Дот-блот

Дот-блот позволяет ответить только на один вопрос есть ли в данном образце искомая последовательность как правило, дот- [c.96]

Методика дот-блот гибридизации ДНК. Исследование проводят в несколько этапов. [c.97]

Дот-блот гибридизация РНК проводится практически по той же схеме, но для денатурации РНК используют глиоксаль или формальдегид, а гибридизацию проводят при 42 °С. [c.97]

Таблица 9.4. Дот-блот-анализ вирусной РНК

Дот-блот-анализ вирусной РНК [c.297]

Титр вируса в культуральной среде инфицированных клеток можно определить с помощью целого ряда методик, в основе которых лежат физические, биохимические или биологические методы анализа. Наибольшее распространение получил способ, заключающийся в количественном определении вирусной геномной РНК в культуральной среде с помощью гибридизации с меченным ДНК-зондом. Эту стандартную процедуру дот-блот-гибридизационного анализа проводят после концентрирования препарата вируса, как описано в табл. 9.4. Количественное определение достигается путем сравнения интенсивности полученного гибридизационного сигнала с интенсивностью контрольных сигналов гибридизации точно титрованного вируса (разд. 9.6.1.3) или известных количеств РНК, или ДНК, нанесенных на фильтр. Используя разные ДНК-зонды, можно оценить концентрацию индивидуальых компонентов в вирусном препарате и непосредственно определить, содержит ли вирус интересующие нас последовательности. [c.297]

Метод анализа выделенной ДНК выбирают, исходя из природы трансгена. Если трансген имеет гомологию с каким-либо участком генома мыши, используют блот-гибридизацию [26, 28[. Если же гомология с мышиной ДНК отсутствует или она незначительна, можно ограничиться дот-блот- или слот-блот-анализом [29]. [c.343]

Слот (и дот)-блот-анализ относится к экспресс-методам, т. е. он относительно прост и требует немного времени. Однако этот вид гибридизационного анализа применим лишь в случае [c.346]

Таблица 10.12. Слот (или дот)-блот-гибридизация геномной ДНК

Аппарат для блоттинга (Слот-блот или Дот-блот). [c.216]

Б. Анализ методом дот-блот [c.33]

В большинстве случаев, однако, невозможно выполнить многие из этих требований. Часто не удается найти подходяш,ее растение, на котором образуются локальные поражения. В этих случаях для контроля количества вируса можно использовать метод дот-блот гибридизации (см. разд. 3.8). [c.13]

Обнаружение вирусов методом дот-блот гибридизации [c.29]

Рис. 3.6. Иммунофлуоресценция клеток, зараженных вирусом денге, после дот-блот гибридизации. В этом случае клетки не распластываются, как в монослое. Зараженные клетки дают яркую иммунофлуоресценцию (на фотографии они белые)

Инкубируйте образцы РНК при 65 °С в течение 5 мин нанесите на фильтр аликвоты по 5 мкл (для этой цели можно использовать аппарат для дот-блот-гибридизации minifold фирмы S hlei her and S huell). [c.296]

Использование основных приемов работы с рекомбинантной ДНК и методик анализа белков и нуклеиновых кислот позволяет клонировать гены и изучать их организацию (блоттинг-гибридизация по Саузерну), строение мРНК (нозерн-блоттинг),. а также следить за уровнем экспрессии генов в различных условиях окружающей среды и даже в процессе развития. Например, в некоторых случаях уровни транскрипции гена определяют методом дот-блот-гибридизации выделенной РНК (разд., 6.3). Более подробные качественные исследования транскрипционной активности осуществляют с помощью нозерн-блоттинга (приложение 6 [I]). 5 - и З -концы транскриптов определяют, используя Sl-картирование [2, 56]. Однако такие методы анализа позволяют установить только строение транскрибируемой области или гена, а также механизмы процессинга транскриптов и их трансляции. Функцию любых участков вне транскрибируемой последовательности в некоторой степени можно изучать, сравнивая гены, обладающие сходными механизмами регуляции. При этом большинство предположений о воздействии на экспрессию гена остаются исключительно в области догадок. В этом случае генетическая трансформация предоставляет исследователю, работающему с растениями, уникальную-возможность непосредственно отвечать на фундаментальные вопросы, касающиеся регуляторной функции последовательностей, расположенных как в непосредственной близости, так и на некотором расстоянии от 5 - и З -концов транскрибируемого-гена. Используя разнообразные методы мутагенеза in vitro и технологию рекомбинантных ДНК, удается, модифгщировать клонированные гены и затем после введения мутантного гена-путем генетической трансформации обратно в растения анализировать влияние изменения этого гена на его экспрессию.. Подобные методики способствовали изучению нуклеотидных [c.307]

В общем смысле под иммуноблоттингом понимают анализ смеси белков, перенесенных на твердую подложку-мембрану, с которой они связываются ковалентными связями, с последующей иммунодетекцией. Анализировать можно смесь белков, непосредственно нанесенную на подложку, — дот-блот анализ (от англ. dot — пятнышко) — либо после ее предварительного фракционирования методами электрофокусирования, диск-электрофореза или двумерного электрофореза — Вестерн-блот анализ (Western blotting). Такая методология применяется также для отбора клонов бактерий, фагов или вирусов, экспрессирующих продукты целевых клонированных генов. Перенос белков на мембрану осуществляется либо пассивно, либо с использованием аппаратуры для электропереноса. На эффективность переноса белков на мембрану влияет множество факторов, таких как молекулярная масса белков, пористость геля, время переноса и состав используемого буферного раствора (транс-буфера). В зависимости от задач и условий проведения эксперимента подбираются условия переноса, обеспечивающие наилучшие результаты. [c.57]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология