Сефароза клетки

Жировые клетки Инсулин Сефароза 4В 1092 [c.293]

Выделение чистых антител лучше всего проводить на иммуносорбентах, представляющих собой ковалентно сшитый с каким-либо носителем антиген. Обычно носителем служит сефароза. Иммуносорбентом являются также и фиксированные клетки — их применяют для выделения антител к антигенам клеточной поверхности. При этом методе, однако, есть опасность, что при фиксации изменяется антигенная структура клеточной поверхности. [c.119]

Клеточную суспензию интенсивно пипетируют для того, чтобы разбить клеточные агрегаты и отделить клетки от гранул сефарозы. [c.238]

Чаще всего в аффинной хроматографии используются сефарозы, к которым пришиваются реагенты, связывающие мембранные белки, в том числе транспортные (лиганд — транспортируемые вещества), белки-ферменты (лиганд — ингибитор или кофактор соответствующего фермента), гликопротеины (лиганд — конканавалин А), мембраны (лиганд — гормоны), антитела (лиганд — бромциан), целые клетки некоторых опухолей (лиганд — часто конканавалин А). [c.111]

Разделения субклеточных частиц можно добиться также путем пропускания гомогенатов через колонку с гелем сефарозы. Частицы разного размера фракционируются здесь по принципу молекулярного сита (см. с. 30) сначала из колонки выходят ядра, затем митохондрии и лизосомы, вслед за ними— обломки эндоплазматической сети клетки (микросомы) и, наконец, свободные рибосомы. [c.20]

На гидрофильных гелях можно разделять не только растворы высокомолекулярных соединений, но и суспензии клеточных частиц. Так, Фричова и др. [20] показали, что клетки зобной железы, лимфатических узлов, селезенки и костного мозга мышей можно пропускать через колонки с сефадексом 0-25, причем только небольшая доля их обратимо удерживается. На гелях сефадекс 0-25, 0-50, сефароза 4В и 6В можно полностью отделить эритроциты от их естественной среды выход эритроцитов при этом почти количественный, а степень гемолиза составляет меньше 0,2% [27]. [c.383]

Аполкпопротеин Е — эукариотический полипептид, синтезируемый в клетках Е. oli, где он находится в нерастворимом состоянии, но его очищают с помощью аффинной хроматографии в присутствии денатурирующих агентов [32] (табл. 4.20). Для этого используют хроматографию на гепарин-сефарозе с 2 М мочевиной. В этих условиях эукариотический белок, чтобы узнавать лиганд, должен частично принять нативную конформацию. Далее используются еще две стадии очистки, одна из которых — это гель-фильтрация на сефакриле S-300 в присутствии 6 М гуанидинхлорида. Затем после диализа, при котором белок ренатурирует, осуществляется конечная стадия очистки с исполь- [c.124]

Осадите клетки и клеточные обломки центрифугированием при 2000g в течение 15 мин и пропускайте надосадочную фракцию, содержащую антитела, через колонку с белком А, иммобилизованном на сефарозе (1 л надосадочной фракции через колонку объемом 5 мл), в течение ночи при скорости протекания 60 мл/ч. [c.198]

У разных организмов ферменты целлюлозолитической системы синтезируются конституитивно или же индуцируются. Индуктором синтеза целлюлаз и ксиланаз может служить целлобиоза, продукт экзоглюканаз, и целлодекстрины как продукты эндоглюканаз. Индукторами могут служить и иные олигосахариды. Особенно эффективным индуктором считается сефароза. С другой стороны, эти же соединения могут ингибировать синтез. Поэтому существенна их концентрация в среде и транспорт в клетку. [c.268]

Около 10< обработанных лимфоцитов пропускают через 3 мл лектин-сефарозы в маленькой колонке. Через 15 мин не-связавшиеся клетки (главным образом В-лимфоциты — судя по наличию поверхностных иммуноглобулинов и рецепторов для активированных комплементом эритроцитов овцы) элюируются 80 мл ФСБ с сывороточным альбумином человека и NaNs (8 мл/мин). Смешанная популяция слабо связывающихся клеток удаляется при пропускании следующих 80 мл ФСБ с альбумином и NaNa, содержащим 0,1 мг/мл Н-ацетил-а-П-галактоз-амина, а популяция клеток, обогащенная Т-лимфоцитами, элюи- [c.64]

Небольшая колонка, содержащая 3 г матрицы белок А — сефароза (Pharma ia, Швеция), способна связать антитела, синтезируемые 20—40-10 клетками. При условии правильного обращения она может храниться в течение нескольких лет и использоваться многократно. Удобно, но не обязательно использовать предлагаемую фирмой Pharma ia колонку К9/15 с резервуаром R9. Колонку можно обрезать на половину длины, чтобы ее объем соответствовал объему матрицы. [c.221]

Активированные митогеном клетки выделяют при фракционировании в градиентах фиколла, поскольку этот процесс обеспечивает удовлетворительный выход нужных клеточных форм и не требует много времени. Если в процессе прекультивирова-ния использовали антитела против IgM, иммобилизованные на сефарозе, то соответствующую суспензию, содержащую клетки и сефарозу, следует перед нанесением на градиент фиколла интенсивно пипетировать для того, чтобы освободить клетки, связавшиеся с гранулами сефарозы. После фракционирования сефарозу можно использовать повторно минимум для трех циклов стимуляции, если промыть ее стерильной дистиллированной водой и перевести в соответствующий буферный раствор. [c.238]

Рис, 3. Все IgG мыши при pH 8 адсорбируются на колонке стафилококкового белка А. иммобилизованного на сефарозе 4В. Как правило, yi элюируются при pH 6, У2л при pH 4,5, а Ysb при pH 3 (Еу et al., 1978). Слева — элюцня IgG, содержавшихся в асцитной жидкости при развитии вторичной опухоли у мышей, которым имплантировали клетки гибридомы. В средине — элюция IgG, адсорбированного из 50 мл СПК (примерно 50 мл СГГк содержится в 300 мл культуральной надосадочной жидкости). Справа — элюция специфических антител, адсорбированных из 300 мл надосадочной жидкости, к которой была добавлена СПК, предварительно очищенная от бычьего IgG. Из 300 мл надосадочной жидкости можно, как правило, выделить около 7— 10 мг чистых антител. [c.19]

Рис. 3. Анализ иммуноглобулинов, секретируемых клетками гибридомы. Условия биосинтетического включения метки в секретяруемые белки те же, чт указаны в подписи к рлс. 2. По 1 мл надосадочной жидкости из каждой культуры инкубировали 30 мин с белком Л, фикс1фоваиным на сефарозе (50 мкл осевших граиул геля), при комнатной температуре, непрерывно перемешивая, После 4-кратиого промывания геля ЗФР специфически сорбированные иммуноглобулины элюировали ДСН-буферным раствором для образцов. Т и Л — тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов i и u —соответственно окрашенные электрофореграммы и радиоавтографы одних и тех же гелей,

Рис. 4, Анализ иммулоглобулииов, секретируемых клетками гибрид( мы. Условия биосинтетического включения метки в секретнруемые белки же, что указаны в подписи к рис. 2, По 1 мл надосадочной жидкости от каждой культуры инкубировали с 20 мкл кроличьей антисыворотки к иммуноглобулинам мыши (4 С, 2 ч). Затем добавляли примерно 50 мкл осевших гранул геля сефарозы, нагруженных белком А, и инкубировали еще 15 мин, непрерывно перемешивая. Специфически сорбированные иммуноглобулины исследовали методом ДСН-ПАГЭ, как описано в тексте. Т и Л — тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов I и 1 — соответственно окрашенные электрофоре граммы и радиоавтографы одних и тех же гелей.

К Гранулам сефарозы. ОР-по южительные клетки, образующие розетки с такими гранулами, выделяют центрифугированием в градиенте плотности СВЛ. ПК-отрицательные клетки собирают у поверхности раздела, а ПК-положительные, нагруженные гранулами сефарозы, — под слоем СВЛ. Гранулы сефарозы можно затем удалить осторожным перемешиванием суспензии клеток. [c.204]

Еслн какая-либо из аитисывороток плохо выявляет lg-секре-тирующие клетки, из нее можно приготовить улучшенный реагент, выделив СБА-связывающие антитела па СБА-сефарозе (Goding, 1976). Недавно было показано, что очищенные таким способом антитела дают более четкие и более крупные зоны гемолиза, причем нет снижения эффективности, обычно наблюдаемого при избытке проявляющей антисыворотки (рис. 1). Очистка увеличивает и титр проявляющего реагента, и максимальное число выявляемых зон гемолиза. Вероятно, в исходной антисыворотке активность СБА-связывающих антител заблокирована другими антителами, которые ие связываются с СБА при даииом pH. Раньше уменьшение зон гемолиза при избытке антисыворотки описывали как феномен прозоны и объясняли тем, что для связывания с СБА иммунные комплексы должны иметь определенные размеры сейчас более вероятной причиной кажется конкуренция со стороны аитител, ие связывающихся с СБА. [c.218]

Антиген выполняет роль первого сигнала при активации деле ний лимфоцитов. Это действие антигена удается имитировать с пс мощью антител к 1 -рецепторам на В-клетке и к ТР на Т-клетк( Для активации лимфоцита нет необходимости в проникновени лиганда (антигена или антитела, специфичного к рецептору) ил комплекса лиганд — рецептор внутрь клетки, активация осуществ ляется на внешней клеточной мембране. Ее с успехом можно вы -звать с помощью лигандов, ковалентно присоединенных к твердой фазе. Примером могут служить конъюгаты антигенов или антител с шариками сефарозы, сефадекса или волокнами целлюлозы. [c.50]

В последние годы появились новые интересные данные о механизме действия инсулина., Несколько лет нa зaд Kyaтpeкaзe показал, что инсулин, ковалентно присоединенный к гранулам сефарозы, оказывает те же биологические эффекты, что и нативный гормон. Поскольку размеры гранул сефарозы во много раз превышают размеры клетки, предполагалось, что иммобилизованный инсулин вызывает свои эффекты, связываясь с рецепторами плазматической мембраны. Эти опыты многократно воспроизводили и другие авторы, причем в такой постановке, которая исключала отщепление инсулина от носителя в процессе инкубации с клетками. Поэтому в настоящее время большинство исследователей склоняется к тому, что первым этапом действия инсулина на клетку является его взаимодействие с мембранным рецептором. [c.170]

Выделение специфических клеток животных. Осуществляется с помощью иммобилизованных агглютининов, таких, как конка-навалин А, агглютинина зародыша пшеницы или фитогемагглю-тинина. Например, клетки некоторых опухолей, вызываемых вирусом, можно отделить от нормальных клеток, поскольку клетки опухоли прочнее связываются с конканавалин А-сефарозой. [c.218]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология