Титрование вируса

Титр вируса в культуральной среде инфицированных клеток можно определить с помощью целого ряда методик, в основе которых лежат физические, биохимические или биологические методы анализа. Наибольшее распространение получил способ, заключающийся в количественном определении вирусной геномной РНК в культуральной среде с помощью гибридизации с меченным ДНК-зондом. Эту стандартную процедуру дот-блот-гибридизационного анализа проводят после концентрирования препарата вируса, как описано в табл. 9.4. Количественное определение достигается путем сравнения интенсивности полученного гибридизационного сигнала с интенсивностью контрольных сигналов гибридизации точно титрованного вируса (разд. 9.6.1.3) или известных количеств РНК, или ДНК, нанесенных на фильтр. Используя разные ДНК-зонды, можно оценить концентрацию индивидуальых компонентов в вирусном препарате и непосредственно определить, содержит ли вирус интересующие нас последовательности. [c.297]

Оба описанных выше метода определения титра вируса страдают одним общим недостатком — необходимостью строить калибровочные кривые на основе точных стандартов. Кроме того, этими методами нельзя различить дефектные вирусы и полноценные инфекционные частицы. Очевидно, что наиболее информативными следует считать такие методы титрования вируса, которые основаны на определении количества инфекционных частиц с помощью биологических тестов. В случае репликационно-компетентного MLV этой цели отвечает анализ бляшек с использованием ХС-клеток [15]. Однако обычно нет нужды [c.298]

Для выделения, пассирования и титрования вирусов гриппа их культивируют в развивающихся куриных эмбрионах. [c.234]

Для титрования вируса в реакции гемагглютинации берут 1Уо взвесь эритроцитов. Титром вируса считается то наибольшее разведение, при котором наблюдается агглютинация эритроцитов не менее чем на -1-+ (1 АЕ — одна агглютинирующая единица). [c.235]

ВЫРАЩИВАНИЕ, ОЧИСТКА И ТИТРОВАНИЕ ВИРУСОВ ГРИППА [c.161]

Выращивание очистка и титрование вирусов гриппа 167 [c.167]

Методы титрования вирусов [c.169]

Титрование вирусов гриппа в реакции гемагглютинации [c.169]

Титрование вирусов с использованием фрагментов эмбрионов [c.176]

Титрование вирусов гриппа методом бляшек [c.178]

Рис. 8.4. Титрование вируса полиомы методом бляшек на первичной культуре клеток почки мыши, а — контрольная культура б — заражение культуры 10 -кратным разведением заготовки вируса приводит к образованию 14 бляшек в — заражение культуры 10 -кратным разведением заготовки вируса приводит к образованию 90—100 бляшек е — заражение культуры 10 -кратным разведением. Титр исходной заготовки вируса 1,2-10 БОЕ/мл. (Фотографии взяты иа статьи 15 и перепечатаны с разрешения авторов)

Титрование вируса методом бляшек [c.236]

Из множества методов, применяемых для титрования аденовирусов, мы опишем три следующих титрование вируса методом бляшек, титрование вируса по ЦПД определением конечной точки и метод флуоресцирующих фокусов. [c.265]

Титрование вируса по ЦПД определением конечной точки [c.267]

Наиболее точным методом титрования, несомненно, является метод бляшек. Однако он предполагает сохранение стабильного монослоя клеток при длительном культивировании. Метод титрования вируса по ЦПД определением конечной точки, вероятно, наиболее прост в исполнении и достаточно чувствителен. В большинстве случаев можно ограничиться использованием этого метода. Метод флуоресцирующих фокусов, хотя и занимает меньше всего времени, однако требует большого количества реактивов и предварительного определения оптимального срока для подсчета фокусов первичной инфекции. [c.269]

При использовании данного метода особенно важен выбор соответствующей клеточной линии. Как правило, инфицирование монослоя клеток ВПК приводит к образованию мелких бляшек. Кроме того, частота их возникновения, как свидетельствует наш опыт, также небольшая. При титровании вируса на [c.276]

Титрование вирусов можно проводить на кусочках хорионаллантоисной оболочки. В лунки стерильных пластин помещают кусочки скорлупы 11 — 12-дневного куриного эмбриона с неповрежденной ХАО, добавляют 0,5—1,0 мл вирусосодержащей жидкости, [c.269]

Этот метод подробно описали Роу и сотр. (Rowe et al., 1970). Для титрования вируса-помощника в комплексе Эбелсона мож- [c.385]

Некоторые штаммы вируса бешенства тоже образуют четкие бляшки на монослое клеток хомячка ER в настоящее время эта линия клеток широко используется для размножения и титрования вируса бешенства и других вирусов [17]. Метод бляшек с использованием клеток ER особенно чувствителен при титровании стандартного штамма вируса бешенства VS, При работе этим методом используют монослойные культуры, выращиваемые в шестилуночных планшетах (диаметр лунки составляет 35 мм). [c.117]

Вирусы гриппа — это содержащие однонитевую РНК оболочечные вирусы, вызывающие серьезные эпидемические заболевания человека и многих видов животных, в частности лошадей, свиней, тюленей и домашней птицы. Известны три типа данных вирусов, выделенные на основании различий между нуклеокап-сидами в реакции связывания комплемента они отличаются также по биохимическим и биологическим свойствам. Вирусы типа А, способные к быстрым и резким изменениям антигенных свойств (антигенный дрейф), являются главной причиной пандемий гриппа человека поэтому они исследованы наиболее подробно. Большинство методов выращивания, очистки и титрования вирусов гриппа разработаны именно для вирусов этого типа. Вирусы типа В, хотя и не способны к антигенному дрейфу, по всем остальным биохимическим и биологическим свойствам очень близки к вирусам типа А поэтому их, как правило, можно выращивать и титровать, пользуясь теми же методами. С другой стороны, вирусы типа С по своим биохимическим свойствам весьма далеки от вирусов типов А и В соответственно они имеют и другие ростовые свойства. Поскольку вирусы этого типа изучены намного хуже, чем другие, в настоящей главе основное внимание уделено методам, разработанным для вирусов типов А и В, в особенности тем, с которыми авторы знакомы по собственному опыту. Тем не менее большинство этих методов применимы и к вирусам типа С. Данная глава представляет собой практическое руководство, и соответственно теоретические основы методов, как правило, не рассматриваются. При необходимости упоминаются некоторые биологические особенности вирусов и даются ссылки на соответствующую литературу однако полное описание этих свойств можно найти в недавно опубликованных подробных обзорах [1—3]. [c.161]

Рис. 6.3. Титрование вируса гриппа в реакции гемагглютинации. Для постановки реакции готовят серии двукратных разведений исследуемого вируса в планшетах с круглодонными лунками, как описано в разд. 3.1. Конечной точкой считают минимальное разведение вируса, при котором наблюдается агглютинация 50% эритроцитов, В ряду 1 (а) разведения 1/2—1/16 дают полную агглютинацию, в то время как более высокие разведения не дают агглютинации. Конечной точкой считают такое разведение вируса, которое содержит 1 гемагглютини-рующую единицу (ГАЕ), т. е. количество вируса, необходимое для агглютинации стандартного объема 1%-ной суспензии эритроцитов. В ряду 1 (а) конечная точка лежит посередине между 1/16 и 1/32, т. е. составляет 1/24. Аналогично конечные точки для 2-го, 3-го и 4-го рядов составляют 1/768, 1/192,

Вирусная суспензия может содержать вещества, специфически или неспецифически ингибирующие гемагглютинацию. Эта проблема особенно серьезна при титровании вируса в культуральной жидкости, поскольку входящая в состав питательных сред сыворотка крови содержит подобные ингибиторы. Многие из них могут быть инактивированы прогреванием сыворотки при 56 °С 30 мин подробнее этот вопрос обсуждается в работе Хойла [12]. В некоторых случаях, однако, возникает противоположная ситуация некоторые препараты сывороток содержат факторы, вызывающие гемагглютинацию в отсутствие вируса. Поэтому необходимо одновременно с вирусом титровать образец среды от незараженных клеток. [c.173]

Использовагтие фрагментов эмбрионов, т. е. кусочков скорлупы 11-дневных оплодотворенных яиц с присоединенной к ним хорионаллантоисной оболочкой, вместо целых эмбрионов лежит в основе весьма экономичного способа определения инфекционности препаратов, содержащих вирус гриппа. Данный метод, предложенный для титрования вируса гриппа еще до введения в практику культур клеток [14], и теперь весьма полезен для титрования щтаммов вирусов, не размножающихся в культуре клеток или при отсутствии подходящей культуры. [c.176]

Смотреть страницы где упоминается термин Титрование вируса: [c.264] [c.297] [c.399] [c.83] [c.116] [c.120] [c.165] [c.173] [c.175] [c.177] [c.181] [c.185] [c.187] [c.189] [c.191] [c.193] [c.195] [c.197] [c.199] [c.265] [c.299]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология