются при погружении хроматограмм (методика, описанная Хейнсом) в смесь, состоящую из 125 мг нингидрина в 25 мл ледяной уксусной кислоты, 20 мл коллидина и 955 мл этилацетата. Раствор должен быть свежеприготовленным для фенольных хроматограмм к реактиву перед использованием добавляют немного гидриндантина. В спиртовом растворе нингидрина, содержащем коллидин в виде свободного основания, пятна аминокислот окрашиваются в различные цвета в зависимости от времени развития окраски и температуры. Для этой цели рекомендуют также 5%-ный раствор циклогексиламина или дициклогексиламина [27]. [c.24]

Гидриндантин готовят следующим образом. Раствор аскорбиновой кислоты (80 г кислоты в 400 мл воды) при 40° добавляют к раствору нингидрина (80 г нингидрина в 2 л воды) при 90°. Смесь оставляют стоять в течение 30 мин и затем охлаждают до комнатной температуры. Гидриндантин отфильтровывают, тщательно промывают водой и высушивают над Р2О0 в вакуум-эксикаторе, защищенном от света. [c.75]

Нингидриновый реактив изготовляется добавлением 250 мл буферного раствора pH 5,5 к раствору 20 г нингидрина и 3 г гидриндантина в 750 мл метилцеллосольва (монометиловый эфир этилен-гликоля, перегнанный над ферросульфатом и проверенный на отсутствие перекисей). Раствор нингидрина хранят в темной распределительной склянке, соединенной, как показано в верхней части фиг. 34, с резервуаром азота. При комнатной температуре раствор довольно нестоек, и его можно использовать не более чем в течение двух недель. Для анализа к вытекающим фракциям объемом [c.77]

Этот метод позволяет проводить одновременно анализ 50 фракций. После развития пурпурной окраски фракции разбавляют 5 мл смеси этанол—вода (1 1), охлаждают перед электрическим вентилятором и встряхивают в течение 30 сек для окисления большей части оставшегося гидриндантина. Измеряют величины экстинкции при 570 ммк (и 440 ммк для пролина и оксипролина). В реакции с нингидрином, изображенной на стр. 78, все аминокислоты, за исключением цистеина, дают один и тот же окрашенный продукт — дикетогидриндилиден-дикетогидриндамин [14]. [c.77]

Приготовление гидриидантипа. К раствору 80 г нингидрина в 2 л воды, нагретой до 90°, добавляют при перемешивании 80 г аскорбиновой кислоты в 400 мл воды, нагретой до 40°. Через 30 мин полученный раствор охлаждают водопроводной водой. Гидриндантин отфильтровывают, промывают водой, сушат до постоянного веса над пятиокисью фосфора в вакууме без доступа света и хранят в банке из темного стекла. Выход гидриндаитина составляет примерно 75 г. [c.777]

Нингидриновый реактив. 20 г нингидрина и 3 г гидриндантина растворяют в 750 мл не содержащего перекисей метилцеллозольва (при добавлении к цел-лозольву смеси реактивов 1 и 2 и 4%-ного раствора [c.133]

ИОДИСТОГО калия допустимо появление лишь светло-желтой окраски). Раствор не следует долго встряхивать или энергично перемешивать, так как при этом гидриндантин будет окисляться воздухом. Затем к раствору добавляют 250 мл реактива 1, в раствор пропускают азот в течение нескольких минут и полученный раствор хранят в темной склянке в атмосфере азота. Реактив пригоден в течение 1 недели. Многие исследователи считают более удобным каждый раз получать свежую порцию реактива, избегая хлопот, связанных с пропусканием азота в раствор реактива и его хранением. Для облегчения приготовления реактива можно сделать таблицу, показываюшую необходимые количества компонентов для получения различных объемов реактива. [c.134]

Методика. Для фракций объемом 1 или 2 мл берут 1 мл реактива 2. Нейтрализации не требуется, если при доведении pH до величины 4—6 применяют менее 1 мл 0,1 н. раствора едкого натра или соляной кислоты. После добавления реактива раствор осторожно перемешивают в пробирке, неплотно закрывают ее пробкой, нагревают 15 мин на кипящей водяной бане и немедленно охлаждают. В пробирку добавляют 5 мл 50%-ного спирта и энергично перемешивают содержимое встряхиванием, чтобы окислить воздухом оставшийся гидриндантин (это обеспечивает в дальнейшем большую стабильность базовой линии). Затем измеряют поглощение раствора при 570 нм, за исключением тех случаев, когда пептид имеет на Ы-конце пролин или оксипролин в этом случае поглощение измеряют при 440 нм или при другой длине волны. В качестве стандарта используют раствор лейцина с концентрацией 50 мкг мл-, 0,2 мл этого раствора дают величину поглощения в 0,2 единицы оптической плотности. [c.134]

С 1951 г. введен ряд модификаций нингидринового реагента некоторые из этих модификаций удовлетворяют требованиям отдельных методик разделения аминокислот, другие — улучшают колориметрию. Метод Смита [96] отличается главным образом тем, что нингидрин, хлористое олово и буферные растворы прибавляют отдельно, а не в виде одного реагента. Мур и Стейн [4] изменили состав своего прежнего реагента, увеличив буферную емкость в пять раз прибавлением раствора ацетата натрия (pH 5,5). Это устранило необходимость отдельной нейтрализации фракций. Вместо хлористого олова в нингидриновый реагент был введен гидриндантин во избе- [c.145]

Нингидрин, гидрат индантриона (VI), находит весьма широкое применение как реактив на а-аминокислоты, полипептиды и белки и в последнее время обычно получается окислением индандиона селенистой кислотой [24, 25]. Метод довольно долог и кропотлив, не легко освободиться и от следов коллоидного селена, образующегося во время реакции. Казалось возможным получить нингидрин и из нитроиндандиона, который, как известно, может существовать в форме нитроновой кислоты, а последние при окислении [26] переходят в соответствующие кетоны. При окислении нитроиндандиона действительно можно констатировать образование нингидрина, но выхода очень малы. При нагревании нитроиндандио-на в ледяной уксусной кислоте получается гидриндантин (VII) [3]. [c.87]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология