Иммунохимический анализ принципы

Иммунохимический метод анализа белков основан на реакции специфического взаимодействия антиген-антитело. В этой реакции проявляется одна из элементарных биологических функций макромолекулы белка - способность к специфическому взаимодействию по принципу "узнавания". Нри этом чувствительность метода такова, что для выявления различий между двумя белками достаточно минимальной разницы в первичной структуре полипептида например, замены или перестановки лишь одной аминокислоты в антигенной детерминанте. [c.76]

Принципы иммунохимического анализа [c.105]

Принципы иммунохимических методов анализа описаны в ряде мо-нофафий [86,94] и обзоров [83,95-97] В основном эти методы применяются в клинической медицине и ветеринарии и лищь в последнее десятилетие привлекли внимание аналитиков-экологов [98-101]. В частности, они нашли применение для скрининга полихлорированных диоксинов и [c.297]

Следующим принципом классификации методов ИФА является их разделение по типу проводимых на каждой из иммунохимических стадий реакций. В соответствии с этим все методы можно разделить на две группы — гомогенные и гетерогенные. Если в ходе выполнения анализа все реакции, включая ферментативную стадию, протекают в растворе, то метод является гомогенным. В нем отсутствует стадия разделения образующихся иммунохимических комплексов от свободных, не вступивших в реакцию компонентов. Определение концентрации исследуемого соединения основано на эффекте изменения каталитической активности фермента-метки,-возникающем при комплексообразовании с исследуемым лигандом или центрами специфического связывания. [c.81]

Принцип работы одного из типов анализатора заключается в следующем. Определяемые и меченные ферментом (каталазой или глюкозооксидазой) антигены конкурируют за центры связывания антител, иммобилизованных на мембране, окружающей кислородный электрод Кларка. После проведения иммунохимической реакции отмывают несвязавшиеся на мембране компоненты исследуемой смеси и вводят растворы субстратов фермента. Измеряемый ток на электроде пропорционален концентрации кислорода, поглощаемого (или выделяемого) в ферментативной реакции, осуществляемой связанным с антителами ферментным конъюгатом. Процедура регистрации иммобилизованных антител Позволяет использовать устройство многократно. Время анализа белковых антигенов (альбумин, инсулин) составляет 15 мин при чувствительности 5— [c.111]

В качестве маркеров применяют также ферменты. Основгшная на этом принципе специальная аппаратура для высокочувствительного ферментативного иммунохимического анализа выпускается серийно. В этом случае определяемый компонент метят ферментом. С антителами взаимодействуют как свободные, так и связанные с ферментом соединения, причем активность фермента при образовании комплексов АГ-АТ. как правило, подавляется (иногда усиливается). Концентрацию исследуемого вещества определяют путем измерения активности фермента по отношению к соответствующему субстрату. Чем больше концентрация немаркированного соединения, тем меньше фермента связьшается антителами и тем выше его активность. При этом достигается высокая чувствительность определений, характерная для ферментативных методов анализа. Использование ферментов-маркеров для контроля за ходом иммунохими- [c.299]

Если в пробирку с раствором, содержащим постоянную концентрацию антител и меченого антигена, добавить различные концентрации немеченого антигена, то концентрация комплекса АЬАд, содержащего метку, будет обратно лропорциональ-на концентрации немеченого антигена. Таким образом можно построить калибровочный график зависимости активности Ад АЬ от свободного Ад. Для того чтобы определить- концентрацию комплекса Ад АЬ, его нужно либо отделить от свободного меченого антигена Ад, либо изменить свойства маркера в комплексе с антителами. Оба принципа нашли практическое применение в методах иммунохимического анализа. [c.107]

Иммунология развивается как комплексная медико-биологическая дисциплина. Одно-временно ряд направлений исследований получил ярко выраженный прикладной характер и сформировался в самостоятельные научные направления. Одной из таких ветвей иммунологии является иммунохимиче-ский анализ, использующий иммунологические принципы для выявления и количественного определения различных веществ. В связи с комплексностью иммунологии как научной дисциплины многие термины и понятия стали настолько многозначны, что требуется дополнительное уточнение их смысла в зависимости от области исследований. В данной книге будут использованы такие значения терминов, которые максимально приближены к иммунохимическому анализу. [c.9]

Переход к новым принципам ре11истрации взаимодействия антиген - антитело связан с развитием иммуносенсоров. В основе этих методов лежит идея совмещения в пространстве и времени двух процессов узнавания образа антигена и одновременной модуляции свойств маркера. Одним из таких подходов является метод возбуждения флуоресценции на поверхности кюветы светом, проходящим в специальной оптической среде. Этот метод очень перспективен и создает много возможностей для развития новых методов иммунохимического анализа на основе новых для иммунохимии носителей. [c.6]

Рис. 10-2. Принцип иммунохимического анализа на основе ферментных ка-налов> с применением индикаторных полосок. Публикуется с разрешения издательства (Litman et al., 1983).

Многообразие методов гетерогенного анализа, относящихся к типам I и II, обусловлено возможностью введения ферментной метки как в молекулу антигена, так и в молекулу антитела. Кроме того, для конкретной схемы анализа определяющим является, какой из реагентов—антитело или антиген, использован в иммобилизованном виде для разделения иммунохимических комплексов от несвязавщихся компонентов. Поэтому принцип разделения гетерогенных методов может быть представлен схемой 4.3. [c.83]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология