Хроматографическое пятно

Наиболее распространенной является двухкоординатная денситометрия точечным световым зондом. При этом хроматографическое пятно сканируется вдоль главных осей эллипса пятна. Имеет большое значение размер точечного светового зонда. Обычно он должен составлять меньше 0,1 размера хроматографического пятна. В результате денситометрии получаются кривые типа изображенной на рис. IV. 16. [c.151]

Количественное определение аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге. Цель работы — определить концентрацию аминокислоты в анализируемом растворе методом колориметрического анализа раствора, полученного при элюировании хроматографического пятна. [c.529]

Существенный недостаток количественных методов анализа тонкослойных хроматограмм, основанных на измерении пропускания света, был связан с нелинейной зависимостью сигнала оптического детектора от количества вещества в хроматографическом пятне. Эта нелинейность обусловлена специфическим законом прохождения света в рассеивающей среде, описываемым уравнением Кубелки — Мунка, и неоднородностью пластины по толщине слоя адсорбента. Последнюю можно учесть, измеряя оптические свойства подложки непосредственно в хроматографическом пятне. Использование двухволнового метода спектрофотометрического детектирования, когда излучение одной волны Л поглощается и веществом, и адсорбентом, а другой волны Лг — только адсорбентом, позволяет выделить сигнал, связанный с поглощением излучения только анализируемым веществом. Дальнейшая обработка сигнала детектора в соответствии с уравнением Кубелки — Мунка позволяет линеаризовать зависимость оптического сигнала от количества вещества в ТСХ. Поглощение света адсорбентом может быть учтено также при спектрофотометрическом сканировании пластины на просвет и отражение. Эти принципы реализованы в лучших современных зарубежных денситометрах — флуориметрах. Менее точным, но более простым решением является линеаризация зависимости сигнал — вещество с помощью двойного логарифмирования (с использованием ЭВМ). В результате этих усовершенствований воспроизводимость результатов в современной количественной ВЭТСХ приближается к 1%. Использование двухкоординатного сканирования в случае эллипсовидных пятен (двумерное размывание зон в ТСХ) и многошагового сканирования пятен неправильной формы (дву- [c.370]

Принципиально тот же метод применяли для определения 5— 10% рапсового масла в других пищевых маслах с точностью d=8% 59]. После гидролиза эруковую кислоту отделяли методом хроматографии на бумаге. После обработки хроматографического пятна этой кислоты радиореагентом его радиоактивность сравнивали с радиоактивностью пятна, полученного при анализе стандартной пробы этой кислоты. [c.231]

Вещество переносится в виде хроматографического пятна (зоны), концентрационные точки которого движутся со скоростью и, составляющей строго определенную долю от скорости движения элюента и и = Е и, где Rf — коэффициент, определяемый адсорбционными свойствами вещества и отношением объемов подвижной и неподвижной фаз. [c.80]

Исследование зависимости времени хроматографического процесса от диаметра зерна пористого сорбента (силикагеля) р и величины пробега элюента при заданном коэффициенте разделения (нанример, Кц = 2) показывает, что существует только одна пластинка с оптимальными величинами (1р и Вв, которая соответствует минимальному времени анализа. Рассмотрим вначале зависимость размывания хроматографического пятна вдоль движения элюента (0 ) от ( р и Дд. Поскольку и = В и, то (4) можно переписать в виде [c.82]

При использовании указанных методов на границах зон, узких в первом случае и более широких во втором, действуют условия обострения, и осуществляется элютивно (внутри зон) вытеснительный (на границах зон) хроматографический процесс. В результате при взаимодействии вещества с сорбентом создаются препятствия для перехода вещества из зоны в зону, хроматографические пятна сжимаются и концентрация вещества в максимуме пятна увеличивается. [c.86]

На основе развитых теоретических представлений была разработана количественная тонкослойная хроматография. Из всех возможных методов анализа выбран анализ по размерам хроматографического пятна [9], который хотя и не самый точный, но зато самый быстрый, не требующий для своего осуществления специального сложного оборудования. В этом случае для точного анализа необходимо иметь четкие границы исследуемых пятен, [c.89]

Если взять три пробы одного и того же вещества известного объема, то по размерам соответствующих хроматографических пятен можно построить прямую lgq =/ 1 , 1у)- В дальнейшем любое неизвестное количество этого же вещества можно определить из данного графика. В связи с трудностью (а иногда и невозможностью) точного нанесения строго постоянного объема пробы часто определяют не абсолютное количество вещества по формуле (10), а отношение количеств веществ в двух различных хроматографических пятнах. Логарифм такого отношения связан с размерами соответствующих пятен по формуле [c.90]

Хроматографическое размывание в ТСХ наблюдается как двумерное. В направлении элюции х действуют гидродинамические, диффузионные и кинетические факторы, а в направлении у, перпендикулярном к X, — только диффузионные. Поэтому, сравнивая размывание хроматографического пятна в продольном и поперечном направлениях, можно определить дисперсию о , связанную с неравновесной кинетикой процесса [c.256]

Влияние структуры слоя адсорбента на размывание хроматографического пятна. Структурная неоднородность по толщине адсорбционного слоя вносит дополнительный вклад в размывание хроматографического пятна. Этот вклад можно учесть, расширяя смысловое содержание диффузионных коэффициентов 2) , д и Д/, у таким образом, чтобы они отражали размывание, связанное с объединенной вихревой диффузией. Кроме того, можно рассчитать статистические моменты для уравнения (VII.9) при заданном градиенте по толщине слоя адсорбента. В случае ступенчатого профиля [c.261]

Рис. VII.5. Зависимость размывания хроматографического пятна ДНС-глицина o J—от квадрата толщины слоя при приготовлении слоя из разведенной (сплошные линии) и концентрированной (пунктирные линии) суспензий силикагеля КСК (Rg = 6 см)

Хроматографические пятна в ТСХ (при гауссовом распределении вещества в них) имеют форму эллипса [c.268]

При выполнении анализов методом элюционной ТСХ необходимо соблюдение ряда условий полное удаление (скарификация) сорбента с веществом в области хроматографического пятна, количественная элюция анализируемого вещества из сорбента при отсутствии элюции побочных веществ (например, загрязнений с сорбента и растворителей, используемых при хроматографировании) и точный анализ разбавленных растворов, элюируемых из сорбента. [c.268]

У П. 6. Методы количественного анализа тонкослойных хроматограмм, основанные на измерении распределения вещества в хроматографическом пятне [c.269]

Б этом случае хроматографическое пятно сканируется вдоль главных осей эллипса через его центр световым зондом малого диа- [c.270]

При сканирующей денситометрии точечным световым зондом необходимо выбрать оптимальный его размер. Показано [141, что размер зонда должен составлять 0,1 размера хроматографического пятна. [c.271]

Однокоординатная денситометрия высокой щелью. Сканирование хроматографической зоны высокой щелью связано с усреднением светового потока по ее площади. Поскольку в хроматографическом пятне вещество распределено неравномерно, а интенсивность проходящего света связана с концентрацией вещества экспоненциальной зависимостью, усреднение светового потока по площади щели не означает усреднения концентрации вещества [c.271]

При сканировании хроматографического пятна высокой щелью можно получить или распределение суммарной интенсивности света вдоль пятна, пли распределение оптической плотности, соответствующей усредненному по площади щели световому потоку (рис. УП.12). При интегрировании отношений суммарной интенсивности света, пропускаемого щелью при сканировании пятна, и соответствующей величины, связанной с пропусканием света через свободный от вещества слой сорбента, имеем [c.272]

Неоднородность светового потока минимальна при сканировании хроматографического пятна по главным осям эллипса и увеличивается по мере удаления от них. По этой причине метод многократного сканирования точечным зондом (с числом шагов п), когда результат измерения определяется выражением [c.273]

Обработка хроматограмм. Пластинки после хроматографирования высушивают на воздухе. Положение пятен некоторых бесцвет-рых веществ можно установить при рассмотрении пластинок в УФ-свете >. В большинстве случаев удается сделать хроматографические пятна види.мыми путем обработки их парами иода >. Вв щество проявляется в виде коричневого пятна или (реже) пр1г длительном действии паров иода в виде белого пятна на темнох фоне. Для проявления хроматограммы применяют, кроме того,, обработку парами брома, опрыскивание соответствующими реаген-тами (конц. серная кислота, хромовая кислота, раствор перманганата калия в серной кислоте и др.) или обугливание (нагревание пластинки при 300—400 °С). Пластинки с незакрепленным слоем целесообразно опрыскивать влажными, так как при опрыскивании их в сухом состоянии незакрепленный слой адсорбента может быть легко разрушен. [c.109]

Возможно определение количества вещества непосредственно в хроматографическом пятне путем его сканирования точечным зондом. Так, при изучении состава сополимеров старола с метилметакрилатом сканируют пятно с помощью ультрафиолетового детектора при длинах волн 225 и 265 нм в этой области поглощают только стирольные фрагменты макромолекул. [c.103]

Примером применения данного реагента, меченного изотопом является определение неомицинов А и В, а также неамина путем ацетилирования их первичных аминогрупп [99]. Для такого определения 10—20 мг пробы растворяют в 10 мл 0,01 н. водного раствора NaOH. К порции полученного раствора величиной 1 мл добавляют 0,1 мл 0,3 М водного раствора К2НРО4 и 0,1 мл (около 2 мэкв) уксусного-1- С ангидрида, имеющего удельную радиоактивность 50 мкКи/мл. Полученный раствор встряхивают в течение 30 мин, хотя на самом деле реакция завершается за гораздо меньшее время. Производные разделяют хроматографически на фильтровальной бумаге ватман № 40 в восходящем потоке растворителя, представляющего собой смесь 84 16 2 (по объему) / -бутанола, воды и пиперидина. Хроматографические пятна производных вырезают, помещают в закрытые камеры и в течение 2 ч нагревают при температуре 60 °С в присутствии 0,4 мл воды и 1,6 мл этанола. В полученный раствор добавляют раствор сцинтиллятора в смеси растворителей и измеряют радиоактивности растворов в камерах. По результатам этих измерений и по данным анализов стандартных проб анализируемых аминосоединений определяют содержание каждого из анализируемых соединений в пробе. [c.313]

Способ оценки хроматограмм в тонких слоях, состоящий в опрыскивании окрашивающим реактивом с последующей экстракцией окрашенных веществ и фотометрическим определением, часто вызывает трудности, как и в случае хроматографии на бумаге. Соотношение концентраций реактива и определяемого вещества различно в центре и у края хроматографического пятна, поэтому ход реакции может быть различным. Часто также образующиеся окрашенные вещества экстрагируются значительно труднее, чем сами разделенные вещества. Кроме того, сам слой часто также окрашивается реактивом, вследствие чего возникает необходимость учета фона. Наоборот, локализация путем окраски разделенных веществ может применяться без огово--рок, если на последующее количественное определение, например методом газовой хроматографии (ср. стр. 63), используемый для опрыскивания реактив не влияет. [c.59]

В основе этого лежат следующие физические явления при уменьшении размера зерна надают сопротивление массонереда-че и, следовательно, влияние кинетических факторов на размывание пятна одновременно вследствие увеличения гидродинамического сопротивления слоя уменьшается скорость движения жидкости, увеличивается время опыта, а следовательно, и диффузионное размывание в подвижной фазе. Очевидно, что должен быть оптимальный размер зерна, когда суммарное влияние обоих факторов на размывание хроматографического пятна будет минимальным. [c.83]

При определении микропримесей, когда макрокомпонент идет первым, выгодно для уменьшения концентрационных эффектов понизить концентрацию макрокомпонента в максимуме. Для этого используют метод г с размыванием хроматографического пятна в поперечном направлении. Последнее осуществляется при использовании тонкослойных пластинок такой геометрической формы, когда в определенной зоне поток элюента направлен под углом к направлению движения разделяемых компонентов. Эти условия, например, достигаются, когда сорбент нанесен на пластинку в виде конуса с вершиной в точке старта (рис. 2). [c.87]

Рис. VII.9. Зависимость времени анализа t = X-10 , с) ), длины пластинки (L == X, см) (2) и дисперсии хроматографического пятна (a = X-IO , см ) (S) от относительной координаты начальной зоны (LqIL) при dp = опт и Hf = Rf, ОПТ (пярэмвтры опыта-те же, что на рис, VII.7).

Наибольший интерес представляет собственно полизональная тех. Поскольку при разделении элюента на зоны состав элюента в каждой зоне различен, то в зависимости от подвижности вещества в зоне i /(а), Rf (fj), Rf (у) и подвижности границ зон, описываемых сномощью величин, эквивалентных Rf R (а), Rz (р), Rz у)), вещество может двигаться только в а-зоне, а- и Р-зонах или а-, Р- и 7-зонах. Тогда положение хроматографического пятна Sx-, [c.265]

Для полного удаления сорбента в области хроматографического пятна необходимо точно установить положепис пятна на пластинке. С этой целью можно предварительно определять Rf анализируемых веществ на отдельной хроматограмме или детектировать хроматографические зоны непосредственно па анализируемой пластинке, например, по гашению люминесценции введенного в адсорбент люминофора или другими методами. [c.268]

Измерение распределения вещества в хроматографическом пятне можно проводить различными методами чаще методами фотометрии (денситометрии) и флюориметрии, а также с помощью пламенно-иопизационного детектора [29], измерения радиоактивного излучения [30], электропроводности [20]. [c.269]

Денситометрическое определение вещества в хроматографическом слое осложняется диффузионным рассеянием света на зернах сорбента. Прохождение и отражение света в сильно рассеивающих средах описываются сложными интегро-дифференциальными уравнениями [31], которые в общем случае не имеют аналитических решений. На практике обычно используют приближенные уравнения. Одним из таких приближений являются дифференциальные уравнения, полученные Кубелкой и Мунком [32]. Эти уравнения были положены в основу работ по теории денситометри-ческого анализа тонкослойных хроматограмм [33]. На основе решений системы дифференциальных уравнений для проходящего и отраженного света при введении ряда упрощающих предположений была получена связь концентрации вещества с (х, у) в точке х, у) хроматографического пятна с поглощением и рассеянием света в этой области [c.270]

Рис. У//. 2." Денситометрия хроматографического пятна высокой щелью (высото 2Ь) вдоль пятна а — распределение светового потока по ОСИ ос б —Iраспределение логарифма суммарного светового потока по оси зс.

Флюориметрический метод количественной тонкоспойной хроматографии является наиболее чувствительным методом анализа [211. Он включает три разновидности метода, связанные с измерением нативной флюоресценции, с измерением флюоресценции комплексов исследуемого вещества с флюорогенным реагентом (с обработкой реагентом до и после хроматографирования пластинки), с измерением гашения флюоресценции введенного в хроматографическую пластинку флюорохрома в области хроматографического пятна за счет поглощения света возбуждения анализируемым веществом. [c.274]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология