Начальный всплеск

Если принять экспоненциальный член в уравнении (9.5) равным нулю, то мы получим линейную часть зависимости р от 1. Далее экстраполяцией к нулевому моменту времени находим величину начального всплеска я [c.219]

Рис. 9.3. Кинетика с начальным всплеском .

Метод титрования активных центров, основанный на измерении начального всплеска, отличается от метода определения скорости ферментативной реакции тем, что он относительно нечувствителен к изменениям констант скорости. Для того чтобы получить воспроизводимые значения скорости ферментативной реакции, необходимо поддерживать строго определенные значения pH, температуры, концентраций компонентов буфера и т. д. В то же время при относительно больших изменениях константы к 2 вызываемых, например, химической модификацией фермента, величина начального всплеска остается неизменной, если только к 2 не уменьшается настолько, что ее уже не удается измерить. Таким образом, химическая модификация либо совсем не влияет на значение молярной концентрации фермента, получаемое описанным методом, либо вызывает снижение его до нуля. По этой причине метод титрования фермента был назван испытанием но принципу все или ничего [99]. [c.221]

Титрование активных центров и начальный всплеск концентрации продукта [c.152]

Для расчета констант скорости из данных стационарной кинетики и определения стехиометрии связывания необходимо знать концентрацию активных центров ферментов. Рассчитать эту величину исходя из молекулярного веса белка и его концентрации нельзя, поскольку не всегда удается выделить абсолютно чистый фермент. Проблема определения концентрации была решена путем применения метода титрования активных центров и сочетанием исследования ферментативных реакций в стационарных и предстационарных условиях, позволяющих связать концентрацию активной формы фермента с начальным всплеском концентрации продукта. Начальный всплеск наблюдается в тех случаях, когда по ходу реакции происходит накопление связанного с ферментом промежуточного соединения. Первый моль субстрата быстро реагирует с ферментом с образованием стехиометрических количеств фермент-содержащего промежуточного соединения и продукта, а дальше реакция замедляется, поскольку идет медленный распад промежуточного соединения с высвобождением свободного фермента [c.152]

Очевидно, что если стадия, характеризующаяся константой протекает очень быстро, а стадия с константой 2 — крайне медленно, то высвобождение Р] легко зарегистрировать и связать его количество с концентрацией фермента. Однако на практике кг редко бывает пренебрежимо малой величиной, поскольку за начальным всплеском концентрации Р] следует постепенное накопление этого продукта по мере превращения промежуточного соединення. Математически эта ситуация была [c.153]

Объяснение начального всплеска состоит в том, что реакция включает ацилирование фермента схема 26 . Ацилирование блокирует нуклеофильную группу активного центра, поэтому фермент остается неактивным, пока образовавшийся ацилфермент (30) не гидролизуется. Если вторая стадия реакции является скоростьолре-деляющей, первоначальная атака сложного эфира свободным ферментом может привести к быстрому замещению АгО , но последующая стадия протекает с меньшей скоростью. Этот механизм постулирует, что концентрация м-ни.трофеноксида, образовавшегося в начальном всплеске реакции, будет равна концентрации [c.483]

При изучении катализируемого химотрипсином гидролиза нитрофенилэтилкарбоната Хартли и Килби [72] обнаружили, что, хотя высвобождение нитрофенола происходит практически линейно во времени, экстраполяция прямой к начальному моменту времени дает ненулевую точку пересечения с осью ординат. В связи с тем что выбранный субстрат оказался очень плохим, в этих опытах пришлось использовать высокие концентрации фермента, и величина отсекаемого отрезка, называемого начальным всплеском ( burst ) концентрации продукта, была пропорциональна концентрации фермента. Эти данные согласуются с механизмом, в котором высвобождение продуктов происходит в две стадии, причем нитрофенол высвобождается первым [c.217]

Однако для переходного периода величина йр 1 вначале существенно превышает dqldt. Позтому, в то время как изменение [Р] во времени обнаруживает начальный всплеск , для изменения [р] во времени наблюдается лаг-период (эти отклонения от линейности могут быть продемонстрированы экстраполяцией линейных участков до пересечения с осями координат). Проинтегрировав уравнения и подставив начальные условия (р = О и 9 = О при 1— 0), получаем выражения для размеров отсекаемых отрезков [c.219]

Таким образом, величина начального всплеска концентрации Р не равна концентрации фермента, а приближается к ней, если +2 +3- Из зтого уравнения следует, что п никогда не может превысить концентрацию фермента. Однако экстраполяция линейной части кинетической кривой может иногда давать значения начального всплеска, превышающие истинное значение я. Это бывает в том случае, если сйорость на стационарном участке реакции на самом деле не постоянна, а заметно снижается по ходу ферментативного процесса. Если же мы уверены, что кинетическая кривая на стационарном участке строго линейна, подобного искажения величины л быть не должно. [c.219]

Рис. 3.1. Зависимость концентрации загрязняющих веществ в стоке от времени для отдельного дождя (поллютограф) 1 - постоянная концентрация 2 - поллютограф с начальным всплеском .

Справочник химика 21

Химия и химическая технология