Конъюгат гаптенами

В данном разделе схематично будут рассмотрены методы получения конъюгатов гаптен-носитель для иммунизации. [c.177]

Основной проблемой, стоящей особенно остро при введении ферментной метки в низкомолекулярные соединения, является доступность антигенных детерминант в образовавшемся конъюгате для взаимодействия с антителами. При использовании меченых гаптенов необходимо, чтобы связь маркера с ним осуществлялась через ту же функциональную группу, которая модифицировалась для синтеза конъюгата белок — гаптен для целей иммунизации и получения антител. Это накладывает дополнительные требования на выбор фермента-маркера. Кроме того, разделение конъюгата гаптен — фермент от несвязавшегося фермента, примесь которого может оказывать негативное влияние на результаты анализа, крайне затруднительно. Другим существенным условием получения меченых гаптенов является доступность очищенного антигена в значи-гельном количестве, что осуществимо далеко не всегда. [c.100]

Синтез конъюгатов гаптенов с носителями для получения антител [c.177]

Получение конъюгатов гаптен — фермент [c.192]

Синтез конъюгатов гаптенов с ферментами основаны в принципе на тех же методах, что и синтез конъюгатов белков с ферментами. Однако есть ряд особенностей, которые необходимо учитывать при проведении синтезов. Во-первых, многие гаптены плохо растворимы в водных растворах и поэтому получение конъюгатов приходится проводить в водно-органической среде, что сказывается на ферментативной активности конъюгата. Во-вторых, бывает очень сложно очистить конъюгат от свободного фермента, а это приводит к высоким фоновым реакциям, а поэтому синтез должен быть выполнен с высоким выходом. В-третьих, для сохранения иммуногенных свойств гаптен должен быть пришит к ферменту через углеводородную ножку , содержащую 5—6 атомов цепи. [c.192]

Модификация белков конъюгатом гаптен-азо-ГБ [c.168]

Модификация белков конъюгатом гаптен-азо-ДГБ [c.169]

Если конъюгаты гаптен — носитель будут использоваться для анализа иммунологической специфичности, необходимо удостовериться, что наблюдаемые биологические эффекты обусловлены присоединенным гаптеном, а не связаны с артефактами. [c.192]

Конъюгаты гаптенов, обладающих лечебным действием [c.43]

А. Конъюгаты — гаптен]. Спектры поглощения свя- [c.83]

Преимущество использования в качестве метки кофактора фермента, а не самого фермента, заключается в том, что его можио легко включить в схему усиления (рис. 7.9-17) н испольэовать в системе гомогенного анализа. Применяют конъюгаты гаптен-кофактор (например, NAD-гaпт н), и в присутствии соединения фepмeнт-NAD и субстрата конъюгат, связанный с антителом, неактивен, тогда как свободный конъюгат способен участвовать в ферментативном цикле. Каждый раз, когда конъюгат гаптен-кофактор претерпевает цикл уси- [c.596]

Кроме того, должно быть тщательно выбрано место прищивки гаптена к ферменту, так как это влияет на специфичность анализа. Показано, что специфичность анализа для гаптенов выше, если конъюгат фермент—гаптен получен способом, отличным от метода синтеза конъюгата гаптен-носитель, используемым для иммунизации. [c.192]

Если при получении конъюгатов гаптен-носитель для иммунизации животных стараются пришить 10 молекул гаптена на молекулу белка, то конъюгат гаптен—фермент должен отвечать составу 1 1. Поэтому для синтеза конъюгатов гаптен—фермент в настоящее время в основном используют методы с применением гетеробифункциональных реагентов. [c.192]

При получении такого конъюгата необходимо 1) исключить возможность модификации групп, обрйзуюш,их антигенную детерминанту 2) использовать в качестве белка-носителя другой белок, а не тот, который применялся при синтезе конъюгата гаптен-носитель при иммунизации 3) по возможности стремиться применять сшивающий реагент, отличный от используемого при получении конъюгата для иммунизации с целью избежания связывания адсорбированным конъюгатом антител, специфичных не к гаптену, а к участку связывания гаптена с белком-носителем. [c.213]

Хотя наборы для мониторинга лекарственных препаратов на дому еще не производятся, уже разработаны простые методы определения некоторых лекарств вне крупных централизованных лабораторий. Например, компания Syva под торговым названием A ulevel производит наборы в виде индикаторных бумажек, с помощью которых в небольших специализированных лабораториях можно определять теофиллин и фенобарбитал. В наборе A ulevel проба и конъюгат гаптен - фермент находятся в одном реакционном сосуде, в который помещают конец бумажной полоски с иммобилизованными на ней антителами к данному гаптену [c.99]

Высота, на которую поднимается конъюгат гаптен - фермент,. пропорциональна концентрации антигена в пробе. Полоску затем помещают в раствор с субстратом и измеряют высоту окрашенной зоны, пропорциональную количеству лекарственного препарата в образце (см. гл. 6). Применение набора A ulevel для анализов на дому маловероятно в силу его высокой стоимости. [c.100]

Определение гормонов методом конкурентного иммуноанализа. Сообщалось о применении конкурентного метода DELFIA для определения кортизола [31 ] и дигоксина [32]. В этом методе определяемое вещество и определенное количество конъюгата гаптен-белок, иммобилизованного на твердой фазе, конку1 1-руют за ограниченное число центров связывания антител, меченных Ей. На этом же принципе основаны разработанные нами методики анализа DELFIA для прямого (без экстракции) определе- [c.159]

RF человека. Если в пробе содержится свободный гаптен, он кон-Kyimpyer с конъюгатом гаптен-латекс за центры связывания антител IgG и поэтому ингибирует агглютинацию, что приводит к увеличению числа неагглютииированных частиц. Концентрация гаптена пропорциональна числу неагглютииированных частиц [12]. [c.226]

Следующий этап в истории создания чувствительных методов иммунологического анализа связан с открытием Фарром в 1958 г. [13] и Яллоу и Берсоном в 1960 г. [14] технологии мечения антигенов, антител и небольших пептидных гормонов радиоизотопами. Радиоиммунологический анализ позволил определять чрезвычайно малые концентрации (вплоть до пмоль/л) таких молекул, как инсулин, и выдвинул новые специальные требования к технологии получения антисывороток. Для иммунизации животных стали использоваться конъюгаты гаптенов (гормонов) с молекулами-носителями. Именно этим способом удалось получить антитела с такой степенью специфичности и аффинности, какая раньше никогда не требовалась. [c.13]

Рис. 12-2. Конкурентный вариант ELISA. К иммобилизованным на носителё антителам (Ат) добавляют смесь тестируемого гаптена (Г) и конъюгата [гаптен — фермент (Г—Ф)]. После промывки добавляют субстрат (С) и следят за образованием соответствующего продукта (П).

В случае ИФА кортизола для конъюгации гаптена с сульфгидрильными группами -галактозидазы были синтезированы производные кортизола — КГС-МБ и К-МБ. С целью сравнения нашего метода конъюгации с разработанными ранее мы проводили также связывание КГС с аминогруппами -ra-лактозидазы методом смешанных ангидридов. Сравнение полученных конъюгатов проводили методом осаждения вторыми антителами при избытке антител против кортизола. Установлено, что при использовании метода смешанных ангидридов метится только 40% молекул фермента, при этом ферментативная активность снижается на 20%. При использовании разработанного нами метода конъюгации с производными гаптена без заметного снижения ферментативной активности метится более 95% фермента (табл. 17-1). Число молей КГС-МБ или К-МБ, связанных с ферментом, непосредственно не определяли. Однако, как и в случае конъюгата [Т4 — фермент], можно счн тать, что с каждой. молекулой -галактозидазы связывается до 12 молекул гаптена. Изучали также иммунологическую активность и специфичность взаимодействия конъюгатов [гаптен — фермент] с антисывороткой против кортизола. Конъюгаты типа [КГС— ,-гaлaктoзидaзa] и [КГС-МБ— -гаЛактозидаза] обладают высокой иммунологической активностью, но лишь в незначительной степени вытесняются из комплекса с антителами [c.271]

Большой вклад в изучение различных функций Т- и В-клеток внесли исследования, проведенные в конце 1960 - начале 1970 гг. Митчисоном и другими исследователями с использованием химически модифицированных белков. Ими было установлено, что для индукции оптимального вторичного ответа с образованием антител против небольшой молекулы, или гаптена (он обладает иммуногенностью только в том случае, когда связан с белком-носителем), животное необходимо иммунизировать не гаптеном в свободной форме, а конъюгатом гаптен-носитель, и затем повторно ввести тот же конъюгат. Этот феномен был назван эффектом носителя. Исследуя различные клеточные популяции, авторы этих работ обнаружили, что за распознавание носителя ответственны Т-клетки, тогда как гаптен распознают В-лимфоциты (рис. 11.6). Дальнейшие эксперименты были направлены на подробное изучение того, каким образом В-клеточные антитела- [c.199]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология