Определение радиоактивности белка

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РАДИОАКТИВНОСТИ БЕЛКОВ ПОСЛЕ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА В ПААГ [c.109]

Определение количества фосфорилазы а. Из реакционной смеси отбирают аликвоты и помещают их на диски фильтровальной бумаги (ватман 3 ММ). Белок, нанесенный на фильтры, фиксируют 20%-ным раствором трихлоруксусной кислоты, после чего фильтры тщательно отмывают от не связанной с белком радиоактивной метки несколько раз сменяемым раствором 5%-ной трихлоруксусной кислоты. Затем фильтры обрабатывают смесью абсолютного спирта и ацетона (1 1) и подсушивают в термостате при 70—80° С (или на воздухе). Сухие фильтры помещают во флаконы со сцинцилляционной жидкостью. Определение радиоактивности проводится методом жидкостной сцинцилляционной спектрометрии. [c.224]

Определение радиоактивного иода, связанного белком, с помощью анионита [460]. [c.232]

Определение связанного белком радиоактивного иода с помощью анионообменных смол [468]. [c.232]

При использовании бумаги и тонких слоев сорбента методы определения радиоактивности остаются теми же, что и при соответствующих хроматографических разделениях. Однако при использовании других носителей, особенно полиакриламидного геля, требуется вносить изменения в методы измерения активности разделенных веществ. В связи с тем что в последнее десятилетие резко возросло использование полиакриламидных гелей и подобных им веществ для разделения меченых соединений, особенно нуклеиновых кислот и белков, большое внимание было уделено методам определения радиоактивности на таких носителях. [c.132]

На ранних этапах изучения инфекционной РНК ВТМ важно было установить отсутствие в ней вирусного белка с большей точностью, чем это позволяет чувствительность описанных методов. При использовании стандартных методов выделения нуклеиновых кислот содержание белка в выделенном препарате редко бывает ниже 1 %, а в случае ВТМ это соответствует комплексу одной молекулы РНК ВТМ с одной субъединицей оболочечного белка. Однако если выделять РНК в присутствии бентонита, то загрязнение препарата белком значительно снижается. А в случае ВТМ содержание примеси можно снизить еш,е больше (до 1 белковой субъединицы на 20—50 молекул РНК), если использовать метод реконструкции вируса (см. ниже). Определение следовых количеств примесей всегда сопряжено с трудностями методического характера, а достоверность результатов, полученных с помощью различных тестов на минимальных концентрациях веществ, сомнительна. Для определения примеси белка в препаратах вирусных нуклеиновых кислот были поставлены опыты с радиоактивной меткой ( 8) белка. Все, что удалось извлечь из этих опытов, сводится к тому, что содержание остаточного белка, судя по количеству метки, соответствует 0,04% (при пересчете на содержание серы в белковой оболочке ВТМ). Действительно, то соотношение аминокислот, которые в следовых количествах были обнаружены в препаратах нуклеиновых кислот, не соответствует количественным соотношениям этих же аминокислот в белковой оболочке. Тот факт, что препараты, содержащие 0,04 и 1% белка, не различаются по своей инфекционности (на 1 мг РНК), убедительно доказывает, что инфекционность — свойство, присущее вирусной РНК [142, 455]. Положение это убедительно было доказано только для РНК ВТМ. Однако нет никаких оснований сомневаться в том, что вывод этот носит общий характер и что инфекционность всех вирусов заключена в их нуклеиновых кислотах. [c.179]

Существуют три основных методических подхода для решения этой задачи. Первый способ — избирательное окрашивание нейронов, выделяющих определенный нейромедиатор, может осуществляться с помощью преобразования естественного медиатора в его флуоресцирующее производное. В этом случае флуоресценция определенных групп клеток поможет выявить специфические связи в структурах мозга. Второй экспериментальный подход связан с введением молекул медиатора, предварительно меченного радиоактивным изотопом. Нейронные окончания, содержащие исследуемый медиатор, способны избирательно захватывать метку. Затем их легко выявить методом авторадиографии. Третий способ обнаружения специфических связей в нервной системе состоит в использовании высоко специфичной способности узнавать либо антигенные детерминанты медиатора, либо определенные ферментные белки, участвующие в метаболизме нейромедиаторов, либо нейрорецептор-ные компоненты на мембране клетки. Последние считаются наиболее убедительным свидетельством в пользу существования конкретных нейрохимических взаимодействий межцу клетками и зонами мозга. Обычно для иммунохимической идентификации используют флуоресцентный краситель или изотоп, который маркирует антитела. В последние годы широко распространились методы, использующие антитела, меченные частицами тяжелых металлов, например коллоидного золота, железа и др. [c.224]

Образцы, содержащие соли, нельзя наносить в реактор секвенатора, так как это может привести к вымыванию всего образца. Это легко прослеживается при анализе радиоактивно меченных препаратов — в продуктах первых двух-трех циклов отщепления радиоактивность постоянно и сильно уменьшается, достигая в конце концов уровня фона. Поэтому следует избегать присутствия солей в реакторе секвенатора. В последние годы часто наносят образцы в присутствии ДСН. Хотя этот прием не получил очень широкого распространения в нашей лаборатории, наличие до 1% ДСН оказывается обычно полезным для растворения образцов, в особенности мембранных белков, выделенных из ДСН-гелей, без ущерба для последующего определения структуры белка. [c.426]

Содержание белка в зоне, введенной в колонку, должно быть минимальным (разд. 3.1). Для проведения анализов с зональным элюированием, когда работают с очень небольшими количествами подвижного компонента, преимущественно используют чувствительные методы детектирования, такие, как определение радиоактивности, радиоиммунный и ферментативный анализ. [c.221]

ДСН. Обычно для полной элюции достаточно держать кусочек в этом растворе при перемешивании в течение 12 ч при 37°С. Часть полученного элюата можно использовать для повторного электрофореза, часть — для определения радиоактивности, а остальное ренатурировать, удалив ДСН (см. разд. II, Н). Выделенными белками (даже не удаляя ДСН) можно иммунизировать животных для получения антител. [c.113]

Помимо определения эффективности белкового синтеза в бесклеточной системе по включившейся в белки радиоактивности, часто возникает необходимость в анализе синтезированных радиоактивных белков. Для проведения такого анализа синтезированные белки необходимо выделить из системы и отделить от нерадиоактивных белков. С этой целью мы применили обработку системы после инкубации концентрированным раствором мочевины при высокой ионной силе (А. Е. Берман и др., 1972). [c.357]

Как было описано в гл. 5, для определения радиоактивности макромолекул почти всегда необходимо предварительно отделить радиоактивные макромолекулы от малых радиоактивных молекул и сконцентрировать образец до небольшого объема, чтобы избежать разбавления сцинтиллятора или добавления воды. Обычно это производят путем осаждения хлорной или трихлоруксусной кислотой (соляную кислоту можно применять для полинуклеотидов, но она неэффективна для белков). После подкис-ления осадки можно быстро отделить на фильтрах из нитроцеллюлозы или стекловолокна, после чего промыть, используя прибор, показанный на рис. 7-2. Для счета жидкостным сцинтилляционным методом следует использовать стекловолокно, поскольку оно приводит к некоторому увеличению эффективности счета и может быть высушено при высокой температуре без обугливания, которое иногда вызывает световое тушение (гл. 5). При ис пользовании счетчиков Гейгера — Мюллера оба типа фильтров эквивалентны. [c.159]

В этой главе было описано использование мембранных фильтров в ряде отраслей биомедицины. Мы показали, что мембранные фильтры находят широкое применение в биомедицинских исследованиях как в своей обычной роли в качестве фильтрующих, так и в менее привычных ролях, а именно в качестве подложек при изучении белков и нуклеиновых кислот. Возможно, одна из наиболее широких областей применения мембранных фильтров связана с количественным определением радиоактивных веществ с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика, хотя в некоторых случаях, оказывается, лучше использовать стекловолоконные фильтры. Важным достижением в области молекулярной биологии стало применение мембран из нитроцеллюлозы для гибридизации нуклеиновых кислот. Без разработки методов гибридизации с помощью мембранных фильтров было бы значительно задержано развитие технологии рекомбинантных ДНК. [c.331]

Эти свойства ферментов обусловлен весьма сложным механизмом их действия, многие стороны которого еще до конца не раскрыты. Представления о механизмах ферментативного катализа получили наиболее существенное развитие лишь в последние 10—20 лет. Еще в начале XX в. считали,- что биокатализаторы не принадлежат ни к одному из известных классов органических соединений. Более того, многие ученые полагали, что существует определенная связь между высокой эффективностью биокатализа и открытым в то время явлением радиоактивного излучения [8]. Лишь в 1926 г. Самнер установил, что ферменты представляют собой белки. [c.7]

Аминокислотный состав белков. — Анализ гидролизата белков, содержащего до двадцати различных аминокислот (см. табл. 39), является чрезвычайно сложной задачей. Риттенберг (1940) разработал метод изотопного разбавления, согласно которому радиоактивную кислоту определенной удельной активности, например меченую глутаминовую кислоту, добавляют в известном количестве к анализируемой смеси, после чего выделяют глутаминовую кислоту обычным образом. Так как химические свойства природной и меченой кислоты одинаковы, то выделяемое вещество является смесью добавленной аминокислоты и первоначально присутствовавшей в пробе. Количество кислоты в гидролизате вычисляют по изотопному составу выделенной кислоты. Если добавляется рацемическая меченая кислота, то аминокислоты гидролизата перед выделением рацемизуют или же из выделенного рацемата отделяют чистую -форму. Точность анализа не зависит от метода выделения, выхода кислоты или концентрации ее в гидролизате. [c.655]

Перед определением активности готовится среда инкубации и делается необходимое разведение протеинкиназы. К рассчитанному объему буфера Г добавляют нерадиоактивный цАМФ до концентрации 1 мкМ радиоактивный цАМФ добавляется в таком количестве, чтобы в 10 мкл смеси был счет радиоактивности около 30 000 имп/мин (10 мкл из среды инкубации наносят на фильтр, сушат и просчитывают в сцинтилляторе ЖС-106). Разведение фермента проводят в отдельных пробах так, чтобы в 20 мкл раствора содержалось по 10, 20, 30, 40, 50 мкг белка соответственно. Среду инкубации раскапывают по 95 мкл в инкубационные пробирки. К пробам добавляют по 20 мкл соответствующего раствора протеинкиназы (в контрольную пробу добавляют 20 мкл буфера). Пробы инкубируют в холодильнике (или во льду) в течение 1,5—2 ч. [c.331]

Перед определением активности готовят среду инкубации и делают соответствующие разведения фермента. К рассчитанному объему буфера Е добавляют АТФ до конечной концентрации 50 мкМ, гистон Н1 — до концентрации 3 мг/мл, цАМФ — до концентрации 10 мкМ, радиоактивный АТФ — в таком количестве, чтобы счет радиоактивности в 10 мкл среды составлял около 40 000 имп/мин (10 мкл среды наносят на фильтр, высушивают и просчитывают в сцинтилляторе ЖС-106 в фосфорном канале). Фермент разводят таким образом, чтобы в 20 мкл раствора было по 2, 3, 5, 7, 10 мкг белка соответственно. Фильтры нумеруют, надписывая их простым карандашом. [c.332]

Поскольку при температуре 80° экстракция пуклеиновых кислот из клеток А. aerogenes, но-видимому, происходит без потери осаждаемого-белка, то в описываемой далее методике экстракцию нуклеиновых кислот рекомендуется производить при температуре между 80 и 90°, хотя и в этих условиях из некоторых тканей ДНК полностью не экстрагируется (см. следующий разд.). Тем не менее это не должно приводить к существенным ошибкам при последующем определении радиоактивности белка в большинстве различных объектов. [c.142]

Потери при экстракции липидов. Робертс и др. [1] установили, что около 17% белка Es heri hia oli растворяется в теплом этаноле. Однако, как они показали, при низких значениях pH этанолом экстрагируется значительно большее количество белка. В описанной здесь методике перед экстракцией теплым этанолом фильтры промывают этанолом на холоду для удаления остаточных количеств кислоты. Нри определении радиоактивности белков А. aerogenes по этой методике потерь белка не наблюдалось. [c.143]

ОПРЕДЕЛЕНИЕ РАДИОАКТИВНОСТИ БЕЛКОВ НОСЛЕ ЭЛЕКТРОФОРЕЗА В НААГ [c.109]

Нижеследующее описание касается определения радиоактивности в микрофракциях белка, содержащих аминокислоты, меченые тритием ( Н). Метод определения удельных радиоактивностей Н-пуринов и Н-пиримидинов был описан Кенигом и Братгардом [23]. Принцип этого определения заключается в том. что радиоактивность трития определяется после сжигания образца. При таком методе самопоглощение сильно уменьшается или вообще отсутствует. При анализе белка мы использовали этот же принцип и ту же методику с некоторыми модификациями. [c.286]

Очевидно, что более высокие концентрации аминокислот приведут к более высокому проценту их включения до определенного уровня насыщения. Чтобы количественно сравнить включение меченых аминокислот (выраженное, например, через удельную радиоактивность фракционированных и нефракционированных белков из исследуемых участков мозга), надо внести поправки на влияние колебаний в концентрации меченых аминокислот. Следовательно, необходимо знать математическую зависимость между удельной активностью белка и концентрацией меченой аминокислоты в тех клетках, из которых выделены эти белки. Если же эта зависимость известна, то удельную радиоактивность белковых фракций в микрогеле можно соотнести с той же концентрацией аминокислот. Таким образом, станет возможным количественное сравнение вклкхчения предшественников. Чтобы установить, существует ли линейная зависимость между удельной радиоактивностью белка и концентрацией свободных аминокислот, и определить возможный диапазон такой зависимости, мы поставили следующие эксперименты (см. схему 1). [c.292]

Пташке надеялся, что в этих условиях значительная часть остаточного синтеза белка будет приходиться на образование продукта гена с1 супер-инфицирующими бактериофагами, так как синтез белков клетки-хозяина был подавлен предварительной обработкой, а синтез большинства вегетативных белков фага не мог происходить из-за присутствия эндогенного иммунитетного репрессора. Действительно, после экстракции и хроматографического фракционирования радиоактивных белков из таких клеток оказалось, что одну из фракций можно идентифицировать как продукт гена с1. Эта фракция обнаруживалась, только если бактерии заражали бактериофагами Яс1+, содержащими нормальный ген репрессора, и отсутствовала при заражении атйег-мутантами по гену с1. Определение скорости седиментации этой белковой фракции в градиенте плотности сахарозы показало, что ее молекулярная масса соответствует длине полипептидной цепи примерно в 200 аминокислот, т. е. близка к молекулярной массе одной из четырех субъединиц, составляющих /ас-репрессор. [c.492]

Метод элюции радиоактивных веществ из фрагментов разрезанной поддерживающей среды с последующим ее удалением и определением радиоактивности в жидкостном сцинтилляцион-ном спектрометре [82] нашел широкое распространение, хотя он трудоемок и занимает много времени. Белки можно элюировать [c.207]

Контроль за ходом процесса протеолиза в суспензии может осуществляться измерением поглощения образовавшихся пептидов в небольшой пробе супернатанта (после отделения осадка) при 280 нм или определением радиоактивности [ С]карбокси-метнлцнстеина. О завершении гидролиза судят по исчезновению полосы исходного белка в полиакриламидном геле. Во время проведения анализа основную массу гидролизата хранят при — 20°С, и в случае, если процесс прошел неполно, образец размораживают и протеолиз продолжают. На конечной стадии нерастворимые пептиды отделяют цептрифугированием и обе части гидролизата лиофилизуют. Целесообразно нерастворимые пептиды подвергнуть повторному гидролизу с большей нагрузкой фермента и присоединить образовавшиеся пептиды к основной массе (см. также гл. 3). [c.351]

В качестве примера рассмотрим определение активности NPT-II в тканях моркови, трансформированной nos-npt-II, и тканях табака, трансформированных ШС-npt-II. В тканях моркови, трансформированных nos-npt-II, выявляется небольшое количество NPT-П, которая обычно обладает той же подвижностью, что и нормальный бактериальный фермент (рис. 6.15, фильтр А, дорожки 3, 4 и 1 соответственно). В тех же образцах присутствуют и другие фосфофилазы, которые в результате реакции обусловливают появление радиоактивных белков. Некоторые из этих белков обладают сильным сродством к бумаге Р81 и связываются с ней, что дает на радиоавтографе неспецифические пятна. Такие пятна до отмывания можно удалить с бумаги Р81, обработав ее протеиназой (стадия 10), после чего выявляется лишь фос-форилирующая активность, обусловленная NPT-П (рис. 6.15, фильтр Б). [c.355]

Италия. В Италии широко применяется иммуноанализ, причем здесь предпочтение отдается другим методам. В настоящее время в Италии более 80% всех иммуноанализов выполняются с использованием радиоактивной метки. Ферменты используются в качестве маркеров в анализах на антитела к ВИЧ, однако другие аналитические системы с использованием ИФА н ФИА в лабораториях Италии находят ограниченное применение. Выполняется большой объем работ по определению специфических белков, но основной акцент в этой области сделан на иммунонефелометрию ОИНМА). В Италии с помощью иммунонефелометрии выполняется вдвое больше анализов (около 13 млн. в год), чем в ФРГ, хотя число пациентов в Италии меньше. [c.17]

Количество белка в сухом осадке определяют по методу Лоури (Lowrey, 1951) и путем взвешивания. Полученный белок используют для определения радиоактивности и аминокислотного состава. [c.92]

Гидролиз белков проводили в 6 н, растворе НС1 в стеклянных запаянных ампулах при 100 °С в течение 20—24 ч. Далее гидролизаты упаривали, несколько раз промывая дистиллированной водой. Сухой остаток растворяли в 3 мл дистиллированной воды. 0,1 мл этого раствора использовали для определения общей радиоактивности белков и 2,5 мл для определения С-окси-пролина (см. Т. В. Замараева, с. 265). О степени ферментативного гидроксилирования пролиновых остатков С-поотоколлагена судили по отнощению образующегося радиоактивного оксипролина к общей радиоактивности субстрата, выраженному в процентах. [c.273]

Радиоактивность завершенных полипептидных цепей определяют после следующей процедуры к постмитохондриальной надосадочной жидкости (Su) добавляют ПВС и тритон Х-100 до конечной концентрации соответственно 0,01 и 2%. Затем наслаивают 3 мл S на 2 мл 15% раствора сахарозы, содержащего те же соли, что и буфер А. Центрифугируют при 105000 g (ротор Ti 50 центрифуги Спинко L 2.50 при 40 ООО об/мин) в течение 27г ч при 3°С. Надосадочную жидкость сливают и из нее берут пробы для определения количества белка (по Лоури), ДНК (по А. С. Спирину, 1958) и радиоактивности завершенных полипептидных цепей. Находящиеся в осадке полирибосомы суспендируют в воде, содержащей 0,01% ПВС, и берут пробы для определения концентрации материала и удельной радиоактивности. Все пробы освобождают от сорбированной радиоактивности и С-аминоацил-тРНК при добавлении равного объема 0,2 М раствора NaOH и инкубации в течение 5 мин при комнатной температуре. Радиоактивность проб измеряют после осаждения их 10% раствором ТХУ на миллипоровые фильтры в толуоловом сцинтилляторе. Кислоторастворимую фракцию гомогената тканей собирают для определения удельной радиоактивности пула используемых меченых предшественников. Для удаления ТХУ кислоторастворимую фракцию промывают эфиром до pH 5,0, лиофилизируют и исследуют в аминокислотном анализаторе. Фракции, содержащие меченые аминокислоты, собирают, их радиоактивность измеряют в жидкости Брея. [c.289]

К системе, оставшейся после отбора проб для определения радиоактивности, добавляют 3 объема 8 М раствора мочевины, содержащей 2 М Na l. Смесь оставляют в холодильнике на 2—3 дня, после чего агрегированный материал осаждают центрифугированием при 105000 g в течение часа и отбрасывают. Надосадочную жидкость прогревают в водяной бане при 90 "С в течение 20 мин, затем охлаждают и диализуют в течение ночи против проточной водопроводной воды и 4 ч против дистиллированной воды. Диализат центрифугируют при 105000 g в течение часа и собирают прозрачную надосадочную жидкость, которая содержит экстрагированные радиоактивные белки. Указанная обработка позволяет выделить до 40% синтезированных в системе полипептидов, осаждаемых ТХУ. [c.357]

Перенос белков и нуклеиновых кислот из геля на нитроцеллю-лозный фильтр или диазобумагу путем вымывания, диффузии или электрофореза был рассмотрен в части П данной книги и подробнее — при описании электрофореза. Перенесенную на такой фильтр радиоактивность можно тестировать авторадиографически и просчитать, как описано выше. Иногда перенос носит почти количественный характер. Однако, как правило, приемы такого переноса используют не для определения радиоактивности, а для выделения определенных фракций препарата в целях дальнейшей обработки их на фильтре (иммунотестирования, гибридизации и др.). [c.223]

Вопросы фиксации, окраски и других методов обработки белков после электрореза, как и способы определения радиоактивности и элюции белков, рассмотрены отдельно ниже. [c.53]

В обзоре [44] в сжатой форме обобщены разультаты исследования полимеризации, ассоциации и агрегации молекул и макромолекул методами светорассеяния. В работах [67, 73] на примерах мицелл и заряженных белков обсуждаются взаимодействия между частицами и их влияние на результаты определения размеров частиц методом СКУРС. Интересно, что при исследовании иммуноаналитической реакции динамические методы светорассеяния, в частности ФКС, дают 100-кратное (а в режиме ингибирования даже 1000-кратное) увеличение чувствительности по сравнению с обычными методами иммуноанализа. По чувствительности рассматриваемые оптические методы сравнимы с радиоиммуноанализом, но в них не используются радиоактивные реагенты, не требуется предварительного разделения связанного и несвязанного антигена и можно анализировать образцы объемом до 1 мкл [26, 104, 105]. В работе [90] с помощью скоростной лазерной нефелометрии контролировали реакцию иммуноосаждения. Применению методов светорассеяния для определения специфических белков посвящен обзор [80]. Разработан также другой оптический метод иммуноанализа, в котором измеряют свет, отраженный от покрытой антителами силиконовой поверхности под углом, близким к псевдобрюстеровскому [2]. [c.547]

Эти процессы приводят к образованию рацемических смесей. Однако считается, что при спонтанной кристаллизации происходило разделение смесн. Наиболее вероятно, что разделение проходило случайным образом. Видимо, определяющую роль в разделении оптически активных соединений путем селективного комплексоебразования одного определенного стереоизомера играли минералы, как, например, природные асимметричные кристаллы кварца, и ионы металлов. В конце К01Щ0В, стереоселективная полимеризация олефинов на поверхности металлов (катализаторы Циглера — Натта) представляет собой хорощо изученный промышленный процесс для получения изотактических полимеров. Известно также, что связывание ионов металлов весьма важно для многих биохимических превращений. Такое связывание существенно для поддержания нативной структуры нуклеиновых кислот и многих белков и ферментов. Процесс отбора оптических изомеров мог происходить вследствие других физических явлений, например взаимодействие с радиоактивными элементами, радиация или космические лучи. Недавно проведенные эксперименты с стронцием-90 показывают, что D-ти-роэин быстрее разрушается, чем природный L-изомер. Весьма заманчиво привлечь эти факторы для объяснения происхождения диссимметричности в процессах жизнедеятельности. [c.186]

Тонкослойная хроматография (ТСХ английское TL ) и предшествовавший ей метод хродгатографии на бумаге до середины 70-х годов занимали центральное место в исследованиях структуры белков и нуклеиновых кислот. В последнее десятилетие эти методы были явно оттеснены электрофорезом и высокоэффективной жидкостной колоночной хроматографией при высоком давлении. Оба метода превосходят ТСХ но разрешающей способности, а второй из них — и по скорости анализа. Кроме того, в результате ЖХВД экспериментатор получает уже разделенные жидкие фракции исходного препарата, в то время как после ТСХ ему надо еш,е локализовать пятна на пластинке, а в случае необходимости дальнейшего анализа — выполнить длительные операции элюции из них веш,ества. Точное и проводимое в ходе самого фракционирования определение микроколичеств вещества во фракциях прп ЖХВД, которое позволяют осуществить высокочувствительные детекторы и интегрирующие устройства современных жидкостных хроматографов, оставляет далеко позади соответствующие возможности ТСХ — ввиду плохой воспроизводимости процессов элюции из пятен и высокого уровня фона или самопоглощения в слое носителя при использовании оптических, флюоресцентных и радиоактивных методов оценки количества вещества в пятнах на пластинке без его элюции. Наконец, в препаративном варианте фракционирования количественные возможности ТСХ на несколько порядков меньше, чем у обычной колоночной хроматографии и даже у электрофореза. [c.457]

Поставленные задачи решаются на основе современных методов исследования ферментов. Практическая направленность занятий связана с освоением различных методов регистрации скоростей ферментативных реакций, включающих использование сопряженных ферментных систем и метода радиоактивного анализа. С целью определения активности мембранных ферментов осваиваются техника получения различных субклеточных структур и приемы работы с различными типами детергентов. Проблемы структурного анализа ферментов решаются с привлечением методов избирательной химической модификации белков, флуоресцентных методов, а также методов ковалентной и адсорбционной иммобилизации на различных носителях, включая искусственные фосфолипидные мембраны (липосомы). Кроме того, осуществляется практическое знакомство с различными аспектами кинетического исследования ферментов осваиваются различные способы оценки кинетических параметров, ингибиторный анализ, проводится исслс- [c.329]

Меченые атомы часто используются при изу чении биологических процессов. С их помощью удалось выяснить, что происходит с аминокислотами в белках (см. гл. 28) и каким образом определенные аминокислоты, входящие в состав пищи, превращаются в другие аминокислоты, а также какова роль в организме третьих аминокислот, очень важных для него, но не синтезируемых в нем. Использование радиоактивного изотопа железа Fe позволило установить функцию железа в крови добавление меченых атомов иода-131 в пищу позволило выяснить скорость накопления иода в щитовидной железе. С помощью меченых атомов иода-131 можно устанавливать места образования саркоматозных опухолей. Эти злокачественные образования поглощают большое количество альбумина, который можно иодировать, а затем следить за его распределением в организме с помощью сцинтилло-метра или счетчика Гейгера — Мюллера. [c.434]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология