Иммунохимический анализ

Методы иммунохимического анализа 119 [c.119]

Методы иммунохимического анализа 117 [c.117]

В иммуноферментном анализе используются поли- и моноклональные антитела как по отдельности, так и вместе. Относительная легкость получения поликлональных антител из антисывороток иммунизированных животных в ряде случаев дает возможность пренебречь их гетерогенностью. Однако разработка метода получения моноклональных антител — продуктов гибридных клеток — дала им огромные преимущества в иммунохимическом анализе в связи с уникальными свойствами, выгодно отличающими их от антисывороток. Использование моноклональных антител в иммуноферментном анализе дает возможность работать с практически неограниченным источником антител, однородных по молекулярным и иммунологическим свойствам. С их появлением открылись новые возможности для структурного изучения антигенов. Это связано с тем, что моноклональные антитела, продуцируемые гибридомами, связываются со специфическим участком на поверхности белковой молекулы — антигенной детерминантой и могут быть использованы в качестве селективных зондов на определенные структурные участки. [c.306]

Глава IV МЕТОДЫ ИММУНОХИМИЧЕСКОГО АНАЛИЗА [c.116]

Методы иммунохимического анализа 121 [c.121]

Методы иммунохимического анализа 123 [c.123]

Иммунохимические методы уже очень широко применяют как для фундаментального, так и практического изучения растительных белков. Однако ввиду особых свойств биологического агента и его реакции с белками, а также из-за большого разнообразия технических приемов методика иммунохимического анализа вначале может показаться сложной. Цель этого раздела — описать в общих чертах биологический агент, различные возможности его использования в основных группах ныне принятых методов и указать их применение при изучении растительных белков. [c.89]

В последние два десятилетия наблюдается очень быстрое развитие белковой химии. Методические возможности исследователей значительно расширились благодаря усовершенствованию аналитических методов и главным образом внедрению принципиально новых методов, таких, как хроматография, электрофорез, определение концевых групп и иммунохимический анализ. [c.6]

Иммунные сыворотки, которые готовят для иммунохимического анализа белков, должны преципитировать соответствующие белковые антигены, разведенные не менее чем в соотношении [c.122]

Методы иммунохимического анализа 125 [c.125]

Методы иммунохимического анализа 127 [c.127]

Иммунохимические методы анализа (ИХА) основаны на специфическом связывании определяемого соединения — антигена соответствующими антителами (специфическими белками крови, образующимися в результате иммунологических процессов, направленных на удаление из организма антигенов — генетически чужеродных тел). Иммунохимиче-ская реакция в растворе между антителами и антигенами — сложный процесс, протекающий в несколько стадий. В иммунохимическом анализе [c.113]

Методы иммунохимического анализа 129 [c.129]

Методы иммунохимического анализа 131 [c.131]

Методы иммунохимического анализа [c.133]

Однако наиболее общими являются методы иммунохимического анализа, применимые как в случае прямой экспрессии, так и при синтезе гибридных белков. [c.439]

Методы иммунохимического анализа 135 [c.135]

Методы иммунохимического анализа 137 [c.137]

Методы иммунохимического анализа 143 [c.143]

Методы иммунохимического анализа 145 [c.145]

Методы иммунохимического анализа 149 [c.149]

Методы иммунохимического анализа 157 [c.157]

Методы иммунохимического анализа 159 [c.159]

Методы иммунохимического анализа 163 [c.163]

Иммуноферментвый анализ (ИФА) является в настоящее время одним из наиболее активно развивающихся направлений аналитической биохимии. В этом методе высокая чувствительность определения ферментной метки (менее 10 М) сочетается с уникальной специфичностью иммунохимического анализа. Достижению высокой чувствительности ИФА способствует использование различных инструментальных методов для регистрации активности ферментов — спектрофотометрических, флуориметрических, хеми- и биолюминесцентных, электрохимических. [c.115]

Классические методы иммунохимического анализа основаны на образовании осадка антителами в присутствии антигена. При этом за протеканием этого процесса обычно наблюдают визуально и обнаруживают или полуколичественно определяют относительно высокие концентрации компонентов. Эти методы длительны и трудоемки. [c.114]

Естественно, что обязательным условием скрининга является наличие положительного аналитического сигнала в тех случаях, когда зафяз-няющее вещество присутствует в пробе на уровне ПДК, Так, в качестве примера скрининга можно привести изучение 419 образцов молока на содержание афлатоксинов [20], из которых 19% дали положительную р( ак-цию Более тщательное исследование с помощью хромато-масс-спектрометрии подтвердило наличие афлатоксинов в молоке. В этом плане интерес представляют методы иммунохимического анализа [9,21-23], которые имеют высокую чувствительность и дают положительную реакцию в гфи-сутствии большинства суперэкотоксикантов на уровне 10 - 10 г/л. [c.155]

Надежность результатов скрининга повьш1ается при использовании двух независимых методов, например иммунохимического анализа и тонкослойной хроматофафии (ТСХ). В отдельных случаях, например при [c.155]

В основе иммунохимического анализа лежит взаимодействие генетически чужеродного для живого организма вещества, называемого антигеном (АГ), со специфически связьшаюшимся с ним антителом (АТ) При этом образуется комплекс (АГ-АТ) [c.298]

В качестве маркеров применяют также ферменты. Основгшная на этом принципе специальная аппаратура для высокочувствительного ферментативного иммунохимического анализа выпускается серийно. В этом случае определяемый компонент метят ферментом. С антителами взаимодействуют как свободные, так и связанные с ферментом соединения, причем активность фермента при образовании комплексов АГ-АТ. как правило, подавляется (иногда усиливается). Концентрацию исследуемого вещества определяют путем измерения активности фермента по отношению к соответствующему субстрату. Чем больше концентрация немаркированного соединения, тем меньше фермента связьшается антителами и тем выше его активность. При этом достигается высокая чувствительность определений, характерная для ферментативных методов анализа. Использование ферментов-маркеров для контроля за ходом иммунохими- [c.299]

Авторы данной книги, известные венгерские биохимики Т. Дэвени и Я- Гергей со своими сотрудниками поставили перед собой вполне конкретную задачу — обсудить чаще всего применяемые и хорошо апробированные методы исследования белков, пептидов и аминокислот, а также дать конкретное описание практических приемов, используемых в биохимическом и иммунохимическом анализе. Авторы не стремились привести описание всех разработанных к настояш.ему времени методов, они выделили лишь важные и наиболее распространенные. [c.5]

Число линий преципитации на электрофореграмме зависит от используемой иммунной сыворотки. Например, хорошо себя зарекомендовавшая кроличья антисыворотка к белкам сыворотки человека фирмы Behringwerke (ФРГ) и аналогичная лошадиная антисыворотка института Human (Венгерская Народная Республика) позволяют идентифицировать примерно 20 белковых фракций сыворотки. Принципиальная возможность приготовления антисыворотки практически к любому белку значительно увеличивает применимость иммуноэлектрофореза. Кроме того, приготовив антисыворотки, специфичные к какому-либо одному-единственному белку (или небольшому числу белков), можно в смеси белков исследовать составляющие ее отдельные компоненты. Иммунные сыворотки, предназначенные для иммунохимического анализа отдельных белков плазмы человека, уже имеются в продаже. [c.21]

Существует много вариантов иммунохимического анализа. Одни из наиболее распространенных заключается а следующем. На диске из поливинилхлорида сорбируются немеченые антитела к исследуемому белку. Колонии прямо иа чашке Петри лизируются в мягких условиях, и поливинилхлоридный диск вводится в контакт с поверхностью чашки. Продукты с антигенными детерминантами исходного белка образуют комплексы антиген — антитело с антителами, сорбированными на диске только в местах положения экспрессирующих клонов. Затем диск отмывается от иеспецифи-чески сорбированного антигена и обрабатывается раствором с меченными (радиоактивно, флуоресцентно илн иммуноферментно) антителами. Эти антитела образуют комплекс с антигеном за счет его других антигенных детерминант, в результате чего участки диска, содержашие первый комплекс антиген — антитело, оказываются мечеными (рис. 256). По положению меченых участков на диске легко идентифицировать экспрессирующие колонии. [c.439]

Конформационные перестройки белка при фотоконверсии фитохрома подтвер-ждаются данными иммунохимического анализа, изменениями в спектрах кругового дихроизма в интервале 200-300 нм и появлением разностных спектров поглощения между формами Феео и Ф730 в области 210-300 нм. Вместе с тем конформационные перестройки белка отличаются от денатурационных, поскольку энтропия активации промежуточных стадий фотоконверсии фитохрома невелика (А5 25э.е.). [c.427]

Поведение (-кислого гликопротеипа на ионообменной смоле и отделение его от альбумина и 2-гликопротеина было изучено Шмидом [38]. Из надосадочной жидкости фракции V , полученной фракционированием спиртом при низкой температуре, авторы выделили электрофоретически гомогенный (-кислый гликопротеин с выходом 95%. Исходная смесь белков содержала 35% (-кислого гликопротеипа, 50% альбумина, 12% г-глико-протеипа и 3% -глобулина. Выход (-кислого гликопротеипа был ниже (75%), когда для разделения использовали фракцию VI , но при этом от (-кислого гликопротеина лучше отделялись небольшие примеси, выявлявшиеся при иммунохимическом анализе. [c.71]

Выделение гибридных белков, содержащих -галактозида-зу, было детально описано в предыдущей главе. Для иммунизации мышей требуются относительно небольшие количества антигена, поэтому его можно наработать любым методом. Хотя белковый материал, полученный в результате препаративного ДСН-электрофореза в ПААГ, не всегда обладает такими имму-ногенными свойствами, которые присущи большинству нативных препаратов, он имеет то преимущество, что вызываемый им иммунный ответ обусловлен устойчивыми к денатурации эпитопами. Используемый нами метод выделения нерастворимых гибридных белков приведен в табл. 6.4. Моноклональные антитела к таким эпитопам часто удается с успехом использовать в последующем детальном иммунохимическом анализе белковых антигенов. Наличие абсолютно чистого иммуногена не требует- [c.180]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология