Культура клеток на покровных стеклах

Более того, при работе с культурами клеток существенные результаты могут быть получены при использовании очень небольшого количества клеток. Эксперименты, требующие для выяснения того или иного вопроса использования 100 крыс или 1000 человек, могут быть с равной статистической достоверностью поставлены на 100 культурах на покровных стеклах. Если каждую клетку рассматривать как независимый объект эксперимента, то одна культура на покровном стекле даст более достоверный ответ, чем целая клиника, полная больных. Это является важным преимуществом, когда дело касается человека, и, кроме того, снимает многие этические проблемы, возникающие при необходимости использовать для эксперимента большую группу животных, в ряде случаев на конечных стадиях эксперимента все же возникает необходимость в опытах на целых животных, однако ничто не мешает при этом использовать клеточные культуры в предварительных исследованиях. [c.9]

Выявление кератина в клетках монослойной культуры на покровном стекле или в клетках, осажденных центрифугированием на предметное стекло, проводится следующим образом. [c.151]

На предметное стекло наносят небольшую каплю 40%-ного раствора формалина. Петлей в нее вносят культуру микроба. Формалин убивает клетку и разрыхляет оболочку. Через 5 мин в эту же каплю добавляют небольшую каплю метиленового синего, а спустя 10 мин каплю Судана III (растворимого в жире красителя, индикатора жироподобных веществ). Образовавшуюся общую каплю накрывают покровным стеклом, удаляют избыток жидкости фильтровальной бумагой и микроскопируют препарат с иммерсией. Цитоплазма [c.52]

Готовят влажные препараты из молодых бульонных культур (т. е. находящихся в экспоненциальной фазе роста), выращенных при двух различных температурах (например, 37 и 20°С). В некоторых случаях на средах, содержащих глюкозу, подавляется образование жгутиков [15]. Методы исследования с помощью светового микроскопа описаны в разд. 3.3.4. Влажные препараты изучают сразу после приготовления. При исследовании анаэробов лучше всего рассматривать среднюю часть препарата, а при исследовании аэробов — области около воздушных пузырьков и у края препарата. Не все клетки должны быть подвижными. Для того чтобы штамм бактерий был признан подвижным, необходимо обнаружить хотя бы одну клетку, меняющую свое положение по отношению по меньшей мере к двум другим клеткам [12]. Примечание подвижность следует отличать от броуновского движения (беспорядочного покачивания клеток) и от пассивного движения за счет потоков, образующихся под покровным стеклом. [c.32]

Для многих биохимических исследований, в том числе для инкубации клеток с радиоактивными изотопами в присутствии ядов, антиметаболитов, гормонов и так далее, требуется небольшое количество клеток. Эти клетки могут быть выращены на дне стеклянных флаконов для сцинтилляционных счетчиков, на стеклянных покровных стеклах диаметром 1,5 см или даже в лунках пластинок для микротитрования (см. разд. 1.3.7 и табл. 3.1). Последний метод позволяет получать одновременно 96 одинаковых культур, но объем среды в каждой лунке не превышает 0,25 мл. [c.32]

Посеять клетки с плотностью 2,5 10 на чашку диаметром 35 мм. Предварительно в чашку поместить покровные стекла. Инкубировать культуру с Н-тимидином (5 мкКи на чашку) в течение 30—46 ч. [c.118]

Капельный метод Линднера используют при работе с крупными микроорганизмами дрожжами, мицелиальными грибами, водорослями. Порядок работы следующий. Накопительную культуру разводят в стерильной среде с таким расчетом, чтобы в небольшой капле были одиночные клетки микроорганизмов. Затем на поверхность стерильного покровного стекла стерильным стальным пером наносят ряд капель приготовленного разведения. Готовят препарат висячая капля . Нанесенные на покровное стекло капли просматривают под микроскопом и отмечают те, в которых обнаружена только одна клетка. После этого препарат помещают в термостат во влажную камеру, которой обычно служит чашка Петри с увлажненной фильтровальной бумагой на дне. Череа 12—24 ч отмеченные капли вновь микроскопируют. Те капли, в. которых наблюдается образование микроколоний, осторожно снимают с покровного стекла кусочками стерильной фильтровальной бумаги и переносят в пробирки со стерильной средой. [c.79]

Микроорганизмы для наблюдения в СЭМ можно подготовить на покровном стекле. Культуру или промытые фосфатным буфером клетки наносят на осколок обезжиренного покровного стекла и высушивают на воздухе. Стекло помещают на 1 ч в глутаровый альдегид (2,5%-ный раствор в фосфатном буфере, 0,1 н., pH 7,2) и промывают затем фосфатным буфером. Далее обезвоживают клетки, последовательно помещая стекла в водные растворы этанола (20, 25, 50, 70, 96 100°) на 15 мин в каждый и в амилацетат или чистый ацетон на 1 ч. Досушивают в критической точке. Сухие мазки готовы для напыления и просмотра в СЭМ. [c.115]

Через день после заражения клетки на покровных стеклах фиксируют для определения числа инфицированных клеток методом иммунофлуоресцентного окрашивания на внутриядерный Т-антиген (см. разд. 6.4). Оставшиеся две культуры трипсинизируют следующим образом [c.245]

Для культуры тканей пластиковая посуда должна использоваться лишь в том случае, если исследователь совершенно уверен, что она нерастворима в органических растворителях, используемых для препарирования ткани. Этот способ является наилучшим для обращения со многими культурами клеток тканей млекопитающих, и такие клетки относительно просто прикреплять на стеклянные покровные стекла, покрытые монослоем полилизина [324]. Метод покрытия может быть использован н для других клеток, таких, как микроорганизмы и однокле- [c.223]

В работе [367] показано, что отдельные клетки культуры ткани мохшо высушить в эксикаторе с помощью фреона-113 при комнатной температуре. Клетки, укрепленные на покровных стеклах, фиксируются и проходят обезвоживание в 100%-ном этаноле, а затем проходят через постепенные изменения концентрации фреона-113 вплоть до 100%- Образцы, погруженные в фреон-113, переносятся в эксикатор, содержащий Drierite, и откачиваются до давления 3 Па (3 10 Торр). Жидкая фаза фреона-113 испаряется в течение нескольких минут, оставляя клетки, ультраструктура которых сравнима со структурой клеток, высушенных методом сушки в критической точке (рис. 11.22). Дальнейшие исследования должны показать, может ли эта методика быть эффективно использована для кусочков тканей. В работе [368] разработан метод, который позволяет высушивать образцы от этанола в струе сухого аргона без использования сушки в критической точке. Методика дает столь же хорошие результаты, как и другие методы, хотя на чувствительных образцах, таких, как мерцательный эпителий, метод сушки в критической точке дает лучшие результаты. [c.250]

Для изолирования культур используют также метод Линдне-ра. Согласно этому методу на покровное стекло кончиком пера наносят ряды капель культуры различного разведения и рассматривают в микроскоп каждую каплю. Каплю, где находится только одна клетка, с помощью кусочка стерильной фильтровальной бумаги переносят в стерильную среду. Отдельную клетку из препарата под микроскопом можно изолировать манипулятором. [c.67]

Накопительную культуру разводят в стерильной среде с расчетом, чтобы в одной капле были единичные клетки Затем на поверхности стерильного покровного стекла готовят висячую каллю, нанося ее на стекло стальным пером, и микроскопируют ее. При этом отмечают висячую каплю, в которой обнаружена только одна клетка, и помещают ее в стерильную чашку Петри, на дне которой находится увлажненная фильтровальная бумага. После 12—24-часовой инкубации в термостате отмеченный препарат микроскопируют. Если в капле произошло размножение клетки, ее осторожно снимают с покровного стекла кусочком стерильной фильтровальной бумаги и переносят в пробирку со стерильной жидкой средой. [c.79]

Для того чтобы изолировать одну клетку, небольшую каплю взвеси исследуемой культуры наносят на стерильное покровное стекло. Край капли устанавливают в середину поля зрения микроскопа и рядом с ней наносят нз пипетки каплю питательного раствора. Микропетлей набирают питательный раствор и подводят ее к капле с микроорганизмами, захватывают у края одну клетку, переносят в питательный растюр и выращивают чистую культуру. [c.79]

Процедура энуклеации, описанная выше, основывается на методе, предложенном Виглером и Вайнштейном [39]. Мы использовали этот метод, поскольку он подходит для клеток, растущих на подложке, и для суспензионных культур. Большинство наших коллег предпочитали следовать другой методике, которая была предложена Прескоттом [40]. В этом случае клетки культивируют прикрепленными к покровным стеклам или к пластиковой подложке. Ее помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в среде, содержащей цитохалазин В. [c.21]

Мелкие металлические инструменты петли, иглы, пинцеты, ножницы, шпатели стерилизуют прокаливанием в пламени (т. е. нагреванием докрасна) непосредственно перед использованием. На пламени кратковременно обжигают предметные и покровные стекла, стеклянные шпатели и палочки, фарфоровые ступки и пестики, горлышки колб, пробирок, бутылок, а также ватные пробки при пересевах культур и разливе сред. В пламени погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганиз мов. [c.38]

Монослойные культуры. Клетки кроветворной и лимфоидной ткани, а также крови помещают в плоскодонные сосуды или в пробирки с покровными стеклами и культивируют в синтетической среде с добавлением сыворотки или без нее. Наблюдения проводят за прикрепившимися клетками, растущими по поверхности дна сосуда. В монослойных культурах могут быть, в частности, изучены пролиферация этих клеток, их движения, фагоцитарная активность и т. д. Как правило, в таких культурах в течение длительного времени (месяцы) наблюдается рост гистиоцитов н фнбробла-стов без поддержания кроветворения. [c.12]

Культуру клеток, выращенную на покровных стеклах, дважды тмывают фосфатным буфером (pH 7.2), клетки фиксируют 10 мин [c.115]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология