ДНК-сегменты клонированные

Реассортантные реовирусы служат мощным инструментом для определения генетической обусловленности различных свойств реовирусов. Если реовирусы двух серотипов различаются по биологическим свойствам, то для определения генетических основ этих различий можно использовать реассортанты, содержащие различные комбинации генов исходных вирусов. Генотип реассортантов можно точно определить, используя данные по электрофоретической подвижности сегментов геномной РНК. Это позволяет установить происхождение каждого гена. Разные реассортанты можно клонировать из отдельных бляшек и выращивать независимо. При выборе реассортанта для биологических [c.325]

Таким образом, созданная серия векторов рВК позволяет клонировать широкий спектр сегментов ДНК. [c.93]

Громадные потенциальные возможности этой методологии обусловлены не только тем, что с ее помощью можно конструировать и реплицировать рекомбинантную ДНК, но и тем, что она позволяет клонировать отдельные рекомбинантные молекулы ДНК. Рассмотрим, например, что получается в результате объединения смеси случайных сегментов ДНК какого-либо организма с векторной ДНК (рис. 11.13). Ассортимент всех возможных рекомбинантов чрезвычайно разнообразен каждый рекомбинант содержит какой-то определенный сегмент [c.203]

Один из клонирующих векторов системы слияния, сконструированных для получения специфических антител, содержит 5 "-концевой сегмент гена ompF Е. соН, кодирующего один из наружных мембранных белков, и прилегающую к нему часть гена la Z (Р-галактозидазы) Е. соИ (рис. 6.7). Этот сегмент содержит информацию, необходимую для инициации транскрипции и трансляции химерного гена, а также для секреции химерного белка. Несмотря на то что укороченный ген la Z лищен кодонов для первых восьми аминокислот, кодируемый им белок сохраняет ферментативную активность. В такой [c.113]

Рис. 6.7. Клонирующий вектор системы слияния. Он содержит ген устойчивости к ампициллину (Атр ) в качестве селективного маркера, 5 -концевой сегмент гена ompF, кодирующий N-конец наружного мембранного белка, сайт для рестрицирующей эндонуклеазы АЬс и укороченный ген -галактозидазы (la Z). Ген, который хотят клонировать, встраивают в Ab l-сайт. После транскрипции и трансляции этой генетической конструкции образуется трехкомпонентный химерный белок.

Вставка (Insert) Сегмент ДНК, встроенный в клонирующий вектор. [c.545]

Отобранные сегменты ДНК можно клонировать in vitro посредством полимеразной цепной реакции 341 [c.513]

Рис. 2 дает представление о размерах хромосомных сегментов, в пределах которых работают различные современные методы генетических исследований. Ось ординат представляет собой логарифмическую шкалу физических расстояний, измеренных в парах (или в тысячах пар) нуклеотидов (п.н. или т.п.н,). На шкале приведены и значения генетических расстояний, измеряемые в сантиморганидах (сМ). 1 сМ приблизительно равна 10 п. н. Однако это соотношение нельзя считать универсальным, ибо зависимость между генетическим и физическим расстоянием на хромосоме имеет нелинейный характер, на нее могут оказывать влияние горячие точки рекомбинации. Наличие таких областей может привести к ситуации, когда сравнительно большому генетическому расстоянию соответствует небольшой отрезок на физической карте. В то же время в геноме существуют участки, рекомбинация в которых маловероятна, а это приводит к обратной ситуации. Как показано на рис. 2, классические методы молекулярной генетики хорошо работают на последовательностях длиной до 50 г. п. н., что соответствует максимальному размеру вставки в космидный вектор. Участки большей длины можно клонировать путем прогулки по хромосоме , когда, используя уже клонированные последовательности, геномную библиотеку скринируют с целью получения перекрывающихся клонов. Таким способом удаётся анализировать последовательности длиной до нескольких сотен т. п. н. Однако, в [c.96]

У D. melanogaster примерно 160 генов 5S-pPHK собраны в тандемный повтор в хромосоме 2. Каждая повторяющаяся единица содержит упомянутый выше кодирующий участок длиной 120 п.н., транскрибируемый спейсер длиной примерно 15 п.н. на З -конце транскрипционной единицы и нетранскри-бируемый спейсер длиной 250 п.н. (рис. 9.7). По-видимому, все 160 повторяющихся единиц образуют единый, ничем не прерываемый кластер. Свыще 20 тандемных повторов было клонировано в виде одного сегмента длиной более 8 т. п. н. АТ-богатый участок в спейсере содержит внутренний повтор и имеет разную длину (примерно + 5 п. н.). [c.166]

Впервые Alu-последовательности были выделены и клонированы (случайным образом) из ДНК человека (рис. 9.41), и исходя из этих данных была построена каноническая последовательность. Затем клонированные члены Alu-семейства использовали в качестве зондов для определения числа копий методом кинетики реассоциации. Было обнаружено 9 10 копий Alu-последовательностей на гаплоидный геном (или около 9% геномной ДНК человека). В среднем на каждые 5 т.п.н. генома человека и других приматов Старого Света приходится одна Alu-последовательность. С Alu-зондами гибридизуется ДНК более 90% рекомбинантных фагов, содержащих хромосомную ДНК человека, а больщинство из клонированных сегментов длиной 15-20 т.п.н. содержит более одного члена Alu-семейства. Соседние Alu-последовательности могут располагаться друг относительно друга в любой ориентации, поэтому некоторые из них входят во фракцию схлоп-нувщейся геномной ДНК. Например, из восьми Alu-последовательностей в пределах сегмента ДНК длиной 65 т.п.н, которые входят в состав мультигенного семейства генов -глобина, пять ориентированы в одном направлении, а три-в другом (рис. 9.42). [c.202]

ИХ рестриктазами, разделяются электрофоретически на агарозе или полиакриламидном геле. Специфические фрагменты ДНК обнаруживаются затем путем гибридизации с помощью проб радиоактивно меченной нуклеиновой кислоты. Гибридизацию проводят после того, как фрагменты нуклеиновой кислоты будут физически перенесены с геля на мембранный фильтр (процедура, получивщая название перенос пятен , англ. blotting). Перенос производится таким образом, чтобы зафиксировать расположение пятен, которое было на геле. Это позволяет локализовать сегменты ДНК, комплементарные выбранной радиоактивной нуклеиновой кислоте (обычно РНК). Если для определенного белка радиоактивная РНК является информационной, то метод позволяет выделить ген этого белка. После идентификации гена его можно связать с соответствующим вектором клонирования и клонировать выращиванием в подходящем бактериальном штамме. [c.321]

Таким образом, применение многокопийных векторов позволяет во многих случаях иметь в клетке очень высокий уровень белковых продуктов клонированных генов. Именно поэтому некоторые сегменты ДНК не могут быть клонированы в таких векторах, поскольку детерминируемые ими белки при повышенной продукции вносят значительные нарушения в физиологию бактериальной клетки. Обычно эти гены удается клонировать в низкокопийных векторных ДНК, например в плазмиде pS lOl и ее производных, или в многокопийных векторах экспрессии со строгим регулированием транскрипции. В последнем случае необходимо клонировать не весь ген, а только его кодирующую часть. [c.142]

Множественные копии амплифицированной последовательности локализованы в одной или реже в нескольких хромосомах. Амплифицированная область хромосомы может содержать до нескольких сотен последовательностей изучаемого гена. При этом наряду с прямыми повторами могут быть и инвертированные, а также иногда наблюдаются перестройки в амплифици-руемых последовательностях. Эффективность амплификации интегрированного в геном клетки гена и стабильность хромосом, содержащих амплифицированный ген, существенно зависят от места интеграции трансформирующего гена (эффект положения гена). Обнаружено, что в амплифицируемом сегменте ДНК находится участок инициации репликации (ori) хромосомной ДНК. Это позволяет из ДНК линий клеток с высокой степенью амплификации изучаемого сегмента достаточно просто выделять рестрикционный фрагмент, содержащий данный хромосомный ori, и клонировать его. [c.344]

Многие рестриктирующие эндонуклеазы разрезают молекулу ДНК несимметрично, в результате чего образуются взаимно комплементарные одноцепочечные концы. Любые два сегмента ДНК, имеющие такие концы, могут рекомбинировать in vitro. Если один из сегментов способен реплицироваться в соответствующей клетке-хозяине, то вся рекомбинантная молекула может быть клонирована и амплифицирована. В приведенном примере плазмидные ДНК соединены с двумя фрагментами, полученными с помощью рестриктирующих эндонуклеаз (верхняя часть рисунка). [c.209]

Типичный вектор, сконструированный на основе фага М13. В некодирующую область фагового генома встроена часть /ас-оперона со//. Затем в ген 1ас1 встроен сегмент длиной 42 п.н., содержащий несколько сайтов для эндонуклеаз рестрикции (полилинкер, или мульти-клонирующий сайт). [c.245]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология