Хроматография на гидрофильных гелях

Область применения тонкослойной хроматографии практически безгранична, что объясняется возможностью большого выбора слоев различных сорбентов. Для разделения полярных веществ применяют слои адсорбентов, для гидрофильных — распределительную хроматографию на целлюлозе или силикагеле, для гидрофобных — импрегнированные слои (обращенные фазы). Можно применять также ионообменную или гель-хроматографию в тонком слое. Метод тонкослойной хроматографии в настоящее время применяют в основном для целей качественного анализа. Количественное определение возможно в такой же степени, как и в бумажной хроматографии. При проведении определений можно работать с очень небольшими количествами веществ, разделение проходит быстро и с умеренными затратами. Тонкослойную хроматографию в связи с этим можно применять для предварительных опытов по выбору фаз для разделения больших количеств веществ методом колоночной хроматографии. [c.361]

Для гель-хроматографии применяют в зависимости от целей гидрофильные и гидрофобные сорбенты. В качестве гидрофильных сорбентов применяют декстрановые гели (сефадексы и моя-селекты), полиакриламидные гели (биогелн), оксиалкилметак-рилатные гели (сфероны) и т. д. Сефадексы получают из декстрана [c.237]

Большое значение имеют сорбенты на основе пористого стекла с привитыми углеводами. Они сочетают гидрофильный характер поверхности с высокой механической прочностью и предназначаются для разделения методом гель-хроматографии смесей высокомолекулярных соединений в водных растворах. [c.231]

В соответствии с определением, данным в статье 11, а], при гель-фильтрации используют водные растворы и гидрофильные гели, а при гель-проникающей хроматографии — органические растворители и гидрофобные гели. Фильтрование через гель применяется при биохимических исследованиях и при изучении природных соединений, гель-прони-кающая хроматография — для исследования синтетических высокомолекулярных соединений. Указанные методы включают также хроматографирование, или фильтрование , на молекулярных ситах 12]. Гель обычно характеризуют размерами молекул (точнее, интервалом молекулярных весов молекул), которые он достаточно эффективно разделяет. [c.399]

В гель-хроматографии водных растворов чаще всего используют гидрофильные гели. Однако это не ограничивает область применимости метода. В некоторых случаях можно получить отличное разделение на гелях (например, каучука или слегка сшитого полистирола), способных набухать в органических растворителях, выполняющих роль подвижной фазы. При этом по описанному выше принципу совершается разделение гидрофобных веществ между набухшим гидрофобным гелем и растворителем. [c.26]

Растворители, используемые в молекулярно-ситовой хроматографии, делят на две категории а) для разделения органических полимеров на органофильных гелях и б) для разделения биополимеров на гидрофильных гелях. [c.76]

В молекулярно-ситовой хроматографии в качестве неподвижной фазы применяют пористые материалы. При этом поры имеют вполне определенные размеры, соответствующие размерам молекул одного из разделяемых веществ. Поэтому именно эти молекулы задерживаются в порах, а остальные остаются в растворе. В качестве пористого материала обычно применяют гидрофильные гели, поэтому метод именуют также гель-хроматографией. [c.255]

Распределительную и адсорбционную хроматографии проводят на кизельгуре (целите) [39, 40], целлюлозе [41], силикагеле [42], гидрофильных гелях [43] и окиси алюминия [44, 45]. Для удаления веществ, поглощающих в УФ-области, кизельгур промывают 2—3 М кислотой и водой. Элюирование проводят органическими растворителями, не содержащими полярных примесей, или смесью растворителей. Объем выхода зависит от состава смеси и в определенной степени от свойств сорбента [46]. При распределительной хроматографии, в частности при разделении аномальных и минорных компонентов нуклеиновых кислот, а также синтетических полупродуктов, применяют бинарные и тройные системы, принятые в хроматографии на бумаге. [c.40]

IV. Хроматография на гидрофильных гелях [c.263]

Декстрановые гели широко применяются для разделения, очистки и идентификации различных органических соединений методом гель-хроматографии Наиболее распространены Ь гидрофильные декстрановые гели, сшитые эпихлоргидрином (гели типа Сефадекс ). Мы проверили и уточнили условия получения подобных гелей. [c.56]

Гидрофильные гели. Фильтрование с помощью геля (гель-фильтрация) является одним из новейших методов распределительной хроматографии, в процессе которого гели, обладающие пространственной сетчатой структурой и свойствами молекулярных сит, широко используются для очистки и разделения веществ. [c.60]

Гель-хроматография. В препаративных целях, особенно при очистке белков от примесей, щироко используют метод молекулярных сит, или гель-хроматографию. При обработке эпихлоргидрином полисахарида дек-страна образуются различной степени выраженности поперечные связи, приводящие к формированию крупных гидрофильных зерен, нерастворимых в воде и называемых сефадексами. Благодаря большому сродству к воде зерна сильно набухают в водной среде с образованием геля, которым заполняют хроматографическую колонку. Разделение веществ этим методом основано на том, что большие молекулы не проникают во внутреннюю водную фазу геля, являющуюся стационарной, и остаются снаружи, двигаясь вместе с подвижной фазой вниз вдоль колонки небольшие молекулы, напротив, свободно диффундируют внутрь зерен, образуя равновесную систему между подвижной и стационарной фазами, и соответственно с меньшей скоростью двигаются вдоль колонки (рис. 1.5). Обычно момент появления веществ в вытекающем из колонки с сефадексом элюенте выражают формулой [c.30]

Распределительная хроматография основана на различной растворимости разделяемых веществ в заданном растворителе. Природа сил межмолекулярно-го взаимодействия та же, что и в адсорбционной хроматографии, но в первую очередь обусловлена ван-дер-ваальсовыми силами. Поскольку разделение протекает на границе двух несмещивающихся между собой фаз — неподвижной (жидкости) и подвижной (жидкости или газа), процесс разделения веществ определяется различием их коэффициентов распределения между обеими фазами. Одна из фаз, используемых в распределительной хроматографии, богаче ор-га [ическим растворителем, другая — водой. Водная фаза обычно закрепляется на твердых гидрофильных носителях, например силикагеле, диатомовой земле, крахмале, гидрофильных гелях, измельченной в порошок целлюлозе, фильтровальной бумаге. Органическая фаза обычно выполняет роль подвижной фазы. [c.221]

В гидрофильной фазе системы растворителей, а затем уравновешивали с липофильной фазой [139]. В табл. 29 приводится ряд систем растворителей, которые нашли применение при разделении других веществ методом распределительной хроматографии на гелях сефадекса. Для выделения токсинов (циклических олигопептидов) из Amanita phalloides очень [c.197]

Гель фильтрация в тонком слое применяется преимущественно при исследовании белков и гораздо реже в других областях биохимии. Гроссман и Вагнер [23] использовали тонкослойную гель-фильтрацию на сефадексе 0-25 для идентификации компонентов нитросинего тетразолийхлорида, применяющегося обычно для гистохимических целей. Стикланд [24] тонкослойной хроматографией на дауэксе-1 и сефадексе 0-25 удалял из образцов полисахариды и флуоресцирующие примеси, которые обычно интерферируют при фракционировании 5-рибонуклеотидов в тонком слое ОЕАЕ-целлюлозы. Возможность разделения низкомолекулярных соединений в тонком слое сефадекса 0-10 и 0-15 вообще почти не исследовалась. Зюдвиг и сотр. [68] показали, что разделение различных антибиотиков на сефадексе 0-15 зависит от их адсорбции на геле. Не сделано никаких попыток использовать в тонкослойной хроматографии менее гидрофильные гели, например сефадекс ЬН-20. [c.263]

Хроматография на целлюлозных и полидекстрановых ионитах Хроматография на биполярных ионитах Хроматография ферментов Препаративное и аналитическое разделение Автоматический анализ Высокоскоростная хроматография с применением ионообменных производных твердых гидрофильных гелей Субстратное (специфическое или аффинное) элюирование [c.321]

Гидрофильные гели на основе декстранов нашли широкое применение в процессах гель-фильтрации (или гель-хроматографии) [150-154] Декстран представляет собой полиглюкозид с а-1,6-глюкозидными связями между звеньями. Он очень высокомолекулярен (мол. вес до 10 ) иГполидисперсен. Для получения геля с более равномерной структурой декстран фракционируют, отбирая фракцию с молекулярным весом 30—50 тысяч. Фракции более высокомолекулярные гидролизуют при обычной температуре растворами минеральных кислот для обогащения продукта фракцией с молекулярным весом около 40 ООО. Декстран растворим в воде. Для предупреждения этого его макромолекулы сшивают между собой в полимерные сетки. В этой реакции может принять участие какая-либо из трех гидроксильных групп каждого звена и обе гидроксильные группы, возникающие по концам макромолекулы во время гидролиза [c.118]

Открытие гель-хроматографии ( ксклю-зионной хроматографии). Разделение смеси глюкозы и фракций полисахаридов (декстранов), различающихся молекулярной массой, на слое гидрофильного геля (сефадекса). Подвижная фаза — вода [18] [c.10]

За последние годы в связи с возросшей необходимостью анализа и разделения смесей сложных веществ получила значительное развтие ситовая хроматография (гель-проникающая, гель-фильтра-ционная, молекулярно-ситовая). В качестве подвижной фазы в этом случае используются только жидкости, а неподвижной фазой являются материалы с заданной пористостью, способные избирательно удерживать молекулы веществ с определенными размером и формой. Так, например, в качестве фильтрующих материалов используются сшитые гидрофильные полимеры (гели), обладающие строго регулярной пространственной структурой. При пропускании через гель водных растворов белков или других водорастворимых биологических материалов удается удерживать внутри решетки геля молекулы определенного размера, а более крупные молекулы беспрепятственно вымываются подвижной фазой. При этом компоненты смеси элюируются в порядке уменьшения молекулярной массы. [c.49]

Гранулированные гели. Разделение на гелях основано на распределении растворенных веществ между растворителем (подвижная фаза) и растворителем, содержащимся в порах геля (стационарная фаза). В отличие от распределительной хроматографии подвижная и стационарная фазы в этом случае одинаковы. Таким образом, распределение происходит на основе способности растворенных частиц проникать в поры разделение частиц определяется различной скоростью их диффузии. Сродство разделяемых веществ к гелю само по себе должно быть наименьшим во избежание побочных процессов. Для разделения гидрофильных веществ применяют гели на основе декстрана, полиакриламида или агаровый гель. Для разделения гидрофобных веществ необходимо применять гели, способные набухать в органических растворителях. Такие гели получают перезтерификацией гидроксильных групп декстранового геля. Этот способ можно применить для получения акриловых и полистироловых гелей, растворимых в жирах. [c.351]

Наилучшими свойствами для эксклюзионной хроматографии биополимеров обладают TSK-гели типа SW. Поверхность этих материалов покрыта гидрофильными ОН-грутопами по особой технологии, обеспечивающей исключительную инертность сорбента, практически не уступающую сефадексу. Поэтому эксклюзионное разделение, как правило, не осложняется побочными сорбционными процессами. ТЗК-гели SW выпускают с тремя размерами пор и они перекрывают диапазон молекулярных масс от 5 10 до 4 10 (по декстрану) или до 10 (по глобулярным белкам). За счет большого объема пор колонки, с этими гелями характеризуются высокой разделительной способностью, а их гарантированная эффективность составляет 16 тыс.т.т./м. Калибровочные кривые для некоторых модифицированных жестких сорбентов приведены на рис. 4.11. [c.109]

Рассчитать количественно гидрофобность полимерных аналитов для выбора условий эксклюзионной ЖХ пс представляется возможным из- а отсутствия четких критериев. Можно говорить только об их растворимости в воде, гидрофильных или гидрофобных растворителях. Сравнительно низкомолекулярные полимеры хорошо расгйоряются ТГФ, 1,1,2,2-тетрахлорэтаном и хлороформом. В табл. 4.2. приведены данные о растворимости полимеров в 10 наиболее ходовых растворителях, используемых для гель-прони-кающей хроматографии, а в табл. 4.3. даны диапазоны рабочих температур этих расгворитслей. Во избежание мицсляообра.зова-ния, для повышения растворимости высокомолекулярных фракций полимеров, а также для понижения вязкости подвижной фазы целесообразно повышать рабочую температуру колонки. [c.242]

В гель-фшшдюционной зфоматографии проводят разделение водорастворимых веществ на гидрофильных сорбентах. При этом используются водные элюенты, содержащие, как правило, буф для контроля уровня pH. В гель-проникающей хроматографии применяются гидрофобные сорбенты и соответственно неполярные орган%1ческие растворители, такие, как тетрагидрофуран, дихлорметан или толуол. С помощью гель-проникающей хроматографии определяют соединения, малорастворимые в воде. [c.291]

Наверное, простейшая по типу хроматография — это хроматография, использующая пористую инертную стационарную фазу. Разделение здесь достигается на основе соответствия размера и формы молекул размеру и форме пор, В методе гельпроникающей хроматографии 39] стационарной фазой обычно служит сшитая полистирольная смола, а подвижной фазой — органический растворитель, который в практических целях пропускают через колонку под высоким давлением. Очень близок к этому методу по технике исполнения метод гель-фильтрации [40], где стационарной фазой является сшитый полиакриламид (или другой гидрофильный материал), а подвижной фазой слух<ит водный раство- [c.318]

Все применяемые в гель-хроматографии наполнители колонок традиционно делят на мягкие, полужесткие и жесткие гели [101]. Емкость геля может быть охарактеризована отношением У /У , которое лежит в диапазоне от 0,5 для жестких гелей до 2-3 для мягких гелей. Для мягких гелей характерна, с одной стороны, высокая эффективность и емкость при низких скоростях потока, с другой — высокая степень набухаемости в водных средах и увеличение объема пор при набухании. Соответственно повышение скорости подвижной фазы вызывает деформацию мяг-Ю1Х гелей. Они сжимаются, снижается их емкость. Из коммерческих мягких гелей для гель-фильтрации чаще всего применяют декстрановые гели, названные сефадек-сами. Сефадексы — гранулированные поперечно-сшитые декстраны (полисахариды), имеющие в набухшем состоянии гелевую структуру, обладают сильными гидрофильными свойствами. Неионообменные сефадексы содержат все же небольшое количество гидроксильных групп, определяющих адсорбционную емкость сефадексов порядка [c.209]

Для аналитических и препаративных разделений пептидов и белков применяются такие гидрофильные полимерные материалы, как полидекстрины. В эксклюзионной хроматографии используют пористые полимеры с широкими порами. Эксклюзионная хроматография с органическими элюентами называется гель-проникающей хроматографией и применяется для разделения полимеров. Эксклюзионная хроматография с водными элюентами — гель-фильтрационная хроматография — используется для разделения биомолекул. [c.312]