Иммобилизованные ферменты стабильность

Для промышленных целей иммобилизуют ферменты в основном микробного происхождения ввиду их доступности, дешевизны (они в 100 раз дешевле, чем ферменты животного и растительного происхождения), независимости массового производства от сезона вегетации растений или сроков выращивания животных, короткого периода накопления бактериальной массы для вьщеления ферментов. Важно, что иммобилизация, как правило, сопровождается повышением в тысячи и десятки тысяч раз стабильности ферментов, что создает условия для их использования в качестве гетерогенных катализаторов. Кроме того, механическое изменение матрицы, на которой закреплен фермент, открывает возможность варьировать его активность и понять принцип работы природных механохимических систем. [c.141]

Антитела к тестируемому компоненту вначале иммобилизуют на поверхности фильтровальной бумаги. Фильтры с антителами вставляют в пластиковые рамки и помещают в соответствующие ячейки для последующего их автоматического перемещения. После высушивания эти фильтры достаточно стабильны. Как показано на рис. 20-1, их можно использовать для проведения трех вариантов анализа. При последовательном анализе образцы, содержащие искомый антиген, наносят на сухие фильтры на 2 мин. Затем добавляют избыток конъюгата тестируемого антигена с ферментом для насыщения всех непрореагировавших центров связывания, оставшихся на поверхности фильтра. Спустя 3 мин в центр фильтра наносят раствор субстрата таким образом, чтобы избыток не связавшегося с антителами конъюгата вымывался по принципу радиальной хроматографии. Последний этап является ключевым для данного метода ИФА и общим для всех трех вариантов анализа. [c.298]

Для удобства применения холинэстеразы иммобилизуют в по.шмер-ные пленки или гели. При этом существенно увеличивается устойчивость фермента к влиянию внешних факторов. Так, при иммобилизагщи холинэстеразы в желатиновый гель срок ее хранения составляет 2-3 года, а при непрерьганой работе активность препарата падает на 20% лишь через 10 дней. Наряд) с повьпиением стабильности иммобилизация хо.пинэстераз обеспечивает многократное использование препарата. Заметим, что при определении необратимых ингибиторов, например фосфорорганических пестицидов, повторное использование фермента в каждом случае требует специальных исследований В качестве реактиваторов применяют гидро-ксиламин, оксимы и др [c.290]

В основе принципа аффинной хроматографии лежит отличительная особенность биологически активных веществ образовывать стабильные, специфические и обратимые комплексы. Если иммобилизовать один из компонентов комплекса, то получится специфический сорбент для второго его компонента, при этом, разумеется, предполагается, что соблюдаются все условия, необ.ходимые для образования этого комплекса. Связывающие участки иммобилизованных веществ должны сохранять хорошую стерическую доступность для второго участника комплекса даже после связывания с нерастворимым носителем и не должны деформироваться. Примерами первых специфических сорбентов, приготовленных путем ковалентного связывания с нерастворимым носителем, были иммобилизованные антигены (Кемпбелл и др. [5]) . Методы, созданные для присоединения антигенов и антител к нерастворимым носителям, были сразу же применены для получения иммобилизованных ферментов. В то же время ранее предложенный азидный способ привязки ферментов к целлюлозе [25] стал использоваться для приготовления иммуносорбентов. Параллельное развитие обоих направлений, основанных на использовании связывания биологически активных веществ с нерастворимыми носителями, наглядно демонстрируют названия первых обзорных статей Реакционноспособные полимеры и их использование для приготовления смол с антителами и ферментами (Манеке [23]), Водонерастворимые производные ферментов, антигенов и антител (Сильман и Качальский [39]) и Химия и использование производных целлюлозы для изучения биологических систем (Великий и Витол [47]). Оба направления продолжали развиваться параллельно и после открытия других более эффективных носителей и разработки методов связывания, позволяющих сохранять свойства иммобилизуемых веществ в растворе. [c.11]

Отверстия диаметром около 30 мкм в непроницаемой защите, которая разделяет раствор глюкозы от Р1-катода, заполняются капельками раствора мономер — энзим. Затем проходит полимеризация в бескислородной атмосфере. Природа полимерной матрицы существенно влияет на стабильность и продуктивность фермента. Глюкозооксидаза иммобилизуется также внутри ацетатцеллюлозной мембраны непосредственно на платиновом конце Ог-элек-трода [5]. Подход, альтернативный определению глюкозы амперометрическим измерением потребления кислорода, заключается в превращении глюкозы в молочную кислоту, концентрация которой может быть определена рН-элек-тродами. Обычная зубная бляшка может обеспечить энзимами бактериальные электроды, которые реагируют на гексозы и пентозы [6]. [c.85]

Водный раствор фермента, использующийся для получения микрокапсул, должен содержать инертный белок (обычно гемоглобин) в концентрации около 10%, который обеспечивает в микрокапсулах необходимое внутреннее давление и стабилизирует фермент. Для повышения стабильности микрокапсулирован-ного фермента его нередко подвергают также обработке глутаровым альдегидом, приводящей к образованию внутри микрокапсул белковых полимеров. Кроме того, более высокой стабильности можно добиться, если перед микрокапсулированием фермент предварительно иммобилизовать путем адсорбции на носителе, включения в гель или другим способом. у [c.68]

Как уже говорилось, некоторые ферменты инактивируются вследствие окисления кислородом воздуха высокореакционноспособных функциональных групп их активного центра и в первую очередь SH-rpynn. Такую инактивацию также удается подавить методами иммобилизации. Для этого фермент иммобилизуют в полиэлектролитной матрице, обладающей способностью высаливать кислород. В результате фермент экранирован от контакта с инактиватором и стабильность его по отношению к окислению становится существенно выше, чем у неиммоби-лизованного. [c.127]

В идеале поверхность иммунореактивной индикаторной полоски должна быть однородной, не склонной к неспецифическим взаимодействиям и пригодной для контролируемой иммобилизации различных веществ с помощью удобных методов. В качестве матрицы для ковалентной иммобилизации реагентов мы выбрали листы хроматографической целлюлозы, так как они обладают подходящими химическими и физическими характеристиками. Целлюлоза гидрофильна, достаточно однородна, ей несвойственно неспецифическое связывание. Кроме того, она доступна в виде листов разной толщины и плотности. На целлюлозе с помощью целого ряда хорошо отработанных методов (Lilly, 1976) можно иммобилизовать большие количества ферментов и антител. Это позволяет получать индикаторные полоски, обладающие высокой стабильностью и иммунологической активностью. [c.132]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология