Флуоресцеин изоцианат

Очень широкое применение нашли производные флуоресцеина и родамина в иммуноцитохимии. Для этой цели используют реакции флуоресцентных метчиков с белками-антителами и затем по люминесценции метчика судят о путях распространения антител в организме. Впервые метод флуоресцентной метки антител был описан Кунсом й др. [19], предложившими в качестве метчика флуоресцеин-изоцианат. В дальнейшем для метки белков были предложены и [c.291]

Для люминесцентной метки белков применяют флуорохромы изоцианат и изотиоцианат флуоресцеина, некоторые производные родамина, в том числе изоцианат тетраметилродамина, хлорид диметил-нафтил-ами-но-сульфокислоты и ядерный красный прочный. Наиболее широко используется изоцианат флуоресцеина. Его растворяют в смеси диоксана с ацетоном и в таком виде соединяют с белком (обычно глобулиновой фракцией в количестве 5 мг флуорохрома на 100 мг белка) при температуре О—5° С, перемешивая в течение 18 часов. Полученный коньюгат белка с флуоресцеином освобождают от несвязавшегося красителя сначала с помощью диализа против забуференного при рН=9,0 физиологического раствора. Дальнейшая очистка от избыточного красителя производится переосаж-дением белка сульфатом аммония (4—5 раз), пока надосадочная жидкость не перестает люминесцировать. Препараты (мазки, суспензии, замороженные срезы), как фиксированные ацетоном, так и нефиксированные, приводят в соприкосновение с люминесцентно-меченым белком в течение 30 минут, промывают в физиологическом растворе (рН=7ч-7,5) и заключают в забу-ференный глицерин. Исследовать такие препараты лучше при ультрафиолетовом возбуждении. Соответствующие антигены при этом люминесцируют очень ярко светло-зеленым светом. Этот метод позволяет определять внутриклеточную локализацию чужеродных полисахаридов и белков, ферментов и гормонов, устанавливать антигенное родство тканей и клеток, быстро идентифицировать под микроскопом бактерии й вирусы. [c.317]

Метод применялся главным образом для определения размеров больших молекул, например белков. Обычная процедура состоит в обработке белка флуоресцирующим реагентом, необратимая реакция с которым дает флуоресцирующую полимерную молекулу. Нужные реагенты чаще всего получают, вводя изоцианатные, изотиоцианатные или сульфохлоридные группы в обычные флуоресцирующие соединения. Хорошо взаимодействуют с белком, например, изоцианаты флуоресцеина, родамина Б и антрацена. Флуоресцирующие изоцианаты необратимо реагируют со свободными амино- или сульфгидрильными группами белка. Очевидно, что и реагенты и условия реакции следует подбирать так, чтобы размер и физическое строение молекулы белка изменялись в минимальной степени. Обычно времена жизни полученных этим способом флуоресцирующих конъюгатов белков близки к временам жизни простых флуоресцирующих молекул. Подробные данные о методике и ее применении можно найти в обзоре [308]. [c.373]

Найти методы характеристики люм И.несцентных свойств флуоресцеин,изоцианата, дающие возможность оценить качество того или иного образца. [c.290]

Метиленовый голубой, тиофлавин, родамин Б, бенгальский розовый, магдаловый красный и некоторые другие красители, растворяясь в липидах, вызывают вторичную флуоресценцию акридиновый оранжевый позволяет отличать живую протоплазму от мертвой, вызывая у первой зеленую, а у второй — красную флуоресценцию изоцианаты и изотиоцианаты флуоресцеина, родамина Б и другие используются для флуоресцентной метки белка. Кроме указанных красителей, в флуоресцентной микроскопии применяют акридиновый желтый, аурамин, конго красный, титановый желтый, фуксин кислый, хризоидин, эозины, пиразолоновый желтый, эритрозин и др. [c.57]

Среди многочисленных работ в области реагентов для гистохимии и микробиологии (Г. И. Михайлов, А. А. Прянишников с сотрудниками) следует особо отметить новые оригинальные методы получения хроматографически чистых флуо-рохромов для метки белков (изоцианат флуоресцеина, изо-тиоцианат родамина В и др.) и исходных соединений для их синтеза (нитрофлуоресцеина и аминофлуоресцеина), а также работы по синтезу новых бистетразолиевых солей (В. М. Островская). [c.25]

Известны (Хроматографические методы разделения изомеров аминофлуоресцеина, поэтому мы попытались установить степень Ч1ИСТ0ТЫ изоцианата, используя хроматографический метод с применением окиси алюминия. Хотя при этом и оказалось, что примесь в изоцианате можно обнаружить при непосредственном рассматривании хроматографической колонки в ультрафиолетовом свете, идентифицировать примесь не удалось . Пришлось идти по пути сравнения люминесцентных свойств флуоресцеинизоцианата, аминофлуоресцеина, нитрофлуоресцеина и флуоресцеина в различных средах. Выл взят флуоресцеин, от- [c.290]

Метиленовый голубой, тиофлавин, родамин Б, бенгальский розовый, магдаловый красный и некоторые другие, растворяясь в липидах, дают вторичную флуоресценцию акридиновый оранжевый позволяет отличать живую протоплазму от мертвой, вызывая у первой зеленую, а у второй — красную флуоресценцию изоцианаты и изотиоцианаты флуоресцеина, родамина Б и другие используют для флуоресцентной метки белков. [c.48]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология