Хроматографическое пятно денситометрический

Прямые методы основаны на определении микро-или нанограммовых количеств вещества в хроматографическом пятне. Они включают или определение радиоактивности меченых веществ, или фотометрические методы, которые могут быть разделены на две группы денситометрические и спектрофотометрические методы. [c.116]

Денситометрические методы основаны на получении информации о разнице в оптической плотности, (отсчет по серой шкале) между хроматографическим пятном (зоной) и окружающим адсорбентом. При установлении источника света и фотоумножителя с противоположной стороны пластинки измеряется количество света, проходящего через слой, и относится к интенсивности падающего света. Для измерений по методу отражения лампа и фотоумножитель помещаются под соответствующим углом друг к другу из- [c.116]

При использовании визуальных и денситометрических методов непосредственного определения веществ в пятнах на хроматограммах необходимо, чтобы объемы исследуемого и стандартного растворов, которые наносят на хроматографические пластинки, были одинаковыми. [c.49]

Денситометрическое определение вещества в хроматографическом слое осложняется диффузионным рассеянием света на зернах сорбента. Прохождение и отражение света в сильно рассеивающих средах описываются сложными интегро-дифференциальными уравнениями [31], которые в общем случае не имеют аналитических решений. На практике обычно используют приближенные уравнения. Одним из таких приближений являются дифференциальные уравнения, полученные Кубелкой и Мунком [32]. Эти уравнения были положены в основу работ по теории денситометри-ческого анализа тонкослойных хроматограмм [33]. На основе решений системы дифференциальных уравнений для проходящего и отраженного света при введении ряда упрощающих предположений была получена связь концентрации вещества с (х, у) в точке х, у) хроматографического пятна с поглощением и рассеянием света в этой области [c.270]

Следует отметить, что описываемый метод вследствие относительно малой зависимости ширины хроматографического пятна от количес1ва содержащегося в нем вещества уступает по точности денситометрическим сканирующим методам количественного анализа. Очевидно, что повышение точности эквиденситного метода связано с более точным определением и ширины хроматографи- [c.325]

В сочетании с другими методами и при использовании прибо- / ров этот метод иногда позволяет быстро получить воспроизводимые результаты. Так, после проявления пятен на хроматограмме окрашенные зоны компонентов можно количественно охарактеризовать денситометрическим методом. С его помощью измеряется суммарная функция площади пятна и его интенсивность менее чем за 10 мин, однако в этом случае необходим прибор. Метод включает сканирование конечного пятна на хроматограмме пучком света. Отраженный или прошедший свет попадает на фотоумножитель, и разность в интенсивностях прошедшего и отраженного света измеряется по электрическому сигналу и записывается в виде хроматографических кривых, как при элюировании с колонки. Хроматограммы сканируют на двухлучевом саморегистрирующем и интегрирующем денситометре Хромоскон . Количество вещества определяют по градуировочным графикам, построенным в координатах высота пика — масса вещества в пятне. Массу вещества в пятне получают измерением площади под хроматографической кривой с использованием интегратора. Чтобы уменьшить ошибку, которая может составить 1,7— 2,8%, необходим тщательный подбор проявляющих реагентов интенсив- [c.125]

Хроматографические пластинки предварительно промьшают от органических примесей, присутствующих в слое силикагеля, и пропитывают фосфорномолибденовой кислотой. Для этого пластинку помещают в ванночку с 1,0 %-ным раствором фосфорномолибденовой кислоты в смеси растворителей хлороформ—метанол (2 1) на 5 мин. В качестве растворителей можно использовать ацетон, этанол, четыреххлористый углерод и другие растворители, в которых растворяется фосфорномолибденовая кислота и органические примеси, присутствующие в слое силикагеля. Пластинку подсушивают на воздухе, а на линию старта (20 мм от края) наносят микрошприцем 1—2 мкл 5 %-ного хлороформенного раствора липидов (50—100 мкг) полосой 1 см. Пластинку помещают в хроматографическую камеру (желательно сэндвич-камеру ) и проявляют в смеси растворителей гексан—диэтиловый эфир—уксусная кислота (90 2 1). Проявленную пластинку подсушивают на воздухе до исчезновения запаха растворителей и помещают в термостат с принудительной вентиляцией на 5 мин при температуре 60°С. В зависимости от конструкции термостата время и температура могут быть изменены. На светло-желтом фоне появляются темные пятна отдельных групп липидов. Интенсивность окраски пятен и их размеры определяют денситометрически. [c.321]