Капилляры для микроэлектрофорез

Недостатком метода микроэлектрофореза является то, что на электрофоретическую скорость частиц может налагаться скорость электроосмотического потока дисперсионной среды, достигающей заметной величины вследствие малого сечения капилляра микрокамеры. При наличии электроосмоса наблюдаемая скорость передвижения частиц в электрическом поле изменяется по глубине камеры, так как она слагается из истинной электрофоретической скорости частиц и скорости движения жидкости. [c.200]

Исследование электрических свойств клеток проводится с помощью микроэлектрофореза, позволяющего наблюдать за движением отдельных частиц (рис. 39). Изучаемую суспензию помещают в сосуды 2, из которых происходит заполнение толстостенного капилляра 6. Для предотвращения попадания частиц и макромолекул в электролит электродов 3 используются мембраны 7. Наблюдение за движением частиц проводится с помощью микроскопа /. [c.99]

В случае частиц размерами 0,5—2 мк и при отсутствии их заметного осаждения используется либо этот же метод, либо метод микроэлектрофореза , который основан на измерении скорости отдельных частиц в капилляре или плоской камере, помещенной под объектив микроскопа. С помощью окулярмикрометра и секундомера определяется путь, пройденный отдельной частицей за определенный отрезок времени. [c.200]

Заполняют капиллярные трубки погружением в жидкую реакционную смесь, приготовленную для получения ПААГ. Под действием капиллярных сил жидкость заполняет трубки. При достижении специальной отметки капилляр сверху плотно закрывают и переносят в емкость с раствором смеси белков, подвергаемых электрофоретическому анализу. После погружения нижнего. конца капилляра в раствор и открытия верхнего конца происходит полное заполнение капилляра. Заполненные таким образом капиллярные трубки помещают в аппарат для микроэлектрофореза. При создании электрического поля в аппарате происходит разделение белков в соответствии с величиной заряда, размером и формой макромолекул. [c.66]

Электрофорез, т. е. движение частиц дисперсной фазы под действием внешнего электрического поля, чаще всего проходит в неподвижной жидкости ТОЛ1.КО при наблюдении электрофореза в тонких плоских зазорах или в капиллярах (микроэлектрофорез) движение частиц происходит в жидкости, перемещающейся вследствие электроосмоса. Если сравнительно крупные неэлектропроводные частицы находятся в умеренно разбавленном растворе электролита, то отношение радиуса частицы г к толщине ионной атмосферы [c.191]

Рассмотрим подробнее особенности электрофоретического движения частиц дисперсной фазы и другие электрические.снойства свободноднсперсных систем. Электрофорез чаиле всего проходит в неподвижной жидкости только при электрофорезе в тонких плоских зазорах или в капиллярах (микроэлектрофорез) движение частиц происходит в жидкости, перемещающейся вследствие электроосмоса. Если сравнительно крупные неэлектропроводные частицы находятся в умеренно разбавле(шом растворе электролита, то отношение радиуса частицы г к толщине ионной атмосферы значительно больше единицы г/5 = гег ]. Внешнее электрическое поле при этом (см. рис. VII-9) огибает частицы и на большей части поверхности параллельно ей. В таком случае скорость движения частиц Vq с достаточной точностью описывается уравнением Гельмгольца Смол тювского. [c.238]

За последние пять лет преимущество разделения белков при помощи микрометодов получило общее признание. В 1965 г. Гроссбах [1] описал модификацию диск-электрофореза на полиакриламидном геле для определения 10 г количеств белка с помощью стеклянных капилляров. В 1966 г. авторы этой главы предложили микрометод разделения белка в количествах 10 — 10 г при использовании полиакриламидного геля в стеклянных капиллярах, имеющих диаметр 200 мк [2]. В 1967 г. Фельген-хауер [3] описал подобный метод для разделения 10—30 мкг белка с разрешающей способностью 1—3 мкг для одного белка. Гофман [4] для микроэлектрофореза белков вместо стеклянных капилляров применил плексигласовую камеру. [c.277]

При диск-микроэлектрофорезе, как и при любом электрофорезе с применением поддерживающей среды, надо учитывать некоторые факторы, которые могут стать источником ошибок. Всегда можно принять, что между гелем и внутренней поверхностью стенок трубки существует слой жидкости, по которому может течь поток молекул. Йертен [21] показал, что если стенки стеклянного капилляра покрыть раствором метилцеллюлозы, имеющей вязкость 100 сП, то электроэндоосмос полностью ликвидируется. Поэтому авторы этой главы рекомендуют покрывать капилляры тонким слоем метилцеллюлозы. [c.284]

Метод фракционирования белков на микроколонке с сефадексом G-200 с последующим микроэлектрофорезом в полиакриламидном геле, разработанный нами совместно с Д. Ф. Мешвелишвили, дает возможность судить о фракционном составе белков нейронов. Мы брали экстракт го-могената в количестве 20 мкл, лиофилизировали до объема 2—2.5 мкл и количественно переносили в капилляры для электрофореза объемом 5 мкл. По предварительным данным, выделено 8 колоночных и приблизительно 40 электрофоретических фракций растворимых белков пирамидных нейронов гиппокампа крыс. К сол алению, и эти результаты не дают полного представления о белках нервных клеток. Фактически вопрос о фракционном составе белков индивидуальных нейронов и пейроглии остается открытым. [c.137]

Описан прибор для электрофореза в полиакриламидном геле, предназначенный для исследования малых количеств белков мозга [1042]. В нем используются микроячейки (размером 1,8X1.0X70 мм), позволяющие изучать белки, содержащиеся в 0,8—2 мг ткани. Для уменьшения необходимого для анализа количества материала применяют капилляры с внутренним диаметром 1—1,5 мм [132, 369, 1058]. Однако все эти приемы не достигают уровня настоящего микроэлектрофореза, при использовании которого требуется лишь 10- —г вещества. [c.107]

Источники ошибок при микроэлектрофорезе в геле. В плохо отмытых или силиконизированных капиллярах нередко возникают искусственные зоны и другие артефакты. Следы ацетона, очень быстрая полимеризация, а также слишком большие концентрации акриламида или бис-акриламида вызывают помутнение гелей. При недостаточно аккуратном приготовлении геля ИЛИ при использовании чрезмерно высоких градиентов напряжения в геле образуются пузырьки воздуха. Если исходный раствор акриламида не был предварительно нагрет до комнатной температуры, то он может закристаллизоваться внутри капилляра, особенно в тех зонах градиентных гелей, где акриламид содержится в высоких концентрациях. [c.112]

Основным недостатком электрофореза в трубках является затрудненный отвод тепла даже при диаметре 5 мм. На оси геля температура оказывается выше, чем у его прилегающей к стеклу поверхности. Это приводит к изгибу зон и соответственно окрашенных полос, поскольку электрофоретическая подвижность зависит от температуры. В условиях хорошего теплоотвода можно вести микроэлектрофорез в стеклянных капиллярах диаметром 0,7—1,5 мм ondeelis, 1977]. [c.25]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология