Белки химически модифицированные

Рассмотрим некоторые примеры подавления хемосорбции вирусов и белков при химическом модифицировании силохрома, в поры которого (-—ШО нм) способны проникать молекулы белков, а вирусы проникнуть не могут. Химическое модифицирование велось с помощью реакции с -аминопропилтриэтоксисиланом, а также последующих реакций с концевой аминогруппой. Некоторые из получаемых при этом модифицирующих поверхность кремнезема групп перечислены ниже (атомы кремния, принадлежащие остову самого кремнезема, показаны слева) [c.343]

Таблица 18.1. Подавление хемосорбции белков и вирусов в результате химического модифицирования поверхности силохрома. (Средний эффективный диаметр пор =100 нм удельная поверхность 5 = 74 м г элюент — 0.1 М трис-солянокислый буфер, содержит 0,15 Л1 раствор аС1, pH 7,4—7.8)

Несмотря на эти ограничения, хироптические методы получили большое значение при конформационном анализе белков. Результативным является прямое сравнение данных, полученных на нативных и денатурированных белках, а также распространение исследований на химически модифицированные белки. [c.385]

Резюмируя, можно отметить, что в случае добавок детергентов для разделения белков в КЭ многообещающим представляется использование в качестве динамических покрытий в основном неионных ПАВ, т. к. они лишь незначительно изменяют структуру заряда пробы. Конечно, этот метод включает совместное действие химического модифицирования поверхности и динамического покрытия, в результате чего преимущества доступности и простоты применения буферных добавок в конце концов теряются. [c.69]

Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе в присутствии высокой концентрации мочевины является одним из лучших методов фракционирования денатурированных или химически модифицированных белков. [c.207]

Вирусные белки могут быть получены генно-инженерным методом, однако нужно учитывать следующие моменты. Как правило, вирусные белки состоят из нескольких полипептидных цепей, в ряде случаев химически модифицированных, Не только в бактериальной, но и в дрожжевой клетке нет структур, осуществляющих созревание таких белков. Следовательно, микробные клетки могут продуцировать только отдельные полипептидные цепи. Это резко снижает или сводит на нет их иммуногенность, которая определяется конформационными антигенными детерминантами, формирующимися в процессе образования третичной или четвертичной структуры белка. Ограниченное применение вирусных белков-антигенов относится к белкам HBS-вируса гепатита В человека и белка УР вируса ящура. HBS-антиген, синтезируемый дрожжевыми клетками, давал иммунный ответ, хотя и меньший по сравнению с инактивированным вирусом, однако достаточно высокий. Образовавшийся белок не секретировался из клеток, а в процессе их разрушения и вьщеления антигена выход его значительно снижался, что ставило под сомнение всю технологическую схему [c.504]

Из химически модифицированных природных полимеров наибольшее значение дл производства пластмасс имеют эфиры целлюлозы, которые и характеризуются ниже. Полимеры на основе белков, почти утратившие промышленное значение, не рассматриваются. [c.279]

Природные молекулы часто обладают биологической активностью и, следовательно, представляют интерес для медицины. Но из-за высокой стоимости или нежелательных побочных эффектов их обычно нельзя применять в фармацевтических препаратах. В таких случаях обычно используют химически сходные молекулы или фрагмент природного продукта. Технология рекомбинантных ДНК может помочь в производстве модифицированных форм. Полипептидные гормоны оказывают биологическое влияние самого различного рода, но при пероральном приеме они часто неэффективны или быстро теряют эффективность. Дальнейший прогресс в химическом модифицировании белков, возможно, поможет устранить эти недостатки. Часто белок, полученный по технологии рекомбинантных ДНК, требует модификации для реализации его биологической активности. Это касается, в частности, уже упоминавшегося инсулина. Химическая модификация инсулинового белка, производимого бактериями Е. соИ, позволила получить новый биологически активный гормон. [c.120]

Для изготовления товаров широкого потребления имеют некоторое значение пластические массы на основе химически модифицированных природных полимеров-белков. Эти пластические массы были известны значительно раньше, чем пластмассы на основе синтетических смол. Однако с развитием химии синтетических смол значение белковых пластмасс резко снизилось. [c.171]

Различия в конформации разных белков и конформационные изменения, сопровождающие связывание лигандов или изменение окислительного состояния железа обнаруживаются методом рентгеноструктурного анализа. Некоторые примеры уже были приведены в разд. 7.4. Ниже мы опишем еще несколько примеров (см. также работу [94]). Различия структуры вокруг дистального координационного центра включают наличие или отсутствие групп, способных образовать водородную связь (разд. 7.4), т. е. они отражают явные различия сольватации лиганда. О конформационных переходах и различиях в конформации разных белков можно судить также по данным ЯМР, спектрам кругового дихроизма и дисперсии оптического вращения (см., например, работу [204] и ссылки в работе [8]). Особенно интересен тот факт, что связывание СО или кислорода вызывает существенные изменения спектров кругового дихроизма гемоглобина, небольшие изменения спектра кругового дихроизма изолированных химически модифицированных р-це-пей и совсем не влияет на спектры миоглобина или изолированных и химически модифицированных а-цепей [41]. Этот результат представляет собой веский аргумент в пользу предположения о том, что белок имеет более гибкую структуру в гемоглобине, чем в миоглобине. Такой вывод подтверждается и при исследовании моделей этих двух белков [169]. Различная гибкость, вероятно, связана с тем, что в гемоглобине атом железа может далеко выходить за пределы плоскости порфиринового кольца, тогда как в миоглобине такое искажение структуры гема не наблюдается (табл. 14). [c.174]

СВЯЗЬ МЕЖДУ СВОЙСТВАМИ ХИМИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ БЕЛКОВ И ИХ АКТИВНОСТЬЮ И СТРУКТУРОЙ [c.337]

Наиболее подробные и важные из числа последних успешных исследований структуры белка были осуществлены благодаря использованию химических реагентов для определения концевых групп и для установления числа пептидных цепей и порядка чередования в них аминокислотных остатков. Эти работы основаны на первых исследованиях таких химически модифицированных белков, как препараты производных инсулина. Значение таких работ показано в предыдущих статьях. [c.356]

Методы химического модифицирования белков 371 [c.371]

III. МЕТОДЫ ХИМИЧЕСКОГО МОДИФИЦИРОВАНИЯ БЕЛКОВ [c.371]

Искусственные высокомолекулярные вещества на основе белков являются модифицированными природными веществами. Это значит что сырье представляет собой природный высокомолекулярный про дукт, который может быть переработан посредством химических и фи зических модификаций в искусственное вещество. Молекулы этого при родного сырья встречаются в глобулярной и фибриллярной формах В общем, можно сказать, что белки, будучи глобулярными, характери зуются упорядоченной структурой, поэтому они Б некоторых случаях [c.342]

РЕАКЦИИ С ХИМИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫМИ БЕЛКАМИ [c.428]

Методики. Далее в качестве примера приводятся две различные методики сборки гибридных белков из гомологов и химически модифицированных субъединиц. [c.58]

Какие белки синтезируются во время дробления Относительно немногие. На рис. 15-8 показаны профили растворимых белков зародышей морского ежа на двух стадиях развития. Растворимые экстракты наносят на цилиндрическую колонку, содержащую мелкие частички химически модифицированной целлюлозы (ДЭАЭ-целлюлозы). Белки адсорбируются в верхней части колонии. После этого начинают медленно и осторожно добавлять сверху раствор, постепенно увеличивая концентрацию соли, и собирают фракции после прохождения раствора через колонку. При использовании раствора соли низкой концентрации практически все белки остаются связанными с целлюлозой. В растворе соли высокой концентрации (около 1 М) связи разрушаются и все белки вымываются. (Принято говорить, что белки элюируют с колонки.) При промежуточных концентрациях одни белки вымываются, а другие пет, в зависимости от размера и электрического заряда. Это стандартный метод разделения белков. [c.277]

Когда генетические вариации отсутствуют или не удовлетворяют требованиям опыта, иногда применяется избирательная химическая модификация. Некоторые аминокислотные остатки могут быть избирательно модифицированы в присутствии остальных. Даже если в белке имеется много экземпляров остатков каждого типа, часто лишь ограниченное их число обладает высокой реакционной способностью. Если в результате модификации структура или функция белка изменяются, можно попытаться объяснить, каким образом эта модификация привела к такому результату. В случае нуклеиновых кислот осуществление специфической химической модификации затруднительно, поскольку здесь гораздо меньше видов звеньев, а химические свойства всех звеньев, к сожалению, очень близки. И все же существуют приемы, способные упростить задачу. Предположим, что в результате модификации получается гетерогенная смесь молекул, прореагировавших в нескольких различных местах. Вероятно, некоторые из этих молекул будут инактивированы, а другие сохранят нормальную функцию. Тогда можно будет с помощью физических методов, основанных на способности молекул к функционированию (например, с помощью аффинной хроматографии), разделить полученную смесь. На практике получение химически модифицированных макромолекул является нередко трудоемкой процедурой, проводимой методом проб и ошибок. Тем не менее использование таких макромолекул необходимо для ряда других методов, таких, как метод зондов или меток, а также для изоморфного замещения тяжелыми атомами при изучении больших молекул методом рентгеновской кристаллографии. [c.40]

Различают природные высокомолекулярные соединения (белки, крахмал, целлюлоза, натуральный каучук), модифицированные и синтетические, полученные химическим путем за счет объединения многих молекул обычного размера в одну макромолекулу. [c.272]

Благодаря химической модификации поверхности капилляров, ЭОП может контролироваться, исключаться или даже обращаться. Определение значения ЭОП служит единственной возможностью определить изменения на поверхности капилляров, например, благодаря необратимой адсорбции компонентов пробы. Все другие методы характеристики поверхности капилляров исключаются при очень небольших поверхностях (1 см ). Поверхностно-модифицированные капилляры не проявляют явлений гистерезиса при смене буферов и из-за незначительной адсорбции очень хорошо подходят для анализа белков (см. ниже). [c.12]

Так, в прядильные растворы вводили различные добавки клейковину и белки молока [35], крахмал в нативном состоянии, желатинированные или химически модифицированные крахмалы [73, 75, 80] липиды, красители и ароматизаторы [15], пигменты, такие, как нитрозилгемоглобин [23]. Коагулирующие растворы также подвергались многочисленным исследованиям. Для улучшения цвета и вкуса волокнистого продукта добавляли сульфит натрия в разные кислоты (молочную, уксусную, лимонную, фосфорную) и соли, входящие в состав обрабатывающих растворов. Было показано, что коагуляция белков в присутствии солей алю- [c.542]

Важный аспект изучения миоглобина с помощью ЯМР состоит в исследовании слабопольных сигналов протонов, способных к обмену, путем сравнения спектров в ОгО и НгО, как это было описано для лизоцима в разд. 14.2.2. Пател и сотр. [64а] оиисали в спектрах миоглобина и оксимиоглобина резонансные сигналы в области от О до —5 т. На основании данных рентгеноструктурного анализа химически модифицированных белков в разных состояниях эти сигналы были идентифицированы как пики NH-протонов двух остатков триптофана, один сигнал приписан остатку аргинина и один — гистидину. Шед и сотр. [62] наблюдали 4 сигнала в области от О до —4 т в водных растворах цианферримиоглобина, химические сдвиги которых проявляют небольшую температурную зависимость, но их отнесение точно неизвестно. Они обнаружили также три дополнительных пика в области от —3 до —141, поло- [c.374]

Взаимодействие антител с их антигенами сравнимо по специфичности со связыванием субстратов с ферментами. Константы диссоциации комплексов, как правило, находятся в инт ервале 10 5—10 8 моль/л [39]. Для выделения антител используются антигены или гаптены (химически модифицированные группы, выступающие в роли иммуноагентов после их присоединения к белкам или синтетическим полипептидам), против которых эти антитела. получены. В табл. 11.1 даны многочисленные примеры. [c.114]

Кроме того, вследствие мутаций в каждой из цепей гемоглобина возможна замена по крайней мере одной аминокислоты. В настоящее время известно около 100 таких мутантов [94, 170]. Изменения в составе гемоглобина можно произвести и искусственно (см. работу 18]) различными способами 1) путем образования гибридов с использованием а- и -цепей из гемоглобйнов различных видов 2) в результате протеолитического переваривания С-концевых остатков под действием карбоксипептидазы и 3) химическим модифицированием, например, сульфгидрильных групп цистеиновых остатков. Можно, разумеется, изменять валентность железа, а также природу шестого лиганда в координационной сфере железа, и даже удается получить гемоглобины, в которых состояние железа в каждой из цепей различно, например, путем смешивания растворов N- и 02. Из многих гемоглобйнов и миоглобинов удается удалить без денатурации белка железопорфириновый комплекс, а затем реконструировать полный белок из белка и порфиринового комплекса, взятых из различных источников, или вместо железопорфиринового комплекса взять при этом порфириновый комплекс другого металла (разд. 7.1 и 7.4). Исследование мутантных форм и химически модифицированных гемоглобйнов существенно расширило наши знания о природе реакций гемоглобина, и в последующих разделах мы часто будем использовать результаты, полученные с помощью мутантных и модифицированных белков. [c.148]

По происхождению их подразделяют на природные, синтетические и химически модифицированные природные. К первой группе относятся природные органические высокомолекулярные соединения (полисахариды — целлюлоза, крахмал, белки, натуральный каучук и др.). Во вторую группу входят высокомолекулярные соединения, получаемые из мономеров (синтетические каучуки, смолы и др.). Третья группа включает природные полимеры, подвергнутые химическим превращ,ениям (эфиры целлюлозы). [c.337]

В зависимости от происхождения высокомолекулярные соединения делятся на оинтетичеокие — получаемые из мономеров (полиэтилен, полистирол и т. д.), природные — созданные природой (натуральный каучук, целлюлоза, белки и др.) и химически модифицированные природные — подвергнутые химическим превращениям природные полимеры (эфиры целлюлозы — ацетилцеллюлоза, нитроцеллюлоза и др.). [c.13]

Малик и Берри [805] использовали реактив для фиксации и окрашивания белков, приготовленный на основе химически модифицированного кумасси яркого синего. 100 мл 2%-ного раствора кумасси яркого синего R-250 смешивают с равным объемом 2 н. серной кислоты и дают отстояться образовавшемуся осадку. К надосадочной жидкости по капля1м приливают 10 н. NaOH до появления голубоватого оттенка и, наконец, добавляют ТХУ до конеч ной концентрации 12 г/100 мл. Хроматографический анализ показал, что образовавшийся краситель отличается от исходного. В гелях, помещенных в полученный раствор, белковые фракции становятся видимыми через 15 мин в течение следующих 15 мин интенсивность окраски возрастает и затем уже не изменяется на протяжении 24 ч. Поэтому для окрашивания гелей данным методом установлено стандартное время — 30 мин, после чего гели переносят в воду, где они и хранятся. Если фон начинает окрашиваться, то достаточно поместить гели на короткое время в 0,2%-ную серную кислоту, чтобы эта окраска исчезла. Однако такую обработку следует [c.156]

Для устранения потерь с промывками образца был предложен твердофазный (ТФ) метод анализа [И] Благодаря ковалентному присоединению изучаемого полипептида к химически модифицированной матрице носителя (па основе стекла или полистирола) исключены потери образца при промывке его органическими растворителями в процессе отщепления аминокислот. Простота конструкции колонки-реактора ТФ-секвепа-тора облегчает ее миниатюризацию, что позволяет повысить чувствительность определения последовательности. В то же время ковалентное присоединение пептидов и белков к носителю в гетерогенной системе пе так просто осуществить, а выходы на этой стадии составляют лишь 20—50%. Реакции связывания белка (пептида) с матрицей носителя проводятся вне секвенатора, они весьма трудоемки и требуют длительного времени. Необходимо отметить, что планирование эксперимен- [c.464]

В ряде случаев белок находится в динамическом равновесии с диссоциированными субъединицами. Это осложняет применение описанных выше методов, но облегчает использование одного дополнительного метода, который иногда оказывается весьма эффективным. Допустим, что существуют два варианта гомоолигомерного белка. Это могут быть белки разных видов, белки из различных тканей [например, лактатдегидрогеназа из сердца (Н) и мышц (М) цыпленка] или нативный и химически модифицированный препараты. Здесь очень важно, чтобы эти два варианта белка несли разные заряды. Пусть для каждого вида белка будет наблюдаться, например, следующее равновесие М 4М и Н 4Н. Смешивание двух видов молекул приводит к образованию целого набора ги- [c.131]

Большой вклад в изучение различных функций Т- и В-клеток внесли исследования, проведенные в конце 1960 - начале 1970 гг. Митчисоном и другими исследователями с использованием химически модифицированных белков. Ими было установлено, что для индукции оптимального вторичного ответа с образованием антител против небольшой молекулы, или гаптена (он обладает иммуногенностью только в том случае, когда связан с белком-носителем), животное необходимо иммунизировать не гаптеном в свободной форме, а конъюгатом гаптен-носитель, и затем повторно ввести тот же конъюгат. Этот феномен был назван эффектом носителя. Исследуя различные клеточные популяции, авторы этих работ обнаружили, что за распознавание носителя ответственны Т-клетки, тогда как гаптен распознают В-лимфоциты (рис. 11.6). Дальнейшие эксперименты были направлены на подробное изучение того, каким образом В-клеточные антитела- [c.199]

Первый подход заключается в том, что вместо Р-нуклеотида в ДНК-зонд внедряется химически модифицированный нуклеотид, например, биотинированная duTP, аналог dTTP. Модифицированные нуклеотиды внедряются стандартным способом, например ник-трансляцией, но с меньщей скоростью. Гибридизованный ДНК-зонд с биотиновой меткой детектируют по его взаимодействию с биотин-связы-вающими белками, такими как авидин или стрептавидин, в комплексе с ферментами, например пероксидазой хрена, кислой и щелочной фосфатазой, дающими окращенные продукты, или же с помощью системы двойных антител, используя сначала антибио-тиновые антитела и затем флуоресцирующее вторичное тело. [c.75]

В соответствии с основным делением химических соединений, по типу входящих в составное звено элементов, можно выделить неорганические, органические и элементоорганические полимеры. По происхождению полимеры бывают природные (встречаются в природе, например, натуральный каучук, крахмал, целлюлоза, белки), модифицированные (дополнительно измененные природные полимеры, например, резина) и синтетические (полученные методом синтеза). По характеру соединения составных звеньев в составе макромолекулы различают полимеры линейные, разветвленные, лестничные, трехмерные сшитые и их видоизменения (рис. 31.1). По отношению к нагреванию выделяют термопластичные и термореактивные (см. ниже). По типу химической реакции, используемой для получения, различают полимеризационные (реакция полимеризации) и поликон,ценсационные (реакция поликонденсации) полимеры. [c.603]

Чрезвычайно активным флавинсодержащим ферментом митохондрий животных является сукцинатдегидрогеназа [реакция (8-49)]. Этот фермент не только сам прочно встроен в мембраны крист митохондрий, но и содержит флавин, прикрепленный к белку с помощью ковалентной связи. Недавно была выяснена химическая природа этой связи выделен модифицированный FAD, содержащий 8a-(N-3-ги тидил)-рибофлавин [103—105] [c.259]

Из изложенного материала по стратегическим возможностям синтеза пептидов и белков можно сделать вывод, что в настоящее время химический синтез модифицированных пептидов ограничен примерно 100 аминокислотными остатками. В то же время значительно вырос интерес к модифицированным белкам для молекулярно-биологических и медицинскшс исследований. Хотя с помощью методов химического синтеза можно получать некоторые небольшие белки, необходимые для этого затраты не идут ни в какое сравнение с достигнутыми результатами. Кроме того, в настоящее время только очень немногие высокоспециализированные лаборатории в состоянии проводить такие синтезы. [c.218]