Фенилтиогидантоиновое производное

Для тонкослойной хроматографии фенилтиогидантоиновых производных аминокислот в качестве сорбента использовали также силикагель, а в качестве растворителей системы ксилол — метанол (80 10) и гептан — дихлорэтан — пропионовая кислота (45 25 30) [186]. Проявление велось при помощи 1,7%-ного раствора нингидрина в смеси метанол — коллидин — уксусная кислота (15 2 5). Этим методом можно разделять фенилтиогидантоины, имеющие близкие значения Rf. [c.115]

Фенилтиогидантоиновые производные аминокислот могут быть разделены на тонких слоях силикагеля в системах растворителей сначала —н-гептан — пропионовая кислота — дихлорэтан (58 17 25), затем — [c.115]

Таблица 24. Значение Rf фенилтиогидантоиновых производных аминокислот

Тонкослойная хроматография фенилтиогидантоиновых производных использована для анализа пептидов [191]. [c.117]

Необходимо отметить, что анализ производных аминокислот в тонком слое приблизительно в 10 раз чувствительнее, чем хроматография их на бумаге. Используя оптимальное зернение силикагеля в пределах 2— 5 мк и ограничивая пробег растворителя до 4—5 см, можно резко (в 5—10 раз) улучшить чувствительность определения фенилтиогидантоиновых производных аминокислот [192]. [c.117]

В работе [73] содержится утверждение, что для оптимизации разделения таких сложных образцов, как, например, смесь 20 фенилтиогидантоиновых производных аминокислот, необходима одновременная оптимизация многих параметров. Однако авторы работы [73] оптимизировали величину pH отдельно, перед началом полной оптимизации трех параметров, два из которых изменялись непрерывно, а один — дискретно. [c.271]

К числу таких веществ относятся нуклеиновые основания, нуклеотиды и олигонуклеотиды, а также фенилтиогидантоиновые производные аминокислот (ФТГ-АК). Удобно наблюдать не само поглощение, а ослабление флюоресценции добавленного в сорбент флюорогена в местах расположения пятен вещества, пр исходящее в результате поглощения ими коротковолнового УФ-света, которым освещают пластинку. При визуальном наблюдении или на фотографии в лучах видимого света вещества обнаруживаются в виде темных пятен на светлом флюоресцирующем фоне. Метод позволяет обнаруживать до 0,5 мкг олигонуклеотидов в пятне и широко исполь- [c.480]

Используя различные системы растворителей, на слоях полиамида марки биУ254 удается добиться разделения одномерной хроматографией почти-всех фенилтиогидантоиновых производных [189] (табл. 24). [c.116]

Ванг и сотр. [715] количественно анализировали ДНФ-ами-яокислоты после элюции их 1 %-ным раствором бикарбоната натрия с полиамидного слоя. Определение концентрации производили снектрофотометрически при 360 нм. Патаки и Ванг [586] предложили определять количество аминокислот в виде их дансил-, ДНФ- или фенилтиогидантоиновых производных путем измерения флуоресценции пятна на хроматогралше. При этом чувствительность метода значительно выше в случае применения полиамидных слоев по сравнению с силикагелем. [c.127]

НОГО поведения найти очень легко. Например, на рис. 6.8 представлены зависимости удерживания фенилтиогидантоиновых производных 23 аминокислот при ОФЖХ от состава подвижной фазы, представляющей смеси ацетонитрила с водой с небольшим содержанием тетрагидрофурана (3%). Характер изменения удерживания этих соединений при изократическом и градиентном элюировании был исследован Коэном и др. [10]. [c.324]

Свободные аминогруппы, которые содержатся только на М-кон-цах белковых цепей и в остатках лизина (е-аминогруппа), обнаруживают, добавляя к белку фенилизотиоцианат (ФТЦ-метод) или динитрофторбензол (ДНФБ-метод.) При добавлении к белку фенил-изотиоцианата образуются фенилтиогидантоиновое производное концевой аминокислоты и укороченный пептид с новой концевой аминогруппой. С помощью хроматографии на бумаге идентифицируют фенилтиогидантоиновое производное, а оставшийся пептид снова обрабатывают фенилизотиоцианатом. Таким образом можно определить последовательность до десяти аминокислот дальнейшее определение аминокислот затрудняется увеличением количества побочных продуктов. [c.289]

В работе [54] описано разделение гидролизата полипептидов на колонке с ультрасфер-0В5. Аминокислоты предварительно превращали в фенилтиогидантоиновые производные, которые в элюате обнаруживали по поглощению при 254 нм. Из представленной на рис. 2.3 типичной хроматограммы видно, что все 25 компонентов смеси хорошо разделяются за 32 мин. [c.45]

УДФ — уридиндифосфат УМФ — уридинмонофосфат УТФ — уридинтрифосфат ФАД и ФАДНг — окисленный и восстановленный флавинадениндинуклеотид ФДНБ — фтординитробензол ФДТ — фотодинамическая терапия ФИТЦ — фенилизотиоцианат ФКУ — фенилкетонурия ФМН и ФМНН2 — окисленный и восстановленный флавинмононуклеотид ФС — фотосенсибилизатор ФТГ-АК— фенилтиогидантоиновое производное аминокислоты Ц — цитозин [c.13]

Однако уже сообщалось [22, 23], что обнаружить иодированные аминокислоты в N-концевом положении тиреоглобулина свиньи, очищенного на ДЭАЭ-целлюлозе, как без метки, так и меченного in vivo с помощью 1 , не удалось. С помощью количественного метода Эдмана [36, 37] из незащищенных N-концевых аминокислот в тиреоглобулине удалось обнаружить только глицин, аспарагиновую кислоту и аспарагин. Эти остатки содержатся в примерном соотношении 2 моля аспарагиновой кислоты (плюс аспарагин) и 1 моль глицина на моль тиреоглобулина [23] ). В ходе этой работы было найдено, что обессоливание белка необходимо проводить с помощью кратковременного диализа или фильтрацией через сефадекс Г-25 при длительном обессоливании в исследуемых экстрактах образуется фенилтиогидантоиновое производное аланина или других аминокислот в количествах, достигающих молярного эквивалента, а в некоторых случаях значительно превышающих его. По-видимому, это объясняется действием следовых примесей протеиназы, активной при нейтральном значении pH. Результаты опытов, которые подтверждают эту точку зрения, представлены в табл. 2. [c.221]

В общих чертах стратегия Сенгера сохранила свое значение и до наших дней, однако за истекшие десятилетия были разработаны два новых подхода, которые произвели революцию в определении первичной структуры полипептидов (белков). Первый подход основан на разработанной Эдманом в 1967 г. автоматической процедуре последовательного отщепления и идентификации N-кoнцeвыx аминокислотных остатков в виде их фенилтиогидантоиновых производных. Второй подход связан с методом, разработанным Сенгером и, независимо, Максамом и Гилбертом, позволяющим проводить быстрое и однозначное секвенирование гена, кодирующего рассматриваемый белок. Оптимальная стратегия состоит в одновременном использовании обоих подходов. Автоматическая деградация по Эдману, намного более быстрая по сравнению с первоначальным ручным методом Сенгера, тем не менее сильно уступает по скорости методам секвенирования ДНК и сопряжена с рядом трудностей. С другой стороны, секвенирование ДНК не всегда дает однозначную первичную структуру исследуемого белка. Главным [c.38]

Все реакции протекают в пленке раствора, которая покрывает стенки вращающейся цилиндрической камеры. Это облегчает экстракцию и последующее удаление растворителей. Несколько фирм выпускают приборы, позволяющие проводить полностью автоматизированное определение последовательности полипептидов, содержащих до 30—40 остатков (в некоторых случаях до 60 или даже до 80 остатков) за один прогон. В прибор заложена программа последовательного отщепления -по Эдману N-концевых остатков полипептида. После отщепления, выделения и идентификации исходной N-концевой аминокислоты (рис. 4.11) образуется эдмановское производное следующей аминокислоты и т. д. Идентификацию фенилтиогидантоиновых производных производят с помощью жидкостной хроматографии под давлением. На таком приборе можно определить последовательность значительно более длинных участков, чем при секвенировании вручную, причем гораздо быстрее. [c.39]

Рис. 4.11. Образование фенилтиогидантоина из аминокислоты (или N-кoнцeвoгo остатка полипептида). Фенилизотиоцианат р>еагирует с аминогруппами аминокислот или пептидов с образованием фенилтиогидантоиновых производных. Последующая их обработка кислотой в растворителях, не содержащих гидроксильных Групп, приводит к циклизации производных с образованием фенилтиоги-дантоинов. Эта р>еакция, позволяющая идентифицировать N-кoнцeвoй остаток пептида, используется при автоматическом секвенировании полипептидов.

Справочник химика 21

Химия и химическая технология