Системы транскрипции

Экспрессия прокариотических генов преимущественно зависит от выбора промотора в клонируемых генах тех же или близкородственных видов Чем отдаленнее геномы прокариотических клеток друг от друга, тем система "транскрипции-трансляции" генов срабатывает хуже или вообще не срабатывает Вот почему здесь важными оказались векторы [c.208]

Бесклеточная система транскрипции [c.188]

А. и тральная догма - движение генетической информации в живых системах Транскрипция Репликация РНК [c.52]

Были рассмотрены три группы эукариотических генов, транс-[ крипция которых осуществляется разными РНК-полимеразами при участии белковых факторов, взаимодействующих с характерными для каждой группы регуляторными элементами. Однако кроме них существуют еще гибридные системы транскрипции, в которых, по-видимому, одновременно могут использоваться способы регуляции, представленные в каяадом из рассмотренных типов транскрипции. Так, РНК-полимераза П1 транскрибирует гены алых ядерных РНК (см. гл. Vni) типа U6, а также гены 7SK РНК неизвестной функции, хотя те и другие не содержат внутренних промоторов и, напротив, на 5 -конце несут ряд элементов, характерных для систем транскрипции с помощью РНК-полимеразы П. [c.212]

Примером применения твердофазного радиоиммуноанализа является определение орнитиитранскарбамилазы, синтезируемой в системе транскрипции — трансляции, управляемой геном argF, вводимым специализированным трансдуцирующим бактериофагом [336]. [c.381]

ДНК каждого клонированного гена из обоих кластеров транскрибируется РНК-полимеразой II в системе транскрипции in vitro на основе экстракта культуры опухолевых клеток человека. Это свидетельствует о том, что каждый ген представляет собой индивидуальную транскрипционную единицу. Более того, транскрипция in vitro всех зародышевых, эмбриональных и зрелых генов, за исключением S-глобинового гена, происходит с сопоставимой эффективностью. Таким образом, регуляция транскрипции глобиновых генов в ходе развития, вероятно, определяет- [c.230]

В первых экспрессирующих плазмидах для запуска транскрипции использовали сильные метаболические irp- или /ас-промоторы (рис. 4.1), а рекомбинантный ген встраивали за участком промотор-оператор. Однако при использовании систем метаболической регуляции, контролирующих работу этих оперонов, было обнаружено, что экспрессия плазмидных генов была скорее конституитивной, чем контролируемой [6], и в результате при выращивании клеток плазмиды утрачивались. Экспрессия контролируется лучше при использовании плазмид с терморегулируемой системой транскрипции [4], содержащих такие промоторы, как Pr и Pl, полученные из фага Я. Контроль работы таких промоторов может осуществляться температурочувствительным продуктом гена Я-репрессора с /ssz, денатурирующим при температуре выше 37 °С. Плазмида, содержащая Рд-промотор фага Я, изображена на рис. 4.2. Другая особенность этого век- [c.96]

Уровень РНК в разных клетках можно сравнивать, пользуясь методом позерн -блот-анализа [27]. Общий план эксперимента аналогичен тому, который рассматривался в предыдущем разделе. Стандартный препарат РНК-копий анализируемых последовательностей можно приготовить и количественно оценить с помощью системы транскрипции in vitro SP6 (см. гл. 1 этого тома). [c.263]

Транскрипционно-активные области таких ноли-тенных хромосом отличаются особенно отчетливой разуплотненностью—они образуют так называемые пуфы , в которых, как установлено, локализуются ферменты системы транскрипции и происходит синтез РНК (рис. 38.5). [c.67]

Цитоплазматическая наследственность впервые была открыта при изучении сегрегации мутантных признаков хлоропластов у растений. Однако наши знания о генах хлоропластов на молекулярном уровне и сейчас еще недостаточны. Это обусловлено двумя причинами. Во-первых, у растения имеются две отдельные цитоплазматические генетические системы, и часто трудно бывает определить, принадлежит ли данный мутантный ген митохондриям или пластидам. Во-вторых, ДНК хлоропластов больше и намного сложнее митохондриальной ДНК животных и дрожжей (табл. 9-2), что затрудняет анализ находящихся в ней генов. Однако есть и преимущества близкое сходство генетических систем хлоропластов и бактерий позволяет осуществлять точную транскрипцию или трансляцию (или то и другое вместе) ДНК и тРНК хлоропластов с помощью бактериальной системы транскрипции-трансляции. Декодирование ДНК хлоропластов in vitro в экстракте бактериальных клеток можно использовать для идентификации генов, кодирующих определенные белки. [c.63]

Такая транскрипция получила название индуцированной, или активированной. Следовательно, базальная транскрипция не может происходить in vivo, и этот термин используется только при описании результатов исследований синтеза РНК in vitro, в бес-клеточных системах транскрипции. [c.32]

Экстракты бактериальных клеток S30 и S100, кроме всех необходимых факторов трансляции, содержат и основные компоненты системы транскрипции, включая РНК-полимеразу, фактор терминации транскрипции р, RP-белок и т.п. Поэтому для создания ДНК-зависимой системы сопряженной транскрипции и трансляции, в которой происходит полная экспрессия генов, находящихся под контролем бактериальных регуляторных элементов, как правило, не требуется введения в нее дополнительных белков. Достаточно внесения в систему экзогенной ДНК-матри-цы, транскрибируемой бактериальной РНК-полимеразой, а также четырех рибонуклеозидтрифосфатов, чтобы в ней начала активно синтезироваться мРНК и одновременно транслироваться рибосомами. В итоге в таких бесклеточных системах в ряде случаев удается синтезировать высокомолекулярные белки, обладающие ферментативной активностью. [c.187]

Как известно, экспрессия генов осуществляется путем их транскрипции и трансляции. Эффективность транскрипции за висит, прежде всего, от степени сродства РНК-полимеразы к iipo-мотору, а эффективность трансляции — от стабильности мРНК и ее способности связываться с рибосомами. Следовательно, системы транскрипции и трансляции реципиентных клеток долз.с-ны узнавать последовательности нуклеотидов в регуляторных сайтах клонируемых генов Это достигается путем присоединения чужеродного гена к промотору, сайту связывания рибосом и терминатору транскрипции, специфичным для тех клеток, в которых ген клонируется. Готовый набор этих элементов называют экспрессионной кассетой. Встраивание в кассету чужеродного гена приводит обычно к его экспрессии. [c.314]

Сигналы транскрипции. Строение и организация единиц транскрипции у эукариот значительно сложнее, чем у прокариот. Отчасти это обусловлено использованием трех разных систем транскрипции (не считая систем транскрипции генов митохондрий и хлорпластов) (разд. 9.7.а и 9.7.в). Каждая система транскрипции детально рассматривается в соответствующем разделе данной главы, а пока полезно сравнить их вкратце. [c.22]

Здесь мы детально рассмотрим две системы транскрипции вирусов, которые были и остаются наиболее информативными 1) транскрипция ранней области генома SV40 и 2) транскрипция гена тимидинкиназы вируса герпеса (HSTK). [c.48]

Энхансер - это наиболее сложный элемент, участвующий в регуляции транскрипции SV40 (рис. 8.29). Он состоит из нескольких различающихся коротких элементов, расположенных в пределах повтора длиной 72 п. н., и примыкающего к нему слева участка из 25 п. н. Каждый элемент сам по себе обладает очень низкой энхансерной активностью. Точная идентификация элементов энхансера осложняется тем, что их активность можно оценить только по их влиянию на транскрипцию у определенного хозяина и в отдельном опыте. Некоторые элементы вносят примерно одинаковый вклад в общую активность энхансера независимо от хозяина или системы транскрипции, а другие функционируют только в определенных клетках. Кроме того, мутации в ка-ком-нибудь из этих элементов обычно понижают активность энхансера в 5-10 раз, в то время как при делеции всего энхансера эффективность транскрипции уменьшается в сотни раз. Это говорит о том, что энхансер включает большое число сигнальных последовательностей и каждая из них вносит вклад в его суммарную функциональную активность. Не исключено, что степень и характер этой избыточности имеют реальное физиологическое значение, которое пока не удалось установить. [c.53]

Для экспрессии чужеродных генов в составе VA используют разнообразные поксвирусные промоторы. Система транскрипции, направляемой РНК-полимеразой фага Т7, также адаптирована для VA . Оказалось, что если использо-. вать промотор и терминатор гена Ф10 фага Т7, а также конститутивно экспрессировать ген 1 РНК-полимеразы фага Т7, то происходит ин- [c.399]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология