Бактериофаг лямбда

Рис. 15.12. Сайт-специфическая рекомбинация, представленная на примере интеграции бактериофага лямбда в хромосому клетки-хозяина, С помощью специфического белка кольцевая ДНК фага своим участком att В присоединяется к участку att X на бактериальной ДНК, расположенному между генами Ыо и gal затем в результате разрыва и перекрестного воссоединения двойных цепей ДНК фаг включается в хромосому. (См. также рис. 4.14.)

В результате биохимического и генетического изучения белка-репрессора лактозного оперона. репрессора бактериофага лямбда, а также других регуляторных белков у бактерий была сформулирована общая модель регуляции транскрипции у прокариот. Предполагалось, что сайт-специфические белки либо ингибируют, либо стимулируют транскрипцию какого-либо гена, присоединяясь к ДНК рядом с промотором-участком, с которого РНК-полимераза начинает синтез РНК. Считали, что изменение в положении таких регуляторных белков по отношению к ДНК (связывание или отсоединение) включает и выключает гены. [c.183]

Сайт-специфическая рекомбинация. Этот процесс осуществляется независимо от гомологичной рекомбинации, т.е. возможен и у мутантов гес . Он состоит в том, что короткая двухцепочечная ДНК встраивается в определенном месте в длинную двойную спираль при этом меньший партнер теряет свою автономность. Типичным примером сайт-специфической рекомбинации может служить интеграция бактериофага лямбда (X) (рис. 4.14). [c.454]

Рис. 9-11. Специфическая последовательность ДНК, узнаваемая сго-белком бактериофага лямбда. Выделенные цветом нуклеотиды в этой последовательности расположены симметрично, что позволяет половине димерного белка распознавать каждую половину данного сайта.

Карта бактериофага лямбда изображена в виде параллельных линий, соответствующих двум цепям ДНК. Верхняя цепь транскрибируется в ле- [c.169]

Рис. 5-49. Структуры, которые наблюдались и не наблюдались в реплицирующихся молекулах ДНК бактериофага лямбда (ответ

На примере бактериофага лямбда можно убедиться в том, что [c.204]

Некоторые бактерии несут вирусы (умеренные бактериофаги), которые либо встроены в хромосому клетки-хозяина и реплицируются вместе с ней, либо существуют в клетке автономно и реплицируются самостоятельно, что в конечном итоге приводит к лизису и гибели бактерий. Один из таких умеренных бактериофагов — бактериофаг лямбда (X). При инфицировании чувствительных бактерий . соИ он инъецирует в бактериальную клетку свой геном, состоящий из линейной двухцепочечной ДНК размером 45000 пар оснований (рис. 41.5). В зависимости от физиологического статуса микроорганизма дальнейшее развитие фага может протекать либо по лизогенному пути, который заключается в интеграции фаговой ДНК с хозяйским геномом и сохранении [c.113]

Рис. 9-19. Схема комплекса ДНК—белок, образуемого интегразой фага лямбда, ферментом, осуществляющим встраивание ДНК бактериофага в хозяйскую хромосому Е. соИ. Этот комплекс катализирует сайт-специфическую рекомбинацию, разрывая и воссоединяя спирали ДНК бактериофага лямбда и бактерии по определенным участкам, называемым сайтами прикрепления (см. рис. 5-66). (С изменениями по Е. Ri het

На рис. 5-16 изображен ряд гипотетических реплицирующихся молекул с участками одноцепочечной ДНК, показанными тонкими линиями. В одном раннем и очень важном электронно-микроско-пическом исследовании репликации у бактериофага лямбда некоторые из этих структур были действительно обнаружены и встречались часто, а другие никогда не наблюдались. [c.24]

Д. Когда бактериофаг лямбда заражает клетку Е. соИ, он обычно [c.34]

В. Интегрирование ДНК бактериофага лямбда в геном бактерий с помощью сайт-специфической рекомбинации происходит гораздо чаще, чем транспозиция. Как отличались бы результаты от рассмотренных выше, если бы вы использовали мутант бактериофага лямбда, который не может реплицироваться, но может встраиваться [c.40]

Pi . 10-21. Рестрикционная карта для клона бактериофага лямбда, несущего два гена U2 (задача 10-32). [c.187]

B. С учетом того, что 2 нг клонированной ДНК дают полосу, равную по интенсивности той полосе, которую дают 10 мкг геномной ДНК (дорожки 11 и 12), рассчитайте, сколько копий гена U2 присутствует в геноме человека. (Размер ДНК в клоне бактериофага лямбда составляет 43 т.п.н., а в геноме человека содержится 3 млн. т. п. н.) [c.188]

Для определения трехмерной структуры белка обычно необходим дифракционный рент те и о структур ный анализ больших кристаллов, получение которых часто представляет собой нелепою задачу. Один из первых регуляторных белков, изученных таким методом - сго-белок бактериофага лямбда. Это небольшой белок (66 аминокислотных остатков), который не имеет цинковых пальцев , однако, связывается с кластером специфических последовательностей ДНК, каждая из которых содержит [c.104]

Бактериофаги, способные включаться в бактериальные хромосомы, называются лизогенизируюгцими бактериофагами. Наиболее полно изучен среди них бактериофаг лямбда (> ), о ферменте которого, лямбда-интегразе, мы уже говорили. Когда бактериофаг X заражает подходящую клетку Е. соИ, он обычно размножается в ней и образует несколько сотен дочерних фаговых частиц, которые выходят наружу в момент лизиса клетки это так называемый литический путь инфекции. Гораздо реже линейные инфицирующие молекулы ДНК замыкаются в кольцо и включаются в кольцевую хромосому бактерии-хозяина путем сайт-специфической рекомбинации (см. разд. 5.4.7). По заверщении такой интеграции образовавшаяся лизогенная бактерия, несущая хромосому бактериофага X в виде профага, размножается, как обычно, до тех пор, пока на нее не воздействует какой-нибудь повреждающий внешний [c.319]

Рис. 9-13. Семейство димерных ДНК-связывающих белков. Эти регуляторные белки работают в бактериальных системах репрессор лямбда и сго-белок контролируют экспрессию генов бактериофага лямбда а белок активатор катаболизма (САР) регулирует экспрессию ряда генов Е. соИ, которые могут включаться лишь в отсутствие глюкозы. В каждом случае рентге-ноструктурный анализ выявил наличие двух копий

Рис. 9-20. Исключение бактериофага лямбда из хромосомы бактерии контролируется носредством кооперативного и конкурентного взаимодействия межд> сайт-специфическими ДНК-связывающими белками. Реакция катализируется интегразой фага лямбда и является противоположной по своему действию сайт-специфической рекомбинации, показанной на рис. 9-19. А. Общая схема реакции и некоторые участвующие в ней сайты связывания белков (указаны не все сайты). Для исключения необходимы разрыв и воссоединение двойной спирали ДНК в сайтах рекомбинации I и 2 при этом образуется кольцевая хромосома фага лямбда. Int-интеграза фага лямбда. Xis-эксцизионаза фага лямбда, а 1HF и FIS -белки, образуемые бактериальной клеткой-хозяином. Б. Активация исключения белком FIS указанные стадии, по-видимом>, имеют место при низких концентрациях белков Int и Xis. Как показано, ряд белков при связывании сильно изгибают ДНК. Хотя белок Int катализирует реакцию

Рис. 5-36. Образование смеси гетеродуплексов и гомодуплексов в результате денатурации и ренатурации двух различных геномов бактериофага лямбда, содержащих ТпЮ (задача 5-44). Фаговая ДНК изображена линиями, а Тп10 в виде прямоугольников. Мутационные различия между двумя элементами ТпЮ показаны белыми и черными сегментами.

Вы изучаете транспозон ТпЮ, существующий в прокариотических клетках, и придумали изящный эксперимент, с помощью которого можно выяснить, реплицируется ли ТпЮ во время транспозиции или перемещается безотносительно к репликации ДНК. Ваша идея основана на ключевом различии между этими двумя механизмами если транспозиция нерепликативная, то должны перемещаться обе родительские цепи ТпЮ, если же транспозиция репликативная, то должна перемещаться только одна родительская цепь (рис. 5-35). Вы собираетесь пометить отдельные цепи денатурированными цепями из двух различных ТпЮ. Чтобы эффективно вводить эти гетеродуплексные ТпЮ в бактерии, вы используете ДНК бактериофага лямбда, содержащую ТпЮ. Такая ДНК может быть приготовлена in vitro, а затем упакована в капсиды, чтобы образовался фаг, способный инфицировать клетки. Вы используете неактивный (по причине других мутаций) фаговый геном, так что он не может реплицироваться или встраиваться и в конце концов разрушается таким образом, вкладом этого фагового генома можно пренебречь. [c.39]

Таким образом, доля синих, белых и секторных колоний была бы такой же, как в случае нерепликативной транспозиции. Действительно, в реальных исследованиях, проведенных для выяснения механизма транспозиции ТпЮ, в качестве положительного контроля использовали интегрируемую (но нереплицирующуюся) форму бактериофага лямбда. В обоих экспериментах были получены одинаковые результаты. [c.306]

Г. Спираль, построенная из субъединиц (например, молекул миозина), не имеет в своей структуре каких-то внутренних свойств, которые определяли бы ее длину. Средняя длина спирали зависит от общей концентрации субъединиц и относительных скоростей сборки и разборки на концах, однако даже в постоянных условиях будет наблюдаться заметная вариабельность длины. Замечательное однообразие толстых филаментов по длине в поперечнополосатых мыщцах обусловлено, по-видимому, еще чем-то, кроме самих молекул миозина например, некой связанной с миозиновым филаментом молекулой, которая и определяет его длину. Действительно, подобные молекулы известны для некоторых других спиральных биологических структур с фиксированной длиной. В частности, длина капсида вируса табачной мозаики и хвоста бактериофага лямбда (оба они имеют спиральную структуру) определяется как раз такими молекулами, идущими от одного конца спирали до другого. [c.436]

Наиболее подробно данное явление изучено для бактериофага лямбда (Я). Природным хозяином фага Я является кишечная палочка Es heri hia oli К12. Фаг, выросший на этом штамме, обозначают Я К. Другим хозяином фага Я может быть штамм Е. соН С. Фаговое потомство, полученное на этой бактериальной культуре, обозначается Я - С. В 1953 г. Г. Бертани и Дж. Уэйга обнаружили, что фаг Я С размножается в клетках Е. соИ К12 с очень низкой эффективностью, в то время как на Е. соН С — хорошо. [c.13]

Впервые сайт-специфические белки, связывающиеся с ДНК, были обнаружены у бактерий. С помощью генетического анализа у этих микроорганизмов удалось доказать существование регуляторных белков, таких как репрессор 1ас-оперона, репрессор бактериофага лямбда и сго-белок. Эти белки были выделены при последовательном фракционировании клеточных экстрактов на хроматографических колонках, а специфически связывающие их участки ДНК определены методом футприн-тинга (см. разд. 4.6.6). Аналогичными методами были выделены и охарактеризованы пфвые сайт-специфические ДНК-связывающие белки у эукариот Т-антиген вируса ЗУ4о, фактор транскрипции ТРИМ и рецептор стероидного гормона. [c.103]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.106 , c.109 , c.204 , c.311 ]

Биохимия человека Т.2 (1993) -- [ c.113 , c.118 ]

Биохимия человека Том 2 (1993) -- [ c.113 , c.118 ]

Молекулярная биология клетки Сборник задач (1994) -- [ c.34 , c.186 , c.187 ]

Молекулярная биология клетки Т.3 Изд.2 (1994) -- [ c.106 , c.109 , c.204 , c.311 ]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология