Ацилирование белков

Другой весьма специфичный тип белок-белкового взаимодействия представлен ингибированием трипсина маленьким белковым ингибитором из поджелудочной железы быка. Последний белок состоит из 58 аминокислотных остатков, образующих весьма компактную структуру, содержащую три дисульфидных связи. Вследствие такой компактности белок не очень чувствителен к протеолитической атаке. Боковой радикал Lys-15, однако, полностью экспонирован и представляет собой участок взаимодействия с трипсином, а также его ингибирования. Обычный каталитический механизм действия сериновых протеиназ , представителем которых является трипсин, предполагает образование нековалентного комплекса, за которым следует ацилирование Ser-195 фермента карбонильной группой лизина или аргинина и высвобождение первого продукта реакции. Завершает процесс деацилирование ацилфермента. [c.563]

Уксусный ангидрид наиболее широко применяется для ацилирования белков. Он более специфичен, чем кетен, не вызывает денатурации белков и не требует использования специальной аппаратуры. Для проведения реакции белок растворяют или суспендируют в охлажденном растворе ацетата натрия и к суспензии медленно добавляют уксусный ангидрид [c.69]

Наиболее подробно изученной ноликетидсинтетазой является мультиферментный комплекс синтетазы жирных кислот (см, разд. 25.1.5). Основа комплекса — ацилпереносящий белок (АПБ), представляющий собой макромолекулярный эквивалент кофермента А (16). Характерный для синтетазы жирных кислот каталитический цикл [141 показан на схеме (3). Следует подчеркнуть, что ее мультиферментный комплекс (Е) содержит два различных тиольных центра один из них (5Н ) принадлех<ит ацилперенося-щему белку, а второй (5Н ) — ферменту, осуществляющему ацилирование малонил-АПБ. [c.418]

Белок является полифункциональным соединением, в котором каждый аминокислотный остаток выполняет определенную роль в поддержании нативиой конформации или проявлении биологической функции. Если используются модифицирующие агенты достаточно широкой специфичности, конечный результат зависит от доступности тех или иных функциональных групп белка в данных условиях. В частности, ацилирование с помощью радиоактивно меченного уксусного ангидрида было предложено в качестве метода локализации остатков лизина, расположенных на поверхности белковой глобулы (Б. Хартли). Этот прием широко применяется и для исследования топографии мембранных белков, когда доступными действию так называемых непроникающих реагентов оказываются лишь группировки, расположенные вне мембраны. [c.160]

Анфинсен и Габер [21] часто применяли гель-филь-трацию на сефадексе G-25 в своих классических исследованиях по восстановлению и рекомбинации четырех дисульфидных мостиков рибонуклеазы. Сначала они отделяли восстановленный белок от мочевины, солей и меркаптоэтанола, а после замещения по SH-группам — от избытка других реагентов. Аналогично поступали при обратимом ацилировании свободных аминогрупп рибонуклеазы остатком трифторуксусной кислоты [154]. Дисульфидные мостики рибонуклеазы можно также легко расщепить тринатрийтиофосфатом при этом одновременно тиофосфорилируются образующиеся меркаптогруппы [22]. Кривые элюирования, взятые из этой работы (фиг. 24,Л), показывают, насколько быстро и эффективно меченый белок отделяется от избытка тиофосфата. Локализация остатка кислоты на атоме серы легко и надежно доказывается тем фактом, что (см., например, [155]) восстановлен- [c.144]

Из рассмотрения этих схем следует, что 0-ацилирование должно приводить к освобождению 1 моля -нитрофенолят-иона и протонов, а Х -ацилпроваиие — к освобождению 1 моля п-нитрофе-иолят-иона и протонов и некоторой части от моля протонов в зависимости от того, насколько полно при pH реакции протони-руется фермент. В действительности, концентрация п-нитрофено-лят-пона возрастает, указывая на общее уменьшение количества протонов из буфера. При pH 6,6 белок захватывает около [c.280]

В качестве полимеров-носителей в конъюгатах инсулина применялись также синтетические полимеры. Ацилированием белка сополимером винилпирролидона с кротоновой кислотой была получена смесь моно-, ди- и триацилированных продуктов (по числу прореагировавших аминогрупп белка) [85. Моно-и диацилированный конъюгаты обладали 62—71 % физиологической активности исходного инсулина при полном сохранении иммунологической специфичности, в то время как триацилиро-ванный конъюгат сохранил только 38—46 % активности, а иммунологическая специфичность у него была потеряна. Маскировка иммунологической специфичности для инсулина особенно важна, так как в медицине часто используют гетерологичный белок (например, свиной для человека). Работы по звездообразным полимерным производным инсулина (см. ниже), по-видимому, указывают на перспективность получения растворимого конъюгата инсулина, так как позволяют в достаточной мере сохранить активность и снизить антигенность. Могут представлять интерес и нерастворимые полимерные производные инсулина, постепенно деградирующие в организме с выделением активного гормона в виде растворимого конъюгата [c.185]