Бактериальный экстракт, получение

В настоящее время находят применение некоторые протеазы, полученные из экстрактов животного, растительного и микробного происхождения. В первом случае речь идет преимущественно о пепсине, трипсине, химотрипсине (особенно а-химо-трипсин) из протеаз растительного происхождения наиболее употребимы папаин и фицин. Среди многочисленных ферментов микробного происхождения имеются препараты промышленного назначения бактериальные экстракты, дрожжи, плесневые грибы. Эти ферменты поступают в торговлю под различными названиями, и их специфическая активность не всегда хорошо известна, особенно когда речь идет о препаратах или смесях ферментов. Впрочем, сходная картина наблюдается и в отноше- [c.598]

Антигеном для постановки РСК могут быть культуры разнообразных микробов, бактериальные белки и экстракты, полученные из микробных культур, патологически измененных и нормальных органов и тканей. Особенности приготовления антигена определяются характером инфекционного процесса и особенностями его возбудителя. [c.139]

К настоящему времени открыто очень много самых различных (и химически и биологически) антибиотиков, поэтому невозможно предложить какую-то универсальную систему для их хроматографии. Для обнаружения классических антибиотиков разработаны были в свое время химические цветные реакции, но обычно их обнаруживают методом биоавтографии. При разработке и идентификации новых антибиотиков стал традиционным метод определения их хроматографических спектров (профилей) посредством биоавтографии. Если установлено, что определенная среда проявляет свойства антибиотика по отноще-нию к какому-либо бактериальному штамму, то эту среДу или экстракт из нее хроматографируют в серии выбранных растворителей и подвергают хроматограммы (в виде полосок) био-автографическому обнаружению (прижимают полоски к пленке с культурой и определяют зоны, в которых подавляется рост бактерий). Значения Rf пятен соединений, проявляющих свойства антибиотика, измеряют во всех растворяющих системах и строят кривую зависимости Rf от используемой системы (на оси ставят номера систем). Соединяя нанесенные точки, получают ломаную линию, которую и называют хроматографическим спектром или профилем. Этого обычно достаточно для получения полной хроматографической характеристики или для идентификации исследуемого антибиотика. Некоторые авторы используют до 14 растворителей для построения хроматографического спектра. В качестве примера приведем перечень систем, исполь- [c.139]

Множество работ посвящено электрофоретическому изучению белковых смесей, экстрагированных из мышц, печени, мозга, поджелудочной железы, бактериальных клеток, а также содержащихся в спинномозговой жидкости, моче, желудочном соке, молоке и т. д. Как правило, при этом приходится предварительно концентрировать раствор. Все эти смеси изучены менее подробно, чем сыворотка крови они обычно более сложны, а на их состав и свойства влияют способы экстракции и концентрирования. Тем не менее полученные результаты имеют большое теоретическое и прикладное значение. Анализ содержания и состава белков в моче помогает установить диагноз при ряде заболеваний, в том числе заболеваний почек и злокачественных новообразованиях. Состав лимфы напоминает состав сыворотки крови изучался обмен белков между этими жидкостями. В экстрактах из мышц изучены электрофоретические свойства актина и миозина, а также ряда гликолитических ферментов. Это перечисление можно, [c.103]

Химические канцерогены — это вещества, с большой вероятностью вызывающие образование опухолей у лабораторных животных. Эймс и соавторы [7, 8] показали, что большинство известных канцерогенов одновременно являются и мощными мутагенами. Способ проверки, разработанный ими, включает простой посев, позволяющий оценить индукцию обратных мутаций в бактериальных генах канцерогенами. Многие канцерогены, прежде чем проявить свое канцерогенное и мутагенное действие, должны быть активированы в живом организме такая активация обычно происходит в печени подопытного животного. С помощью рассматриваемого теста можно оценить необходимость такого рода активации включением в исследуемую пробу экстрактов печени млекопитающих, полученных после осаждения митохондрий. Около 85% всех известных канцерогенов яв- [c.48]

Каждую пробу бактериальной культуры или суспензии бактерий в ЦСР подкисляют достаточным количеством 2,5 н. хлорной кислоты до получения конечной концентрации перхлората 0,25 н. Подкисленную пробу охлаждают во льду в течение 30 мин и центрифугируют 10 мин при 10 000 g. Осадок, содержащий нуклеиновые кислоты, суспендируют в 0,5 мл 0,5 и. хлорной кислоты, помешивая стеклянной палочкой. Добавляют еще 3,5 мл 0,5 н. хлорной кислоты и нагревают суспензию 15 мин при 70 °С. Во время этой процедуры следует периодически помешивать или встряхивать суспензию. Подогретую суспензию центрифугируют 10 мин при комнатной температуре при 5000 g и осторожно сливают надосадочную фракцию в 10-мл градуированную пробирку. Осадок вновь экстрагируют таким же образом. Объединяют оба экстракта, записывают их объемы и перемешивают. [c.336]

НОЙ кривой, полученной для известных количеств АМР или РНК (разд. 16.1.1). Калибровочную кривую следует строить для каждого анализа или серии анализов. С помощью реакции с орцином можно достоверно измерить от 15 до 100 мкг РНК в экстракте бактериальных клеток. [c.339]

Истинный энзимолог редко интересуется проблемой сырья единственное, что ему нужно, — это выделить как можно больше фермента из наиболее удобного источника. В этом случае необходимо изучить литературу и выбрать лучший объект, с которым можно работать. При сравнении результатов, полученных в разных лабораториях, порой стоит самому провести несколько экспериментальных измерений. Очень важно убедиться в том, что фермент, присутствующий в исходном материале, экстрагируется из него полностью, для того чтобы можно было достоверно определить его содержание в ткани. При неполном разрушении клеток можно недооценить данный объект как источник ферментов из-за того, что значительная часть ферментативной активности не выходит в раствор, а удаляется вместе с осадком во время получения экстракта. Если фермент выделяют из бактериального. материала, то экспериментатор должен учитывать возможность отбора штаммов с аномально высоким уровнем ферментативной активности. Это можно сделать либо путем обычного отбора мутантов, либо используя более сложную технику клонирования, посредством которой множественные копии гена фермента включаются в бактериальный геном с помощью плазмид [1]. Экспрессия гена. может быть еще более усилена за счет его слияния с сильным промотором [2]. Эта работа занимает много времени, и выполнить ее может только опытный специалист не стоит даже пытаться применять эти методы, если на выделение фермента отведено мало времени. [c.37]

Исследуйте бактериальные экстракты, полученные из положительных клонов, методом ДСН-электрофореза в ПААГ (предпочтительно 7,5—8,5%) на наличие в них гибридного белка. Экспрессия может быть индуцирована с помощью ИПТГ (табл. 6.3). [c.176]

При описанном выше ультрацентрифугировании пики, наблюдаемые при помощи шлирен-системы, отвечают границам между раствором и растворителем. Первые, быстрые пики отвечают компонентам, движущимся в окружении более медленных компонентов (фиг. 8). В биохимических смесях некоторые из этих медленных компонентов (например, рибосомы при анализе бактериального экстракта) создают большую вязкость. Измеряемые коэффициенты седиментации могут при этом очень сильно отличаться от приведенного к стандартным условиям значения Поэтому полученные при помощи скоростной седиментации значения s не всегда можно непосредственно использовать при планировании и анализе данных препаративного зонального центрифугирования в градиентах плотности. При зональном ультрацентрифугировании анализируемая смесь наносится в виде слоя на раствор с увеличивающейся по направлению ко дну плотностью (что предотвращает конвекционное перемешивание) и различные компоненты седиментируют в градиенте плотности в виде отдельных зон. Для наслоения смеси можно использовать специальную аналитическую ячейку, в которой техника наслоения принципиально не отличается от обычного препаративного наслоения на градиент. Одна из таких ячеек (Be kman Instruments In .) приведена на фиг. 15. Преимущества применения такой ячейки, как отмечают Виноград и Брунер [11], состоят в том, что она требует меньше исследуемого материала, анализируемые компоненты в ней пространственно разобщены, медленные примеси отстают от быстрее движущихся зон и седиментацию последних можно осуществлять в любом растворителе, не прибегая к предварительному диализу. Растворитель должен быть более плотным по сравнению с [c.67]

Окисление сорбита до сорбозы I [47]. Технический сорбитный сироп, содержащий 75,7% сорбита, 2,3% глюкозы, 0,6% сернокислого натрия и 21,4% воды, разбавляют дестиллированной водой так, чтобы концентрация сорбита составляла 10%. В бродильный чан загружают 3,2 л питательной среды, в которую прибавляют 5 г дрожжевого экстракта Дифко на 1 л раствора и 200 мл суспензии Асе ,оЬас1ег зиЬохуйапз (Уэллс и сотрудники [47] описывают подробности получения высокоактивного бактериального материала). При 30° и энергичном перемешивании через аппарат в течение 16—30 час. пропускают стерильный воздух. Время от времени определяют окислительную способность смеси по методу Шеффера и Хартмана [48] с помощью восстановления соединений меди. По око чании окисления жидкости дают отстояться, а затем упаривают в ва- [c.280]

Полученная таким путем смесь отделялась центрифугированием от клеточных обрывков, и получался прозрачный коллоидальный раствор, содержаш,ий н бактериохлорофилл и бактериальные каротиноиды вместе с белками. Спектры поглош ения экстракта очень похожи на спектры неноврежденных бактерий. [c.391]

Ферментативный гидролиз кофермента А с использованием ряда ферментов дает аденозин и пантотеновую кислоту в эквимоляр-ных количествах. При кислотном гидролизе образуются аденин, Р-аланин, три фосфатных остатка и серусодержащее соединение [83], позднее идентифицированное как 2-меркаптоэтиламин [86, 87]. Производное пантотеновой кислоты, содержащее 2-меркаптоэтиламин, было выделено раньше и идентифицировано как фактор La toba illus bulgari us — пантотенн [88] некоторое доказательство присутствия этого соединения в ферментативных гидролизатах кофермента А было получено при помощи тестов на бактериальный рост [89]. Было также найдено, что пантотеин может превращаться в кофермент А под действием аденозин-5 -трифосфата и экстракта из печени голубя [90]. Следующим подтверждением структуры кофермента А было выделение аденозин-5 -фосфата и 4-фосфата пантотеновой кислоты из смеси продуктов, полученной в результате кислотного гидролиза в мягких условиях [91], причем структура последнего компонента была полностью установлена сравне- [c.198]

Из лиофилизованного неочищенного экстракта приготовляют 3%-ный водный раствор, который центрифугируют 6—8 час при 80 ООО g. Осадок суспендируют в воде и суспензию центрифугируют 2—3 раза по 3 час при 105 ООО g. Полученный в результате осадок смывают минимальным количеством воды и лиофилизуют. Выход бактериального липополисаха-рида, содержащего 3% нуклеиновой кислоты, 300—500 мг (1,5—2,5% сухого веса бактерий). [c.328]

За последние несколько лет были сделаны большие успехи в изучении люминесценции бактерий. Особое внимание уделялось исследованию экстрактов, выделенных из бактериальных клеток. В ранних работах занимались главным образом вопросом о влиянии изменения свойств окружаюш,ей среды—питательных веществ, осмотических свойств и pH—на люминесценцию и определением отношения интенсивностей люминесценции и дыхания. Еще в 1938 г. Дудоров [7] показал, что добавление рибофлавина усиливает люминесценцию бактерий, не оказывая заметного действия на процесс дыхания. Его работа в течение многих лет оставалась незамеченной, и при исследовании живых бактерий в основном занимались вопросом о потребности бактерий в аминокислотах и сахаре. На этом этапе исследований один из наиболее поразительных экспериментальных результатов состоял в том, что источник азота, введенный в среду, оказывает решающее влияние на величину отношения скорости роста к интенсивности люминесценции бактерий [13]. Для A hromoba ter fis heri было показано, что если принять в качестве стандартного значения величину отношения, полученную при оптимальных условиях роста в присутствии солей аммония, то замена последних гуанином, глутаминовой кислотой или серином приводит к возрастанию этого отношения однако оно уменьшается, т. е. интенсивность люминесценции возрастает быстрее интенсивности дыхания при добавлении в среду метионина с гистидином или с лизином. Аналогичные наблюдения были проделаны и другими исследователями, которые установили, что присутствие в среде смеси метионина с другими менее существенными аминокислотами усиливает люминесценцию. В гл. VIH и IX приводятся другие примеры важной роли, которую играют соединения серы в процессах, связанных с излучением. [c.174]

Как показано выше (табл. 1, рис. 2), предлагаемый способ предхроматографической обработки нитробензольного экстракта разными реагентами позволяет выявить присутствие в водном растворе и неуглеводородных компонентов. Полученные нами данные дают возможность полагать, что такая обработка имеет существенное значение при исследовании поверхностных, лечебных или нефтяных вод, подвергшихся, возможно, бактериальному воздействию. Так, при хроматографическом анализе образца воды, отобранного в 1967 г. (Челбасская площадь, СКВ. 40) и простоявшего в лаборатории до 1969 г. в частично заполненной стеклянной бутыли, на хроматограмме были выявлены дополнительные пики, свидетельствующие о наличии в растворе соизмеримых с бензолом количеств каких-то веществ, которые не были зафиксированы в остальных проанализированных пробах, отобранных в районах нефтяных месторождений. Доказать неуглеводородную природу соединения, соответствующего пику (рис. 5), удалось, применяя промывание [c.160]

Систему для белкового синтеза можно получить в виде бесклеточного экстракта (см. гл. 6). Исходная процедура состояла в следующем клетки бактерии Е. соИ разрушали, из полученного экстракта методом центрифугирования удаляли фрагменты оболочек и мембран. ДНК разрушали добавлением ДНКазы (а бактериальная мРНК слишком нестабильна и не могла служить эндогенной матрицей). Полученная в результате надосадочная фракция активно транслирует любую добавленную мРНК, поскольку в этой фракции содержатся необходимые предшественники и источник энергии. Позднее были разработаны другие системы, содержащие более чистые компоненты. Такие системы были созданы из многих типов как прокариотических, так и эукариотических клеток. [c.59]

ИЗ бактериальных тел и антибиотика. Фильтрацией отделяют осадок от жидкости и подвергают обработке кислым спиртом в течение суток. За этот промежуток времени антибиотик извлекается из бактериальных клеток и переходит в спиртовой раствор, который отделяют от бактериальной массы. Спиртовой экстракт упаривают в вакууме, а остаток переносят в раствор Na l. При этом тиротрицин выпадает в виде хлопьевидного осадка. Свободный антибиотик, т.е. антибиотик, вьщеленный бактериями в окружающую среду, может извлекаться нейтральным буфером непосредственно из осадка, полученного при обработке НС1 (рис. 26). [c.186]

Антигены. В dot-EUSA можно применять различные препараты антигенов. Так, на ннтроцеллюлозных мембранах можно сорбировать как жизнеспособные [6] или фиксированные формалином [7, 8] простейшие, так и супернатанты, полученные после разрушения клеток ультразвуком и замораживанием-размора-живанием [9]. С нитроцеллюлозными мембранами можно связывать этанольные экстракты бактериальных препаратов [10], экстракты экскреторно-секреторного антигена цестод [И], антиген Эхинококковой кисты [12 ], антигены слюнных желез клеща [13 ] и синаптосомальные мембраны мозга крысы [3]. На пластиковой по (ложке также сорбировали экстракты ядер вирусов [14]. Кроме того, для уменьшения потерь антигена на стадиях промывки де- [c.117]

Существует много с1пособов получения и экстрагирования бактериальных антигенов [32]. От выбора способа так же, как от условий и фазы роста бактериальной культуры, зависит природа иммуногена. Обработанные ультразвуком экстракты бактериальных стенок представляют собой чрезвычайно сложны е смеси (см., например, рис. 2.4), и существует много способов физического и химического фракционирования, для того чтобы сделать исходный материал более однородным. Хорошим примерам служит изучение антигенов микобактерий [33]. Полиспецифические антисыворотки особенно полезны при определении молекулярных компонентов основных фракций полисахаридов и белков по классификации Seibert [34]. [c.80]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология